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चूहों में गर्भाशय प्रत्यारोपण के लिए सर्जिकल दृष्टिकोण, चुनौतियां और संकल्प

Published: April 14, 2023 doi: 10.3791/64757
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Swiss HPB Laboratory, Department of Visceral & Transplant Surgery, University Hospital Zürich

Summary

वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में सफल गर्भाशय प्रत्यारोपण (यूटीएक्स) के लिए सभी आवश्यक चरणों का वर्णन करता है। चूहे का मॉडल यूटीएक्स के नैदानिक कार्यान्वयन को बढ़ावा देने के लिए उपयुक्त साबित हुआ है; हालांकि, चूहा यूटीएक्स एक अत्यधिक जटिल प्रक्रिया है जिसमें सावधानीपूर्वक निर्देशों की आवश्यकता होती है।

Abstract

गर्भाशय प्रत्यारोपण (यूटीएक्स) पूर्ण गर्भाशय कारक बांझपन (एयूएफआई) के साथ महिलाओं के इलाज के लिए एक नया दृष्टिकोण है। अनुमानित 3% -5% महिलाएं AUFI से पीड़ित हैं। इन महिलाओं को यूटीएक्स के आगमन तक बच्चे पैदा करने के विकल्प से वंचित किया गया था। यूटीएक्स का नैदानिक अनुप्रयोग जानवरों में प्रयोगात्मक अध्ययनों द्वारा संचालित किया गया था, और पहला सफल यूटीएक्स चूहों में हासिल किया गया था। उनकी शारीरिक, प्रतिरक्षाविज्ञानी, आनुवंशिक और प्रजनन विशेषताओं को देखते हुए, चूहे ऐसे प्रत्यारोपण के लिए एक उपयुक्त मॉडल प्रणाली हैं। विशेष रूप से, उनकी छोटी गर्भधारण अवधि एक स्पष्ट लाभ है, क्योंकि प्रयोगात्मक यूटीएक्स का सामान्य समापन बिंदु जीवित जन्म के साथ सफल गर्भावस्था है। चूहे के मॉडल के लिए सबसे बड़ी चुनौती छोटी शारीरिक रचना बनी हुई है, जिसके लिए उन्नत माइक्रोसर्जिकल कौशल और अनुभव की आवश्यकता होती है। यद्यपि यूटीएक्स ने क्लिनिक में गर्भावस्था का नेतृत्व किया है, प्रक्रिया स्थापित नहीं है और निरंतर प्रयोगात्मक अनुकूलन की आवश्यकता है। यहां, एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है, जिसमें चूहे यूटीएक्स के लिए आवश्यक समस्या निवारण शामिल है, जिससे इस प्रकार के माइक्रोसर्जरी में अनुभव के बिना उन लोगों के लिए पूरी प्रक्रिया को समझना आसान बनाने की उम्मीद है।

Introduction

गर्भाशय प्रत्यारोपण (यूटीएक्स) पूर्ण गर्भाशय कारक बांझपन (एयूएफआई) के लिए एक नया उपचार है। AUFI गर्भाशय की अनुपस्थिति (जन्मजात या अधिग्रहित) या विकृति से उत्पन्न होता हैऔर दुनिया भर में 3% -5% महिलाओं को प्रभावित करता है। नैतिक, कानूनी या धार्मिक कारणों से कई महिलाओं के लिए गोद लेने या सरोगेसी से इनकार किया जाता है जो मातृत्व की इच्छा रखते हैं लेकिन एयूएफआई2 से पीड़ित हैं। इन महिलाओं के लिए, यूटीएक्स अपना परिवार शुरू करने का एकमात्र विकल्प बना हुआ है। यूटीएक्स को क्लिनिक में लागू किया गया है, हालांकि मिश्रित सफलता के साथ; प्रक्रिया तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है और इसकी नैदानिक स्थापना के लिए लगातार सुधार की आवश्यकता है।

2014 में, एक जीवित दाता (एलडी) से गर्भाशय का पहला प्रत्यारोपण - जिसके परिणामस्वरूप सफल गर्भावस्था हुई - ब्रैनस्ट्रॉम3 के अग्रणी स्वीडिश समूह द्वारा किया गया था। एक मृत दाता (डीडी) से यूटीएक्स के बाद पहला जन्म 2016में ब्राजील 4 में रिपोर्ट किया गया था। 2021 तक, दुनिया भर में 80 से अधिक यूटीएक्स का प्रदर्शन किया गया है, हालांकि लगभग 50% की सफलता दर के साथ और बहुमत1 के लिए एलडी से आने वाले ग्राफ्ट के साथ।

हालांकि जीवन रक्षक नहीं, यूटीएक्स अपनी संतान की इच्छाओं को पूरा करने के लिए एक तेजी से लोकप्रिय प्रक्रिया है। इस तरह, ग्राफ्ट की मांग बढ़ रही है, जिससे डीडी दान को भविष्य के फोकस में रखा जा रहा है। हालांकि, डीडी दान काफी लंबे समय तक ठंड (और हृदय की मृत्यु के मामले में, गर्म) इस्केमिक एक्सपोजर के कारण जटिल है, जिससे ग्राफ्ट डिसफंक्शन और अस्वीकृतिके जोखिम 5,6 बढ़ जाते हैं। सर्जिकल तकनीक, संगतता मिलान की मांग, और संबंधित इम्यूनोसप्रेशन यूटीएक्सपरिणामों के बारे में महत्वपूर्ण मुद्दे बने हुए हैं।

क्लिनिक में उपरोक्त जोखिमों का प्रबंधन करने के लिए, इस्किमिया और इम्यूनोसप्रेशन की खोज के लिए उपयुक्त पशु मॉडल की आवश्यकता होती है। पशु मॉडल के लिए सबसे चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक समापन बिंदु सफल जन्म रहता है; आज तक, प्रयोगात्मक यूटीएक्स के बाद गर्भधारण चूहों, चूहों, भेड़, खरगोशों और सिनोमोलगस बंदरों में हासिल किया गयाहै। जबकि बड़े जानवरों को शल्य चिकित्सा तकनीकों को प्राप्त करने और अनुकूलित करने के लिए पूर्वनिर्धारित किया जाता है, कृन्तकों को कम गर्भधारण अवधि के विशिष्ट लाभ के साथ आते हैं। इसलिए, कृंतक मॉडल व्यावहारिक, वित्तीय और नैतिकविचारों के बारे में बेहतर हैं। हालांकि, चूहों में यूटीएक्स की मुख्य चुनौती छोटी शारीरिक रचना है, जिसमें अत्यधिक मांग वाली सर्जरी मुराइन यूटीएक्स10 की कम प्रजनन क्षमता से जुड़ी है। इसके विपरीत, चूहे शल्य चिकित्सा से अधिक सुलभ होते हैं और कम गर्भधारण के समय के फायदे को बनाए रखते हैं। जैसे, चूहा यूटीएक्स9 के लिए पसंद का मॉडल बन गया है। रैनिंग एट अल ने 2008 में ऑर्थोटोपिक यूटीएक्स के चूहे मॉडल को पेश किया, और इस मॉडल का उपयोग करके, यूटीएक्स और प्राकृतिक संभोग के बाद पहला जीवित जन्म11,12,13 बताया गया है। बाद के अध्ययनों में मनुष्यों में यूटीएक्स के कार्यान्वयन में महत्वपूर्ण योगदान रहाहै।

बहरहाल, चूहों में यूटीएक्स चुनौतीपूर्ण बना हुआ है, और अभी तक केवल कुछ समूहों ने इस सर्जिकल तकनीक में महारत हासिल की है। शोधकर्ताओं के बीच चूहे यूटीएक्स के प्रसार के लिए एक प्रासंगिक बाधा व्यक्तिगत माइक्रोसर्जिकल चरणों, नुकसान औरसमस्या निवारण के उपायों के सटीक विवरण की कमी है। इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य भविष्य के अनुसंधान में इस पशु मॉडल के कार्यान्वयन को सुविधाजनक बनाने के लिए इस अत्यधिक जटिल माइक्रोसर्जिकल प्रक्रिया के लिए एक विस्तृत मार्गदर्शिका प्रदान करना है।

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Protocol

सभी पशु प्रयोग स्विस संघीय पशु विनियमों का पालन करते हुए किए गए थे और ज्यूरिख के पशु चिकित्सा कार्यालय (एन ° 225/2019) द्वारा अनुमोदित किए गए थे, जो मानव देखभाल का आश्वासन देते हैं। मादा कुंवारी लुईस चूहों (170-200 ग्राम के शरीर का वजन) और महिला कुंवारी ब्राउन नॉर्वे चूहों (170-200 ग्राम) को गर्भाशय दाताओं / प्राप्तकर्ताओं के रूप में इस्तेमाल किया गया था, जबकि पुरुष लुईस चूहों (300-320 ग्राम) का उपयोग संभोग के लिए किया गया था। चूहों की उम्र 12-15 महीने के बीच थी। जानवरों को वाणिज्यिक स्रोतों से प्राप्त किया गया था ( सामग्री की तालिका देखें) और उन्हें नियंत्रित परिस्थितियों और पानी और मानक भोजन तक मुफ्त पहुंच के साथ एक समृद्ध वातावरण में रखा गया था।

1. गर्भाशय पुनर्प्राप्ति

नोट: प्रक्रिया के विवरण के लिए, कृपया पहले प्रकाशित रिपोर्ट12,13,15 देखें।

  1. 1-2 मिनट (ओ2 में 5 वॉल्यूम% आइसोफ्लुरेन) के लिए एक संलग्न प्लेक्सीग्लास कंटेनर (14 सेमी x 25 सेमी x 13 सेमी) के भीतर आइसोफ्लुरेन और ऑक्सीजन के साथ संज्ञाहरण को प्रेरित करें।
    1. सर्जरी से 30 मिनट पहले नियोजित पेट चीरा के क्षेत्र में चमड़े के नीचे (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) और बुपिवैकेन (0.5%, 8 मिलीग्राम / किग्रा) को चमड़े के नीचे प्रशासित करें।
    2. चूहे के पेट की सभी त्वचा को इलेक्ट्रिक शेवर से शेव करें।
    3. सर्जरी के दौरान जानवर को हीटिंग प्लेट पर स्थिर रखने के लिए टेप का उपयोग करें। दोनों आंखों पर आंखों का मरहम लगाएं।
    4. एक छोटी नाक शंकु के माध्यम से निरंतर प्रशासन द्वारा ऑक्सीजन में 2-4 वॉल्यूम% आइसोफ्लुरेन के साथ प्रक्रिया के दौरान संज्ञाहरण बनाए रखें।
    5. विशेष उपकरणों के बिना नैदानिक मापदंडों द्वारा एनेस्थेटिक गहराई की निगरानी करें (~ 70-120 / मिनट की श्वसन दर - संज्ञाहरण के दौरान 50% की धीमी दर गिरावट स्वीकार्य है; पैर की अंगुली चुटकी के साथ एनेस्थेटिक गहराई की जांच करना; श्लेष्म झिल्ली का रंग गुलाबी होना चाहिए, नीला या ग्रे नहीं)16, और तदनुसार आइसोफ्लुरेन एकाग्रता को समायोजित करें।
      नोट: वैकल्पिक: सर्जरी के दौरान लगातार श्वसन निगरानी एक सहायक की मदद से संभव है।
    6. पैर की अंगुली की चुटकी करके एनेस्थेटिक गहराई की पुष्टि करें।
    7. पेट की त्वचा को एक एंटीसेप्टिक घोल के तीन वैकल्पिक स्वैब और 70% अल्कोहल के साथ गोलाकार गति में साफ करें। सूखने दें।
    8. जानवर के ऊपर पेट की खिड़की के साथ एक बाँझ ड्रेप ( सामग्री की तालिका देखें) रखें।
  2. माध्य लैप्रोटॉमी करें।
    1. पेट को 6-8 सेमी मध्य रेखा लंबे चीरे के माध्यम से खोलें, जो हाइपोगैस्ट्रियम की ओर जिफिस्टरनम से 0.5 सेमी नीचे शुरू होता है। त्वचा चीरा के लिए नंबर 10 स्केलपेल और लिनिया अल्बा चीरा के लिए छोटी तेज कैंची का उपयोग करें। जिगर या मूत्राशय को नुकसान न पहुंचाएं।
    2. कपास के फाहे का उपयोग करके आंतों को पेट की गुहा के बाहर ले जाएं, उन्हें बाँझ खारा के साथ नम धुंध के साथ धीरे से कवर करें, और बेहतर इन्सुलेशन के लिए उन्हें बाँझ प्लास्टिक बैग से बचाएं।
    3. गर्भाशय और संबंधित वाहिकाओं की इष्टतम पहुंच और दृश्यता प्राप्त करने के लिए, पेरिटोनियल मांसपेशियों को एक तरफ और पेट को खुला रखने के लिए बाएं और दाएं पेट की दीवार फ़ोल्डरों पर रिट्रैक्टर या क्लिप (सामग्री की तालिका देखें) डालें। टेप के साथ क्लिप / रिट्रैक्टर को ठीक करें।
    4. सर्जिकल क्षेत्र और आंतों को नम रखने और विसरा के सूखने से बचने के लिए पहले से गर्म खारा लगाएं।
  3. सामान्य गर्भाशय गुहा और गर्भाशय ग्रीवा प्लस संवहनी पेडिकल्स के साथ दाहिने गर्भाशय के सींग की कटाई करें, जिसमें दाएं गर्भाशय, आंतरिक और सामान्य इलियाक वाहिकाएं शामिल हैं।
    1. लिगेट (4/0 पॉलीग्लाक्टिन; सामग्री की तालिका देखें), सामान्य गर्भाशय गुहा से शाखाओं से सटे बाएं गर्भाशय के सींग को काटें और अलग करें।
    2. गर्भाशय और योनि के आसपास की अतिरिक्त वसा को हटा दें।
      नोट: गर्भाशय-संवहनी प्रणाली के आसपास वसा रखें।
    3. मूत्राशय को गर्भाशय ग्रीवा से इसके जुड़ाव पर विच्छेदित करें, जिसमें मूत्राशय की सभी नाली और खिलाने वाली वाहिकाओं का संयोजन किया जाए। गर्भाशय ग्रीवा और योनि के बीच पर्याप्त दूरी बनाए रखें, ताकि इन दो संरचनाओं पर अनावश्यक दबाव से बचा जा सके। अन्यथा, ग्राफ्ट नेक्रोसिस का खतरा बढ़ जाता है।
      नोट: अधिकांश सर्जिकल हेरफेर मूत्राशय को प्रभावित करना चाहिए। मूत्राशय को संवहनी क्लैंप ( सामग्री की तालिका देखें) के साथ पीछे खींचें या खींचें ताकि एक्सकैवेटियो वेसिकोयूटेरिना का बेहतर दृश्य प्राप्त किया जा सके।
    4. मूत्रवाहिनी के स्तर पर अवरोही गर्भाशय वाहिकाओं को जितना संभव हो सके गर्भाशय ग्रीवा से बाहर निकालें और अलग करें।
      नोट: विभाजन के दौरान जितना संभव हो उतना योनि और गर्भाशय ग्रीवा के आसपास माइक्रोसर्क्युलेशन बनाए रखें।
    5. भविष्य के ग्राफ्ट के ग्रीवा / योनि भाग को रेक्टल अटैचमेंट और पैरावेजिनल और पैरासर्विकल लिगामेंट्स से अलग करें।
      नोट: ग्राफ्ट योनि पर किसी भी तरह के दबाव से बचें।
    6. गर्भाशय ग्रीवा के 2-3 मिमी पुच्छल के आसपास डायथर्मी के माध्यम से योनि को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करें।
      नोट: योनि लुमेन के अंदर कोई विली (गर्भाशय ग्रीवा) दिखाई नहीं दे रहा है।
    7. गर्भाशय धमनी और नस दोनों को उनकी उत्पत्ति पर खोजें। लिगेट (8/0 पॉलियामाइड; सामग्री की तालिका देखें), गर्भाशय वाहिकाओं के ग्लूटियल वाहिकाओं और सभी वाहिकाओं को काट दें, और काट लें।
      नोट: गर्भाशय वेना के लिए आम इलियाक वेना पुच्छल का प्रत्यक्ष बंधाव आमतौर पर संभव है।
    8. कुंद विच्छेदन द्वारा, सामान्य इलियाक वाहिकाओं को एक दूसरे से मुक्त करें, महाधमनी और वेना कावा के विभाजन से गर्भाशय वाहिकाओं के विभाजन तक।
      नोट: एक या दो आसन्न लिम्फ नोड्स को हटाकर क्षेत्र में बेहतर सर्जिकल पहुंच प्राप्त कर सकते हैं।
    9. गर्भाशय-डिम्बग्रंथि पेडिकल को एक ही स्तर पर घुमाने के बाद, फैलोपियन ट्यूब से 3 मिमी दाएं गर्भाशय के सींग का उत्पादन करें। यह प्राप्तकर्ता गर्भाशय सींग के ऊपरी हिस्से में ग्राफ्ट गर्भाशय सींग के एनास्टोमोसिस को सक्षम बनाता है।
    10. महाधमनी और कैवल द्विभाजन के समीपस्थ दाहिने सामान्य इलियाक धमनी और नस के चारों ओर सीधे लिगेटर्स (8/0 पॉलियामाइड) रखें। विभाजन से सटे दाहिने सामान्य इलियाक धमनी में एक छोटा चीरा (0.5-1 मिमी) लगाएं, और लुमेन (फ्लशिंग के लिए) में एक मुड़ी हुई, कुंद 30 ग्राम सुई या एक सीधी, कुंद 25 ग्राम सुई डालें। इसे एक लिगेचर (6/0 पॉलियामाइड) के साथ सुरक्षित करें।
      नोट: सुई और / या पोत के विस्थापन से बचने के लिए बुलडॉग क्लैंप के साथ एक और विकल्प अतिरिक्त सुरक्षा है।
    11. फ्लशिंग के दौरान बहिर्वाह को सक्षम करने के लिए दाईं सामान्य इलियाक नस पर लिगेचर की सामान्य इलियाक नस को विच्छेदित करें।
  4. नीचे दिए गए चरणों का पालन करके ग्राफ्ट को फ्लश करें।
    1. लगभग 9 एमएल कोल्ड रिंगर समाधान (आरएचएक्स: रिंगर 50 आईयू / एमएल हेपरिन और 0.4 मिलीग्राम / एमएल ज़ाइलेज़िन के साथ पूरक) के साथ 3 एमएल सिरिंज का उपयोग करके गर्भाशय को मैन्युअल रूप से फ्लश करें। हेपरिन (50 आईयू / एमएल) और ज़ाइलेज़िन (0.4 मिलीग्राम / एमएल) के साथ पूरक अंग संरक्षण समाधान के 6 एमएल के साथ फिर से फ्लश करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
      नोट: उच्च फ्लशिंग दबाव से बचें और उचित सुई प्लेसमेंट सुनिश्चित करें।
    2. जब गर्भाशय का ऊतक पीला पड़ गया हो तो प्रत्यारोपण को हटा दें। पेट की महाधमनी के विभाजन पर लिगेचर की सामान्य इलियाक धमनी को काट लें।
  5. प्रत्यारोपण से पहले बैक टेबल तैयारी और भंडारण के लिए प्रत्यारोपण को ठंडा अंग संरक्षण समाधान (4 डिग्री सेल्सियस) में रखें।
  6. ग्राफ्ट को हटाने के बाद, पहले आइसोफ्लुरेन सेटिंग को अधिकतम करके और फिर द्विपक्षीय न्यूमोथोरैक्स को प्रेरित करके जानवर को इच्छामृत्युदें।

2. सिंजेनिक गर्भाशय प्रत्यारोपण

नोट: प्रक्रिया के विवरण के लिए, कृपया पहले प्रकाशित रिपोर्ट12,13,15 देखें।

  1. संज्ञाहरण को प्रेरित करें और चरण 1.1 में उल्लिखित पशु को तैयार करें।
    1. प्रभावी एनाल्जेसिया (जैसा कि चरण 1.1.1 में वर्णित है) और सर्जरी से 30 मिनट पहले 200 आईयू / किग्रा उच्च आणविक भार हेपरिन का प्रबंधन करें।
  2. माध्य लैप्रोटॉमी करें।
    1. हाइपोगैस्ट्रियम की ओर जिफिस्टरम से 0.5 सेमी नीचे शुरू होने वाले 6-8 सेमी लंबे मध्य रेखा चीरे के माध्यम से पेट खोलें। त्वचा चीरा के लिए नंबर 10 स्केलपेल और लिनिया अल्बा चीरा के लिए छोटी तेज कैंची का उपयोग करें। जिगर और मूत्राशय को नुकसान न पहुंचाएं।
    2. छोटी आंतों को कपास के फाहे का उपयोग करके पेट की गुहा के बाहर ले जाएं, उन्हें बाँझ नम धुंध के साथ लपेटें, और उन्हें बेहतर इन्सुलेशन के लिए बाँझ प्लास्टिक बैग के साथ कवर करें।
    3. गर्भाशय और संबंधित वाहिकाओं की इष्टतम पहुंच और दृश्यता प्राप्त करने के लिए, पेरिटोनियल मांसपेशियों को एक तरफ और पेट को खुला रखने के लिए बाएं और दाएं पेट की दीवार फ़ोल्डरों पर रिट्रैक्टर या क्लिप डालें। टेप के साथ क्लिप / रिट्रैक्टर को ठीक करें।
    4. सर्जिकल क्षेत्र और आंतों को नम रखने और विसरा के सूखने से बचने के लिए पहले से गर्म खारा लगाएं।
  3. मलाशय और मूत्राशय से योनि के ऊपरी तिहाई हिस्से के विच्छेदन और लामबंदी के साथ हिस्टेरेक्टॉमी करें।
    1. गर्भाशय, गर्भाशय ग्रीवा और योनि के चारों ओर माइक्रोवास्कुलचर को काट दें। गर्भाशय भयावह के सूक्ष्मपरिसंचरण की रक्षा के लिए अंग के करीब आसपास की संरचनाओं से गर्भाशय को काटें और अलग करें।
    2. आसपास से वसा ऊतक को हटा दें।
    3. बाएं सींग को काटकर काट दें। दाईं ओर, गर्भाशय के ऊपरी हिस्से के 7-8 मिमी खंड को गर्भाशय ग्राफ्ट में बाद में एनास्टोमोसिस के लिए संरक्षित करें।
  4. गर्भाशय प्रत्यारोपण करें।
    1. गर्भाशय वाहिकाओं की उत्पत्ति से महाधमनी / कैवल विभाजन तक सही सामान्य इलियाक वाहिकाओं को जुटाएं और अलग करें।
    2. ग्राफ्ट को पेट की गुहा में रखें। ग्राफ्ट को ठंडे अंग संरक्षण समाधान में भिगोए गए धुंध में लपेटें।
      नोट: एनास्टोमोसिस के दौरान ग्राफ्ट को ठंडा रखने की आवश्यकता होती है।
    3. भविष्य के एनास्टोमोसिस साइट को तैयार करते हुए, प्रत्येक तरफ सही सामान्य इलियाक नस पर दर्दनाक संवहनी क्लैंप रखें।
      नोट: कार्डियक प्रीलोडिंग में अचानक कमी और परिणामस्वरूप हाइपोटेंशन के अनुकूल होने के लिए संज्ञाहरण को 1-1.5 वॉल्यूम% आइसोफ्लुरेन तक कम करें।
    4. ग्राफ्ट नस के उद्घाटन से थोड़ा बड़ा स्लिट आम इलियाक नस में काटें।
    5. ग्राफ्ट नस को रखें।
    6. दाईं आम इलियाक नस पर स्लिट के प्रत्येक कोने में एक स्टे सीवन (10/0 पॉलियामाइड; सामग्री की तालिका देखें) रखें।
      नोट: बेहतर समायोजन के लिए और पर्स-स्ट्रिंग प्रभाव को रोकने के लिए पुच्छल कोने पर सीवन गाँठ को ढीला रखें।
    7. थ्रोम्बोसिस को रोकने के लिए प्रक्रिया के दौरान नियमित रूप से एनास्टोमोसिस क्षेत्र को ठंडा आरएचएक्स के साथ फ्लश करें।
    8. ग्राफ्ट नस के एक तरफ के एनास्टोमोस को प्राप्तकर्ता की नस में निरंतर सीवन के छह से आठ लूप के साथ जोड़ा जाता है (चित्र 1)।
      नोट: कपाल स्टे सीवन (10/0 पॉलियामाइड) से शुरू करें और जहाजों के इनबाउंड हिस्से को पहले एनास्टोमोस करें।
    9. एनास्टोमोस जहाज के दूसरी तरफ उसी तरह से, इस बार बाहर से शुरू होता है।
    10. दोनों तरफ एनास्टोमोसेस को खत्म करने के बाद, कपाल के रहने वाले सीवन पर एक गाँठ बांधें, और फिर पुच्छल रहने वाले सीवन (10/0 पॉलियामाइड) पर एक गाँठ बांधें।
      नोट: पर्स-स्ट्रिंग प्रभाव ों को रोकने के लिए निरंतर सीवन को केवल उतना ही कसें जितना आवश्यक हो।
    11. भविष्य के एनास्टोमोसिस साइट को तैयार करते हुए, प्रत्येक तरफ दाईं आम इलियाक धमनी पर दर्दनाक संवहनी क्लैंप रखें।
    12. बाधित सीवन (10/0 पॉलियामाइड) का उपयोग करके 8-10 लूप के माध्यम से धमनी एनास्टोमोसिस (दाएं आम इलियाक धमनी [आरसीआईए]) करें।
      नोट: बाधित सीवन निरंतर लोगों की तुलना में नियंत्रित करना आसान है ("मछली-मुंह" तकनीक के साथ वैकल्पिक)18। प्रक्रिया के दौरान ठंडा आरएचएक्स के साथ एनास्टोमोसिस क्षेत्र की निरंतर फ्लशिंग घनास्त्रता को रोकने में मदद करती है। निरंतर सीवन का उपयोग करते समय, शिरापरक एनास्टोमोसिस के अनुरूप इस चरण को करें।
  5. ग्राफ्ट रीपरफ्यूजन करें।
    1. जब दोनों एनास्टोमोसिस साइटें पेटेंट दिखाई देती हैं और किसी भी रक्तस्राव को रोक दिया जाता है, तो ग्राफ्ट वाहिकाओं पर संवहनी क्लैंप जारी करें (चित्रा 2)।
    2. ग्राफ्ट के संकेतों के लिए ग्राफ्ट का निरीक्षण करें, जैसे कि लाल होना, नस का भरना, या ग्राफ्ट धमनी में स्पंदन।
    3. प्रत्यारोपण के योनि कफ को छह से सात इंट्राल्यूमिनल (6/0 पॉलीग्लाक्टिन) बाधित सीवन का उपयोग करके प्राप्तकर्ता की योनि तिजोरी से कनेक्ट करें।
      नोट: पहले 12 बजे की स्थिति में एक सीवन के साथ शुरू करें, और अगले वाले को 10 और 1 बजे की स्थिति में रखें। 9 और 3 बजे की स्थिति में दो सीवन को सामने की पंक्ति19,20 में सीवन के बाद बांधा जाना चाहिए।
    4. पांच से सात बाधित सीवन (7/0 पॉलियामाइड) का उपयोग करके प्राप्तकर्ता गर्भाशय के शेष कपाल गर्भाशय खंड में ग्राफ्ट गर्भाशय सींग को एंड-टू-एंड किया जाता है।
      नोट: लुमेन के माध्यम से सिलाई न करें।
  6. पेट को लगातार सीवन से बंद करें। मांसपेशियों की परत को ट्यूरिंग करने के लिए 4/0 पॉलीग्लाक्टिन का उपयोग करें, और त्वचा के लिए 6/0 पॉलियामाइड या सर्जिकल घाव क्लिप।
  7. प्रत्यारोपण पूरा होने के बाद जानवर को गर्म पिंजरे में ठीक होने दें। जानवर के साथ तब तक रहें जब तक कि वह कठोर पुनरावृत्ति क्षमता हासिल नहीं कर लेता, और अपनी पूरी तरह से ठीक होने तक एकल आवास बनाए रखें। ब्यूप्रेनोर्फिन (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) और उपयुक्त एनएसएआईडी को चमड़े के नीचे प्रशासित करके सोटोपरेटिव एनाल्जेसिया उपचार प्रदान करें, हालांकि संज्ञाहरण की पहली खुराक के 4-8 घंटे बाद नहीं। सर्जरी के बाद तीन दिनों के लिए पीने के पानी (1 मिलीग्राम / किग्रा, मौखिक, 160 एमएल पीने के पानी (0.3 मिलीग्राम / एमएल) में 5 एमएल ब्यूप्रेनोर्फिन के माध्यम से ब्यूप्रेनोर्फिन के साथ निरंतर प्रदान करें।
  8. त्वचा की सीवन को 10-14 दिनों के बाद हटा दिया जाता है।

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Representative Results

चूहों के दो समूहों के परिणाम प्रस्तुत किए जाते हैं। हमारे संशोधनों के प्रभावों को प्रदर्शित करने के लिए (समूह 1, एन = 8) से पहले (समूह 1, एन = 8) प्रोटोकॉल समायोजन (तालिका 1) से पहले यूटीएक्स किया गया था (कृपया हमारे संशोधनों के स्पष्टीकरण के लिए चर्चा देखें) 12,15,21।

चूहे यूटीएक्स का परिणाम तीन प्रमुख चरणों से जुड़ा हुआ है। पहला चरण यूटीएक्स से सफल वसूली है। आमतौर पर, प्राप्तकर्ताओं को पहले 2 पोस्टऑपरेटिव दिनों के भीतर ठीक हो जाना चाहिए। दूसरा चरण सर्जरी के 2 सप्ताह बाद ग्राफ्ट की स्वास्थ्य स्थिति से संबंधित है, जो संभोग प्रक्रिया में शामिल करने का फैसला करता है (तालिका 2)। तीसरे चरण में प्रजनन क्षमता के प्रमाण के रूप में सफल जन्म के बाद सहज संभोग शामिल है।

दोनों समूहों के सभी जानवरों को सर्जरी से एक घटनारहित वसूली हुई थी। दूसरे चरण के दौरान, चार जानवरों को समूह 1 से और दो को समूह 2 से बाहर रखा गया था। यह बहिष्करण ग्राफ्ट थ्रोम्बोसिस और फोड़ा (समूह 1 के लिए एन = 4, समूह 2 के लिए एन = 2), और संकुचित /विकृत गर्भाशय-गर्भाशय एनास्टोमोसिस (एन = 1, समूह 1 के अतिरिक्त) के कारण था। प्रत्यारोपण के 2 सप्ताह बाद सभी महिलाओं के लिए रेलाप्रोटॉमी (मूल लैप्रोटॉमी के निशान के साथ) किया गया था, क्योंकि जानवरों की शारीरिक उपस्थिति का ग्राफ्ट स्वास्थ्य के संकेतक के रूप में बहुत कम मूल्य था। कुल मिलाकर, समूह 1 और 2 के लिए 2 सप्ताह की ग्राफ्ट उत्तरजीविता दर क्रमशः 50% और 75% थी (तालिका 3)।

चरण 3 के दौरान, समूह 1 की चार महिलाओं को यूटीएक्स के लगभग 9 सप्ताह बाद लुईस पुरुषों के साथ संभोग के लिए मिलान किया गया था। दो मादाओं ने गर्भावस्था के लक्षण दिखाए (शरीर के वजन में वृद्धि, चित्रा 3; घोंसले के शिकार का व्यवहार); हालांकि, कोई जीवित जन्म नहीं देखा गया था। तीन मादाओं के दो संभोग चक्रों के बाद, एक मादा चूहे (°1) में शरीर के अंग (हड्डी और ऊतक) पाए गए। एक पशु रोग विज्ञानी द्वारा हेमटोक्सीलिन और ईओसिन दाग वाले ऊतक वर्गों की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा से पता चला कि ये पिल्ले प्रसव तक विकसित हुए (आंकड़े 4 और चित्रा 5)।

समूह 2 की छह महिलाओं को लुईस पुरुषों के साथ जोड़ा गया था (शरीर के वजन में बदलाव के लिए चित्रा 6 देखें)। छह चूहों में से तीन (दो लुईस और एक ब्राउन नॉर्वे चूहा) ने पिल्ले को जन्म दिया, जबकि अन्य दो ने गर्भावस्था के लक्षण दिखाए। मादा लुईस चूहे (# 1) के पहले कूड़े में दो पिल्ले शामिल थे (चित्र 7)। जन्म के कुछ समय बाद, लुईस महिला फिर से गर्भवती हो गई; हालांकि, तीन पिल्लों में से केवल दो प्रसवोत्तर रूप से बच गए (चित्रा 8)। एक मौत के लिए एक संभावित स्पष्टीकरण शिशु हत्या है, क्योंकि यह प्रसवोत्तर तनाव की स्थितियों में स्वस्थ पिल्ले के साथ भी होता है। इसी तरह, ब्राउन नॉर्वे मादा (# 2) ने दो बार जन्म दिया, हर बार प्रति संभोग चक्र में चार पिल्ले (चित्रा 9)। समूह 2 की सबसे बड़ी कूड़े की संख्या एक और लुईस मादा (# 3) द्वारा वितरित की गई थी, जिसमें पहले संभोग चक्र के बाद सात पिल्ले थे। सभी जीवित पिल्ले ने सामान्य विकास प्रदर्शित किया (चित्रा 10)।

कुल मिलाकर, प्रोटोकॉल के अनुकूलन ने 2 सप्ताह के ग्राफ्ट अस्तित्व को 50% से 75% तक बढ़ा दिया। छह में से पांच महिलाएं गर्भवती हो गईं, जबकि समूह 1 से चार में से दो। इसी तरह, छह में से तीन मादाओं ने समूह 1 मादाओं में से चार में से शून्य की तुलना में जीवित पिल्ले को जन्म दिया। अंत में, अनुकूलित प्रोटोकॉल ने प्रत्यक्ष शल्य चिकित्सा परिणामों और यूटीएक्स (तालिका 4 और चित्रा 6) के बाद सफल जीवित जन्मों की दर दोनों में सुधार किया।

Figure 1
चित्रा 1: ग्राफ्ट और प्राप्तकर्ता की नस का एनास्टोमोसिस। ग्राफ्ट की दाईं सामान्य इलियाक नस (आरसीआईवी) एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस (चरण 2.4) के माध्यम से प्राप्तकर्ता के आरसीआईवी से जुड़ी होती है। RCIA = सही सामान्य इलियाक धमनी कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: ग्राफ्ट और प्राप्तकर्ता धमनी का एनास्टोमोसिस। सही सामान्य इलियाक धमनी (आरसीआईए) एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस (चरण 2.4) के माध्यम से प्राप्तकर्ता के आरसीआईए से जुड़ा हुआ है। दोनों संवहनी क्लैंप (2.5) खोलने के बाद, बाहरी रक्तस्राव की अनुपस्थिति में धमनी को पूरी तरह से संक्रमित किया जाना चाहिए। काला तीर: ग्राफ्ट आरसीआईए; लाल तीर: ग्राफ्ट आरसीआईवी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: समूह 1 में महिलाओं के संभोग के बाद शरीर का वजन बदलता है। चार समूह 1 महिलाओं के शरीर के वजन की निगरानी जिन्होंने रिलैप्रोटॉमी पर एक बरकरार ग्राफ्ट प्रदर्शित किया। गर्भाशय का निरीक्षण करने के लिए सीज़ेरियन सेक्शनिंग के दौरान एक जानवर (°1) को मार दिया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: मृत पिल्ले के साथ समूह 1 चूहे के गर्भाशय की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा। पिल्ले के शरीर के अंग चूहे °1 में पाए गए थे। जांच में एक महत्वपूर्ण और पतला गर्भाशय का पता चला, जिससे पता चला कि पिल्ले सामान्य रूप से विकसित हुए लेकिन उन्हें जन्म नहीं दिया जा सका। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्र 5: समूह 1 चूहे °1 के गर्भाशय के अंदर शरीर के अंगों को पिप । हड्डियों का विकास चरण पूर्णकालिक पिल्ले के अनुरूप था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: छह समूह 2 महिलाओं के शरीर के वजन की निगरानी जिन्होंने रिलैप्रोटॉमी पर एक बरकरार ग्राफ्ट प्रदर्शित किया। हरे तारे व्यक्तिगत जन्म की घटनाओं को चिह्नित करते हैं। हैशटैग नंबर व्यक्तिगत महिलाओं को संदर्भित करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 7
चित्रा 7: संशोधित प्रोटोकॉल का पालन करते हुए चूहे यूटीएक्स के बाद पहला जीवित जन्म। दो नवजात चूहे और उनकी मां (दाईं ओर सिर; लुईस महिला # 1, समूह 2)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 8
चित्रा 8: संशोधित प्रोटोकॉल का पालन करते हुए चूहे यूटीएक्स के बाद दूसरे संभोग चक्र के बाद दूसरा कूड़े। मादा # 1 (समूह 2) ने तीन पिल्लों को जन्म दिया, जिनमें से दो बच गए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 9
चित्रा 9: संशोधित प्रोटोकॉल का पालन करते हुए यूटीएक्स के बाद ब्राउन नॉर्वे चूहे का पहला कूड़े। पहले संभोग चक्र के बाद, ब्राउन नॉर्वे चूहे (# 2, समूह 2) ने चार पिल्लों को जन्म दिया, इसके बाद दूसरे संभोग चक्र के बाद एक और चार। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 10
चित्र 10: पिल्ले का विकास। सभी जीवित पिल्ले ने 3 सप्ताह की उम्र में सामान्य विकास प्रदर्शित किया। एक प्रतिनिधि उदाहरण दिखाया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 11
चित्रा 11: सफल संभोग के बाद योनि प्लग गठन। आगे संभोग को रोकने के लिए निषेचन के बाद योनि को कवर करने के लिए सफेद प्लग बनना चाहिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

समूह 1 समूह 2 चूहों में सिंजेनिक यूटीएक्स। चूहों में एलोजेनिक यूटीएक्स।
संशोधन से पहले संशोधन के बाद देखें रेफरी 12 देखें रेफरी 15
जानवरों की कुल संख्या 8 8 27 14
दो सप्ताह का ग्राफ्ट सर्वाइवल 4/8 (50%) 6/8 (75%) 19/27 (70%) 9/14 (64%)
विवाहित महिलाओं की संख्या 4/4 (100%) 6/6 (100%) 17/19 (89%) 9/9 (100%)
पूर्ण अवधि गर्भावस्था 1/4 (25%) 5/6 (83%) 11/17(65%) 5/9 (56%)
सफलतापूर्वक कूड़े का वितरण 0 5a/td> 1 5
जीवित पिल्लों की कुल संख्या 0 20b 3c 25d
गर्भावस्था से लेकर जीवित जन्म तक 1 1e 10 2

तालिका 1: चूहे यूटीएक्स के लिए संशोधित और असंशोधित प्रोटोकॉल की परिणाम तुलना। ए: एक ही चूहे द्वारा दो गर्भधारण; बी: शिशु हत्या पिल्ला सहित; सी: माध्य; डी: औसत / वितरण का योग; ई: संभोग के तीन चक्रों के बाद पुनर्जीवन चरण में मृत पिल्ले।

सर्जिकल सेटिंग्स समूह 1 (n = 8) समूह 2 (n = 8)
परियोजना का चरण प्रारंभिक चरण देर से चरण
कोल्ड स्टोरेज का समय 2-3 घंटे 2-3 घंटे
एनास्टोमोसिस के दौरान फ्लशिंग समाधान आरएच RHX
योनि एनास्टोमोसिस 6/0 एथिलॉन 6/0 विक्रिल
गर्भाशय सींग एनास्टोमोसिस आंशिक रूप से निरंतर सीवन बाधित सीवन।
आर्टेरिया एनास्टोमोसिस निरंतर सीवन बाधित और निरंतर
योनि और गर्भाशय ग्रीवा के चारों ओर माइक्रो-वैस्कुलराइजेशन योनि / गर्भाशय ग्रीवा ऊतक के करीब कटिबंधन। अधिक दूर से उपयोग किया जाता है।

तालिका 2: सर्जिकल सेटिंग्स समूह 1 बनाम समूह 2।

बहिष्करण मानदंड #
घनास्त्रता के लक्षण (विशेष रूप से एनास्टोमोसेस के आसपास)
प्रमुख आसंजन
संकुचित गर्भाशय
संक्रमण के लक्षण
ग्राफ्ट नेक्रोसिस

तालिका 3: संभोग के लिए बहिष्करण मानदंड। #Applied यूटीएक्स के 2 सप्ताह बाद रेलाप्रोटॉमी में करें।

n (समूह 1) n (समूह 2)
जीवधारी 8 8
2 सप्ताह के बाद स्वस्थ ग्राफ्ट 4 6
मेटेड 4 6
पूर्ण अवधि गर्भावस्था 1 5
सफलतापूर्वक कूड़े का वितरण 0 5a
जीवित पिल्लों की कुल संख्या 0 20b
गर्भावस्था से लेकर जीवित जन्म तक नहीं। 1 0

तालिका 4: समूह 1 बनाम समूह 2 के परिणाम। ए: एक ही चूहे में लगातार दो गर्भधारण; बी: शिशु हत्या द्वारा मारे गए पिल्ला सहित।

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Discussion

यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल चूहों में गर्भाशय प्रत्यारोपण के पीछे सर्जिकल दृष्टिकोण के लिए विस्तृत निर्देश प्रदान करता है। प्रोटोकॉल को यूटीएक्स और बाद के संभोग के बाद जीवित जन्मों की बाधाओं को बढ़ाने के लिए अनुकूलित किया गया है। मूल प्रोटोकॉल को ब्रानस्ट्रॉम समूह 12,13 से लिया गया है, जो अकोरी एट अल.10 के माउस वर्क से प्रेरित है, और पिछले वर्षों में लेखकों के अनुभवों के आधार पर संशोधित किया गया है। इस प्रकार, संशोधन ों को सच्चे सीखने के वक्रों द्वारा संचालित किया गया था जो असफल प्रत्यारोपण से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों तक के विकास को दर्शाते हैं।

प्रमुख संशोधन जो निर्णायक होने की संभावना है: (1) अंग पुनर्प्राप्ति और एनास्टोमोसिस के दौरान फ्लशिंग समाधान में ज़ाइलेज़िन को जोड़ना, जिसने वासोडिलेशन को उत्तेजित किया जिससे थ्रोम्बोटिक जोखिम कम हो गया। (2) धमनी एंड-टू-साइड एनास्टोमोसिस के लिए बाधित सीवन का उपयोग। बाधित सीवन न केवल पैटेंसी पर सर्जिकल नियंत्रण को बढ़ाते हैं और पर्स-स्ट्रिंग प्रभावों से बचते हैं, बल्कि आर्टेरिया यूटेरिना के माध्यम से रक्त प्रवाह को बढ़ाने के लिए एनास्टोमोटिक क्षेत्र के बाद के चौड़ीकरण को भी सक्षम करते हैं। (3) गर्भाशय सींग एनास्टोमोसिस के लिए बाधित और गैर-अवशोषक सीवन का अनुप्रयोग केवल पेरिमेट्रियम की परत के भीतर सिलाई के साथ; यह संशोधन गर्भाशय की दीवार के कसना को रोकता है, जो बाद में निषेचन में बाधा डाल सकता है। (4) योनि एनास्टोमोसिस के लिए शोषक सीवन सामग्री का उपयोग करने से योनि स्टेनोसिस का खतरा कम हो जाता है और जिससे जीवित जन्म की संभावना बढ़ जाती है। (5) योनि और गर्भाशय ग्रीवा से जितना संभव हो उतना दूर किसी भी सर्जिकल हेरफेर करना योनि के निशान से बचने और जीवित जन्मों की संभावना बढ़ाने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। (6) वेना कावा, पेट की महाधमनी और बाईं आम इलियाक नस धमनी को बंद करने के बजाय दाईं आम इलियाक नस और धमनी का प्रत्यक्ष बंधाव। गर्भाशय वेना में सीधे बंधाव, ज्यादातर मामलों में, संभव है; प्रत्यक्ष बंधाव अंग खरीद को सरल बनाता है और प्रत्यारोपण परिणामों को नकारात्मक रूप से प्रभावित किए बिना शल्य चिकित्सा के समय को कम करता है। (7) सामान्य इलियाक वेना (चरण 2.4.3) के क्लैंपिंग के ठीक बाद आइसोफ्लुरेन एकाग्रता को 1% -1.5 वॉल्यूम% तक कम करना भी महत्वपूर्ण है, अन्यथा हृदय की मृत्यु हो सकती है।

उपरोक्त बिंदु मुख्य तत्व हैं जो वर्तमान प्रोटोकॉल को स्वीडिश समूह10,12,13 द्वारा वर्णित शायद सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले दृष्टिकोण से अलग करते हैं। इन उपायों ने यूटीएक्स के अंतिम समापन बिंदु, जीवित जन्म को लाभान्वित किया, जैसा कि समूह तुलना (मूल बनाम संशोधित प्रोटोकॉल; तालिका 1 देखें) द्वारा दर्शाया गया है। जाहिर है, समय के साथ सर्जिकल सीखने की अवस्था ने भी बेहतर परिणामों में वृद्धि की है; हालांकि, इसके योगदान का अनुमान लगाना मुश्किल है।

एक सावधानीपूर्वक शल्य चिकित्सा तकनीक के अलावा, अंतिम परिणाम के लिए पोस्टऑपरेटिव प्राप्तकर्ता देखभाल भी महत्वपूर्ण है। पोस्टऑपरेटिव उपचार संबंधित स्थानीय प्रोटोकॉल का पालन करते हैं; यहां दिए गए निर्देश प्राप्तकर्ता को संज्ञाहरण से जागने के बाद 0.05 मिलीग्राम / किग्रा ब्यूप्रेनोर्फिन की सलाह देते हैं, और पहले पोस्टऑपरेटिव दिन के दौरान यदि हमारे स्कोरिंग मूल्यांकन द्वारा परिभाषित दर्द के साथ पेश किया जाता है। स्कोरिंग मानदंड व्यवहार (गतिविधि, श्वसन, कोट, मुद्रा, घाव) और शरीर के वजन पर आधारित हैं। सर्जरी के तुरंत बाद, वसूली के सकारात्मक संकेत चरम सीमाओं और कानों के गुलाबी रंग की वापसी के साथ-साथ आंखों के लाल रंग की वापसी है। प्रत्यारोपण प्रक्रिया की लंबाई को देखते हुए, प्रत्यारोपण के बाद पहले 3 घंटों के दौरान नियमित निगरानी महत्वपूर्ण है। यदि इन 3 घंटों के दौरान मूल्यांकन मानदंड ों को पूरा नहीं किया जाता है, तो जानवर को आगे की पीड़ा से बचने के लिए इच्छामृत्यु दी जाती है। पहले 3 पोस्टऑपरेटिव दिनों के लिए दिन में तीन बार निगरानी जारी रखी जाती है। यदि जानवर पहले 2 दिनों के दौरान पूरी तरह से ठीक नहीं होता है, तो उसे इच्छामृत्यु दी जाती है। इसकी स्थिति के आधार पर, जानवर सर्जरी के बाद 2-3 दिनों के लिए एक ही आवास में रहता है।

सर्जरी के दौरान बाँझ स्थितियां सफल परिणामों के लिए प्रासंगिक एक और पहलू हैं। संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए एक सख्त स्वच्छता दिनचर्या अनिवार्य है। पशु सुविधा में प्रवेश करते समय, हाथों को साफ समग्र, फेस मास्क, दस्ताने और टोपी पहनने से पहले अच्छी तरह से धोया जाना चाहिए। पूरे सर्जिकल क्षेत्र को बेंजाइल-सी 12-18-अल्काइलडिमिथाइलअमोनियम क्लोराइड, डिडेसिलडिमिथाइलअमोनियम क्लोराइड और ग्लूटाराल्डिहाइड युक्त एक विशेष स्वैब से कीटाणुरहित किया जाता है। 70% इथेनॉल के साथ अतिरिक्त कीटाणुशोधन निम्नानुसार है। प्रत्येक सर्जिकल हेरफेर से पहले, दस्ताने को 70% इथेनॉल के साथ संक्षेप में साफ किया जाता है, और सर्जिकल साइट के आसपास के क्षेत्र को बाँझ ड्रेप के साथ कवर किया जाता है। ये उपाय संक्रमण के जोखिम को कम करने में बहुत मदद करते हैं।

संतान की सफलता के साथ एक मुद्दा वास्तविक गर्भावस्था की निगरानी में कठिनाई है। शरीर के वजन में वृद्धि गर्भावस्था का संकेत हो सकती है, लेकिन शिशु हत्या के कारण भी हो सकती है और आम तौर पर महिला की स्थिति को मज़बूती से प्रतिबिंबित नहीं करती है। उदाहरण के लिए, निगरानी के दौरान समूह 1 के लिए कुल मिलाकर केवल मामूली वजन परिवर्तन स्पष्ट थे। पशु 3 और 4 ने दो संभोग चक्रों में समान वजन वृद्धि प्रदर्शित की, फिर भी केवल पशु 4 रिलाप्रोटॉमी (चित्रा 3 और चित्रा 4) पर गर्भवती थी। इसके अलावा, अनुपस्थित जन्म के साथ पहले संभोग चक्र के बाद वजन कम होना गर्भावस्था के अवशोषण को इंगित कर सकता है। हालांकि यह स्पष्ट नहीं है कि ऊतक अवशोषण के परिणामस्वरूप वजन कम क्यों होता है, इस घटना को बार-बार चूहे यूटीएक्स प्राप्तकर्ताओं12 में देखा गया है। सफल संभोग के बाद योनि प्लग गठन (चित्रा 11) भी अक्सर अनुपस्थित था और बाद में शरीर के वजन में बदलाव के लिए सहसंबंध नहीं दिखाता था। गर्भावस्था को चिह्नित करने में बहुत कम मूल्य को देखते हुए, पशु तनाव जोखिम को कम करने के लिए समूह 2 के लिए शरीर के वजन की निगरानी आवृत्ति कम कर दी गई थी। असंगत प्लग उपस्थिति और वजन परिवर्तन का एक और परिणाम गर्भाधान समय की एक अविश्वसनीय परिभाषा थी। इस प्रकार जन्म के लिए नियत तिथियों की गणना गर्भाधान दिवस के रूप में पुरुष जोखिम के बाददूसरे दिन का उपयोग करके की गई है। दिलचस्प बात यह है कि समूह 2 में शरीर के वजन में परिवर्तन गर्भावस्था के दौरान अपेक्षाकृत अच्छी तरह से सहसंबद्ध है, जिसमें प्रसव को वजन में स्पष्ट गिरावट से चिह्नित किया गया है (चित्रा 6)।

जानवरों 1, 2, और 3 (गर्भवती) के शरीर के वजन में परिवर्तन (चित्रा 6) की तुलना जानवरों 5 और 6 (कभी गर्भवती नहीं) के साथ अच्छी तरह से गर्भावस्था और जीवित जन्म बनाम असफल संभोग के प्रभावों को दर्शाती है। समूह 1 की तुलना में समूह 2 में अलग-अलग शरीर के वजन व्यवहार के पीछे का कारण स्पष्ट नहीं है। हालांकि, समूह 2 में पूर्णकालिक गर्भधारण की अधिक संख्या के कारण वजन में बदलाव अधिक विश्वसनीय हो सकता है। समूह 1 में कम गर्भावस्था दर संभवतः योनि स्टेनोसिस से संबंधित हो सकती है, जो समूह 2 (तालिका 3) के सापेक्ष अधिक प्रतिनिधित्व किया गया था और बाधित गर्भाधान का एक कारण है। समूह 2 में कम स्टेनोटिक घटनाएं योनि एनास्टोमोसिस के लिए अवशोषित सीवन के बजाय गैर-अवशोषक के उपयोग के कारण हो सकती हैं, संभवतः इस समूह में योनि विच्छेदन के दौरान बेहतर सर्जिकल हेरफेर के साथ।

स्वीडिश दृष्टिकोण10,12 के विपरीत, यहां वर्णित प्रोटोकॉल रिंगर या अन्य समाधानों के बजाय ग्राफ्ट स्टोरेज के लिए आईजीएल -1 (इंस्टीट्यूट जॉर्जेस लोपेज़) समाधान का उपयोग करता है। जबकि यूटीएक्स परिणामों पर आईजीएल -1 समाधान का सटीक प्रभाव अज्ञात है, विभिन्न रिपोर्टइस समाधान 22,23,24,25 के लिए प्रयोगात्मक प्रत्यारोपण में समग्र लाभ का सुझाव देती हैं। अंत में, आमतौर पर यूटीएक्स12 के लिए किए गए कुछ प्रोटोकॉल चरणों ने छोड़ दिए जाने पर परिणामों को प्रभावित नहीं किया। इनमें बाएं या दाएं गर्भाशय सींग पर क्लिपिंग और पोस्टऑपरेटिव हेपरिन प्रतिस्थापन शामिल हैं, जिसे लेखक वैकल्पिक मानते हैं।

प्रयोगात्मक यूटीएक्स में निहित एक सीमा प्रस्तुत प्रोटोकॉल के लिए भी मान्य है। प्रक्रिया समय लेने वाली है, और प्रत्यारोपण के बाद अंग पुनर्प्राप्ति में 6 घंटे तक का समय लग सकता है। इसलिए, चूहे यूटीएक्स को प्रत्येक चरण को निर्दोष रूप से करने के लिए कई घंटों तक पूर्ण ध्यान देने की आवश्यकता होती है। उत्तरार्द्ध सफलता का सबसे महत्वपूर्ण पहलू बना हुआ है। इस तरह का ध्यान पूरा किया जा सकता है बशर्ते माइक्रोसर्जिकल कौशल पूरी तरह से विकसित हों और लगातार अभ्यास किया जाए। इसी तरह, पूरी प्रक्रिया के दौरान गलतियों से बचने के लिए धैर्य और सहनशक्ति महत्वपूर्ण लक्षण हैं। लंबी प्रक्रिया का एक और परिणाम यह है कि प्रति दिन केवल एक जानवर का ऑपरेशन किया जा सकता है। सावधानीपूर्वक योजना बनाना और प्रमुख प्रश्नों पर ध्यान केंद्रित करना एक उत्पादक अनुसंधान डिजाइन विकसित करने में मदद करता है। सामान्य तौर पर, यह सलाह दी जाती है कि वास्तविक प्रयोगात्मक श्रृंखला के लिए प्रतिबद्ध होने से पहले 70% से ऊपर ग्राफ्ट उत्तरजीविता प्राप्त करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि निष्कर्ष पर्याप्त रूप से मजबूत होंगे। अंत में, कोई जीवित जन्म को समापन बिंदु के रूप में पुनर्विचार करना चाह सकता है। योनि स्टेनोसिस और गर्भावस्था पुनरुत्थान12 की उच्च घटनाएं सार्थक परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक यूटीएक्स की संख्या में स्पष्ट रूप से वृद्धि करती हैं। प्रयोगात्मक प्रश्न पर लंबित, अन्य समापन बिंदु, जैसे कि ग्राफ्ट अस्तित्व, अधिक प्रभावी हो सकते हैं।

इसके बढ़ते आवेदन के बावजूद, यूटीएक्स क्लिनिक में भी एक प्रयोगात्मक अनुप्रयोग बना हुआ है। बेहतर सर्जिकल दृष्टिकोण और इम्यूनोसप्रेसिव रणनीतियों की आवश्यकता के अलावा, विशेष रूप से मृतक दाताओं से ग्राफ्ट का उपयोग, एक ऐसा क्षेत्र है जिसमें अतिरिक्त शोध की आवश्यकता है। इस्केमिक चोट को कम करने के लिए रणनीतियां स्थापित नहीं की गई हैं, लेकिन संभावित दाता पूल के विस्तार के लिए सबसे स्वागत योग्य होगा। दरअसल, यूटेरी पर इस्किमिया का प्रभाव खराब शोध किया गया है, जिसमें लागू ज्ञान अन्य अंगों26,27 के निष्कर्षों पर निर्भर करता है। रैट यूटीएक्स क्लिनिक28,29 के अनुरूप दृष्टिकोण का उपयोग करते हुए नियंत्रित सेटिंग्स में इस्केमिक चोट का पता लगाने का एक साधन प्रदान करता है। ध्यान दें, लाइव दान कुछ जोखिमों से जुड़ा हुआ है; दाताओं में सर्जिकल जटिलताओं की उच्च दर होती है, जैसे मूत्र पथ और आंत्र आघात। तदनुसार, मृत दान और इसके शोध की मांग 5,30 बढ़ रही है।

कई अतिरिक्त प्रश्न मौजूद हैं जहां चूहा यूटीएक्स जानकारीपूर्ण हो सकता है। उदाहरण के लिए, चूहा प्रणाली जैविक मार्करों की पहचान करने और / या मान्य करने का अवसर प्रदान करती है जिनका उपयोग क्लिनिक में गर्भाशय प्रत्यारोपण के पाठ्यक्रम की निगरानी करने के लिए किया जा सकता है। हाल के सामाजिक विकास नए प्रश्न पैदा कर सकते हैं जहां चूहा मॉडल उपयोग का हो सकता है। यूटीएक्स अब ट्रांसजेंडर व्यक्तियों के लिए भी वकालत की जा रही है, जिसमें पुरुष शरीर रचना विज्ञान अनुकूलित शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण31 के लिए कह रहा है।

अंत में, मौजूदा कृंतक कार्य के आधार पर चूहे यूटीएक्स का एक नया प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है और हाथों पर अनुभव द्वारा संशोधित किया गया है। संशोधित प्रोटोकॉल में चूहे के यूटीएक्स की उच्च संभावना होती है जिसके परिणामस्वरूप जीवित जन्म होता है-पर्याप्त माइक्रोसर्जिकल कौशल और अभ्यास प्रदान किया जाता है। यूटीएक्स शायद प्रमुख प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं में सबसे जटिल है। वर्णित निर्देश एक सामान्य प्रोटोकॉल में जोड़ देंगे, जिसकी वर्तमान में कमी है, लेकिन अनुसंधान समुदाय के भीतर चूहे यूटीएक्स की मांग प्रक्रिया स्थापित करने की आवश्यकता है।

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Disclosures

लेखक ों ने घोषणा की कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धी हित नहीं हैं।

Acknowledgments

इस अध्ययन को स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (परियोजना अनुदान संख्या 310030_192736) द्वारा समर्थित किया गया था। हम अपने हिस्टोपैथोलॉजिकल समर्थन के लिए ज्यूरिख विश्वविद्यालय के पशु चिकित्सा पैथोलॉजी संस्थान से डॉ फ्राउके सीहुसेन को धन्यवाद देना चाहते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Angled to Side Scissor 5 mm F.S.T 15008-08
Big Paper Clip No specific Used as retractor
Blunt Bend Needle G30 Unimed S.A.
Bupivacain 0.5% Sintetica
Buprenorphine 0.3 mg/mL Temgesic
Dosiernadel G25 H.SIGRIST& PARTNER AG
Dumont #5SF Forceps F.S.T 11252-00
Ethilon 10/0 Ethicon 2810G
Ethilon 6/0 Ethicon 667H
Ethilon 7/0 Ethicon EH7446H
Ethilon 8/0 Ethicon 2808G
Femal Brown Norway Rats (150-170 g) Janvier
Femal Lewis Rats (150-170 g) Charles River Deutschland
Fine Scissors - Sharp F.S.T 14060-09 Any other small scissor works too
Halsey Micro Needle Holder F.S.T 12500-12 Any other small needholder works too
Heparin Natrium 25000 I.E./ 5 mL B. Braun
Institute Georges Lopez Perfusion Solution (IGL) Institute Georges Lopez Organ preservation solution  
Male Lewis Rats (300-320 g) Charles River Deutschland
Micro Serrefines 13 mm F.S.T 18055-04  
Micro Serrefines 16 mm gebogen F.S.T 18055-06
Micro-Serrefine Clamp Applicator with Lock   F.S.T 18056-14  
Mölnlyncke Op Towel Mölnlyncke 800300 Sterile drape
NaCl 0.9% B.Braun
Octenisept Schülke
Paper Tape Tesa For fixing the animal
Philips Avent Schneller Flaschenwärmer SCF358/02 Philips 12824216
Ringerfundin B.Braun
Rompun 2% Bayer Xylazine
Round Handled Needle Holders F.S.T 12075-12
Round Handled Needle Holders F.S.T 12075-12
S&T Vessel Dilating Forceps - Angled 45° F.S.T 00276-13
Sacryl Naht KRUUSE 152575
Scapel No 10 Swann Morton 201
Small Histo-Container Any small histo-container works fine-for coldstorage of the graft
Small Plastik Bags Any transparant plastic bags are fine
Steril Cotton swab Lohmann-Rauscher Any steril cotton swab is fine
Sterile Gauze Lohmann-Rauscher Any steril gauze is fine
Straight Scissor 8mm F.S.T 15024-10
Surgical microscope – SZX9 Olympus OLY-SZX9-B
Sutter Non Stick GLISS 0.4 mm Sutter 78 01 69 SLS
Suture Tying Forceps  F.S.T 00272-13
ThermoLux warming mat ThermoLux
Tissue Forceps for Skin Any tissue forceps are fine
Vesseldilatator Forceps F.S.T 00125-11
Vicryl  plus 4/0 Ethicon VCP292H

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References

  1. Richards, E. G., et al. Uterus transplantation: state of the art in 2021. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 38 (9), 2251-2259 (2021).
  2. Jones, B. P., et al. Options for acquiring motherhood in absolute uterine factor infertility; adoption, surrogacy and uterine transplantation. The Obstetrician & Gynaecologist. 23 (2), 138-147 (2021).
  3. Brannstrom, M., et al. The first clinical trial of uterus transplantation: surgical technique and outcome. American Journal of Transplantation. 14, 44 (2014).
  4. Ejzenberg, D., et al. Livebirth after uterus transplantation from a deceased donor in a recipient with uterine infertility. Lancet. 392 (10165), 2697-2704 (2018).
  5. Lavoue, V., et al. Which donor for uterus transplants: brain-dead donor or living donor? A systematic review. Transplantation. 101 (2), 267-273 (2017).
  6. O'Donovan, L., Williams, N. J., Wilkinson, S. Ethical and policy issues raised by uterus transplants. British Medical Bulletin. 131 (1), 19-28 (2019).
  7. Kisu, I., et al. Long-term outcome and rejection after allogeneic uterus transplantation in cynomolgus macaques. Journal of Clinical Medicine. 8 (10), 1572 (2019).
  8. Ozkan, O., et al. Uterus transplantation: From animal models through the first heart beating pregnancy to the first human live birth. Womens Health. 12 (4), 442-449 (2016).
  9. Favre-Inhofer, A., et al. Involving animal models in uterine transplantation. Frontiers in Surgery. 9, 830826 (2022).
  10. El-Akouri, R. R., Wranning, C. A., Molne, J., Kurlberg, G., Brannstrom, M. Pregnancy in transplanted mouse uterus after long-term cold ischaemic preservation. Human Reproduction. 18 (10), 2024-2030 (2003).
  11. Sahin, S., Selcuk, S., Eroglu, M., Karateke, A. Uterus transplantation: Experimental animal models and recent experience in humans. Turkish Journal of Obstetrics and Gynecology. 12 (1), 38-42 (2015).
  12. Wranning, C. A., Akhi, S. N., Diaz-Garcia, C., Brannstrom, M. Pregnancy after syngeneic uterus transplantation and spontaneous mating in the rat. Human Reproduction. 26 (3), 553-558 (2011).
  13. Wranning, C. A., Akhi, S. N., Kurlberg, G., Brannstrom, M. Uterus transplantation in the rat: Model development, surgical learning and morphological evaluation of healing. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 87 (11), 1239-1247 (2008).
  14. Brannstrom, M., Wranning, C. A., Altchek, A. Experimental uterus transplantation. Human Reproduction Update. 16 (3), 329-345 (2010).
  15. Diaz-Garcia, C., Akhi, S. N., Wallin, A., Pellicer, A., Brannstrom, M. First report on fertility after allogeneic uterus transplantation. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 89 (11), 1491-1494 (2010).
  16. R, E., Brown, M. J., Karas, A. Z. Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. 2nd edn. , Elsevier. (2008).
  17. Donovan, J., Brown, P. Euthanasia. Current Protocols. , Chapter 1, Unit 1 8 (2006).
  18. Rutledge, C., Raper, D. M. S., Abla, A. A. How I do it: superficial temporal artery-middle cerebral artery bypass for flow augmentation and replacement. Acta Neurochirurgica. 162 (8), 1847-1851 (2020).
  19. Kuo, S. C. -H., et al. The multiple-U technique: a novel microvascular anastomosis technique that guarantees everted anastomosis sites with solid intima-to-intima contact. Plastic and Reconstructive Surgery. 149 (5), 981 (2022).
  20. Magee, D. J., Manske, R. C. Pathology and Intervention in Musculoskeletal Rehabilitation. 2nd edn. , Elsevier. 25-62 (2016).
  21. Diaz-Garcia, C., Johannesson, L., Shao, R. J., Bilig, H., Brannstrom, M. Pregnancy after allogeneic uterus transplantation in the rat: perinatal outcome and growth trajectory. Fertility and Sterility. 102 (6), 1545-1552 (2014).
  22. Canovai, E., et al. IGL-1 as a preservation solution in intestinal transplantation: a multicenter experience. Transplant International. 33 (8), 963-965 (2020).
  23. Habran, M., De Beule, J., Jochmans, I. IGL-1 preservation solution in kidney and pancreas transplantation: A systematic review. PLoS One. 15 (4), 0231019 (2020).
  24. Mosbah, I. B., et al. IGL-1 solution reduces endoplasmic reticulum stress and apoptosis in rat liver transplantation. Cell Death & Disease. 3 (3), 279 (2012).
  25. Wiederkehr, J. C., et al. Use of IGL-1 preservation solution in liver transplantation. Transplantation Proceedings. 46 (6), 1809-1811 (2014).
  26. Tilney, N. L., Guttmann, R. D. Effects of initial ischemia/reperfusion injury on the transplanted kidney. Transplantation. 64 (7), 945-947 (1997).
  27. de Rougemont, O., Dutkowski, P., Clavien, P. A. Biological modulation of liver ischemia-reperfusion injury. Current Opinion in Organ Transplantation. 15 (2), 183-189 (2010).
  28. Jakubauskiene, L., et al. Relaxin and erythropoietin significantly reduce uterine tissue damage during experimental ischemia-reperfusion injury. International Journal of Molecular Sciences. 23 (13), 7120 (2022).
  29. Wang, Y., Wu, Y., Peng, S. Resveratrol inhibits the inflammatory response and oxidative stress induced by uterine ischemia reperfusion injury by activating PI3K-AKT pathway. PLoS One. 17 (6), 0266961 (2022).
  30. Kisu, I., et al. Risks for donors in uterus transplantation. Reproductive Sciences. 20 (12), 1406-1415 (2013).
  31. Jones, B. P., et al. Uterine transplantation in transgender women. BJOG: an International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 126 (2), 152-156 (2019).

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चिकित्सा अंक 194
चूहों में गर्भाशय प्रत्यारोपण के लिए सर्जिकल दृष्टिकोण, चुनौतियां और संकल्प
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Sun, K., Bochicchio, D., Clavien, P. … More

Sun, K., Bochicchio, D., Clavien, P. A., Dutkowski, P., Humar, B. Surgical Approach, Challenges, and Resolutions for Uterus Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (194), e64757, doi:10.3791/64757 (2023).

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