Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल में, एक मूत्रमार्ग सख्ती प्रेरण Wistar चूहों में विकसित किया गया था, एक buccal mucosa भ्रष्टाचार के साथ मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण के बाद. एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम और लेजर डॉपलर मूल्यांकन किया गया, मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण (सख्त गठन के बाद) और भ्रष्टाचार प्लेसमेंट को मान्य करना।
Abstract
मूत्र रोग विशेषज्ञों के लिए मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण विशेषज्ञता का एक महत्वपूर्ण क्षेत्र है। मूत्रमार्ग ग्राफ्टिंग आवश्यक होने पर बुक्कल म्यूकोसा को सबसे अच्छा विकल्प माना जाता है, हालांकि कुछ मामलों में, यह अनुचित है या किसी दिए गए सख्त की मरम्मत के लिए अनुकूलित करने की आवश्यकता है। इसलिए, नवीन प्रक्रियाओं को विकसित करना और प्रयोगात्मक मॉडल में उनकी ख्यात सफलता का मूल्यांकन करना नैदानिक आवश्यकता को पूरा करने के लिए महत्वपूर्ण है। इस लक्ष्य के साथ, यह अध्ययन एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जिसमें मूत्रमार्ग की सख्ती को विस्टार चूहों में इलेक्ट्रोकॉटरी द्वारा प्रेरित किया गया था। मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण 1 सप्ताह बाद एक मुख श्लेष्म ग्राफ्ट के साथ किया गया था, निचले होंठ से काटा गया था, और एक उदर ऑनले फैशन में रखा गया था। एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम ने सख्त प्रेरण के बाद संबंधित मूल्य की तुलना में यूरेथ्रोप्लास्टी के बाद मूत्रमार्ग व्यास में एक महत्वपूर्ण सुधार दिखाया। इसके अतिरिक्त, भ्रष्टाचार प्लेसमेंट लेजर डॉपलर का उपयोग कर रक्त छिड़काव विश्लेषण द्वारा मूल्यांकन किया गया था. जैसा कि अपेक्षित था, एक गहरा नीला क्षेत्र गैर-संवहनी मुख श्लेष्म ग्राफ्ट के अनुरूप था। यह प्रक्रिया मूत्रमार्ग की चोट और ऊतक मॉड्यूलेशन की सामान्य पैथोफिजियोलॉजिकल प्रक्रिया को सफलतापूर्वक अनुकरण कर सकती है, साथ ही एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से एक बुक्कल म्यूकोसा ग्राफ्ट का उपयोग करके मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण कर सकती है, और ऊतक इंजीनियरिंग या मूत्रमार्ग ग्राफ्ट के आधार पर भविष्य के अनुसंधान के आधार के रूप में कार्य करती है।
Introduction
मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण मूत्रमार्ग की चोट के प्रबंधन में मूत्र संबंधी सर्जनों के लिए एक बड़ी चुनौती है, सख्ती, आघात, या जन्मजात दोषों की स्थापना में1. उपचारात्मक इरादे के साथ, यूरेथ्रोप्लास्टी अधिकांश रोगियों के लिए पसंद का उपचार है, लंबे (>2 सेमी) और पूर्वकाल मूत्रमार्ग दोषों के साथ प्रतिस्थापन यूरेथ्रोप्लास्टी2 के कुछ रूप की आवश्यकता होती है। कई ऊतकों को मूत्रमार्ग के विकल्प के रूप में उपयोग किया गया है, जिसमें जननांग या बहिर्जनित क्षेत्रों के पूर्ण या विभाजन-मोटाई वाले त्वचा ग्राफ्ट, मूत्राशय की दीवार म्यूकोसा या व्यापक मुख श्लेष्म2 शामिल हैं। बुक्कल म्यूकोसा ग्राफ्ट के कई फायदे हैं, जैसे कि गीले और बाल रहित वातावरण से आना, फसल के लिए आसान होना, संक्रमण के लिए प्रतिरोधी होना, एक मोटी उपकला, छद्म-डायवर्टीकुलम गठन की कम संभावना, और एक पतली लामिना, प्रारंभिक आत्मसात और टीकाकरण की अनुमति देता है3. फ्लैप के विपरीत, ग्राफ्ट में रक्त की आपूर्ति नहीं होती है, जो प्राप्तकर्ता के संवहनी बिस्तर पर निर्भर करता है4.
ग्राफ्ट या फ्लैप के पशु मॉडल का उपयोग सर्जिकल तकनीकों को विकसित करने या परिष्कृत करने, ऊतक शरीर क्रिया विज्ञान, अंतर्निहित तंत्र और विफलता के कारणों को समझने और नवीन उपचार रणनीतियोंका मूल्यांकन करने के लिए बड़े पैमाने पर किया गया है। हालांकि बड़े जानवरों तकनीकी निष्पादन की सुविधा, कृन्तकों, अर्थात् चूहों और चूहों, संभाल करने के लिए और बनाए रखने के लिए आसान कर रहे हैं, रोगों के लिए प्रतिरोधी, अधिक लागत प्रभावी, और, महत्वपूर्ण बात, आणविक तंत्र की जांच करने के लिए उपकरणों के साथ, अभिनव चिकित्सा 5,6 का परीक्षण करने के लिए महत्वपूर्ण. फ्लैप और grafts के कई मॉडल विभिन्न ऊतकों, अर्थात् त्वचा, हड्डी, मांसपेशी6, वाहिकाओं5, और यहां तक कि ठोस अंगों7 का उपयोग चूहों में वर्णित किया गया है. हालांकि, मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण या ऊतक इंजीनियरिंग के लिए ग्राफ्ट में म्यूरिन मॉडल में दुर्लभ जांच है।
फिर भी, अनुवाद विज्ञान में प्रगति पशु मॉडल पर निर्भर करती है जो बीमारी की नकल करते हैं। अब तक, स्थानीय पैथोफिज़ियोलॉजी पर्यावरण को संबोधित नहीं किया गया है, क्योंकि मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण इसके सख्त होने के तुरंत बाद किया जाता है। इसमें, इस अध्ययन का उद्देश्य स्थानीय पैथोफिज़ियोलॉजी वातावरण में एक मुख श्लेष्म ग्राफ्ट का उपयोग करके मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण करना है। इस उद्देश्य के साथ, मूत्रमार्ग की सख्ती को इसके पुनर्निर्माण से 1 सप्ताह पहले प्रेरित किया गया था। चूहों में किया गया यह प्रयोगात्मक मॉडल, नवीन उपचारों का परीक्षण करने और भविष्य में उनके आणविक तंत्र और नैदानिक लाभों की जांच करने की अनुमति देता है।
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Protocol
सभी पशु प्रक्रियाओं को निर्देश 2010/63 / ईयू के अनुसार किया गया था। प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु कल्याण निकाय द्वारा अनुमोदित किया गया था, जिसे DGAV द्वारा लाइसेंस दिया गया था, जो पशु संरक्षण के लिए पुर्तगाली सक्षम प्राधिकारी है (लाइसेंस संख्या 0421/000/000/2021)। वर्तमान अध्ययन के लिए 12-14 सप्ताह की उम्र में नर विस्टार हान आईजीएस (सीआरएल: डब्ल्यूआई (हान) चूहों (400-500 ग्राम) का उपयोग किया गया था। जानवरों को एक वाणिज्यिक स्रोत से प्राप्त किया गया था ( सामग्री की तालिकादेखें)।
1. समाधान तैयार करना
- संवेदनाहारी समाधान
- 2.3 एमएल मेडिटोमिडाइन (1 मिलीग्राम / एमएल; 0.715 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के साथ 3 एमएल सिरिंज भरें और 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- फेंटेनाइल (0.05 मिलीग्राम/एमएल; 0.02 मिलीग्राम/किग्रा शरीर के वजन) के 1.55 एमएल के साथ 3 एमएल सिरिंज भरें और उसी 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- 6.15 एमएल मिडाज़ोलम (5 मिलीग्राम / एमएल; 9.5 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के साथ 10 एमएल सिरिंज भरें और उसी 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, इस प्रकार 10 एमएल संवेदनाहारी समाधान बनाएं।
- ट्यूब लेबल और अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर यह दुकान.
नोट: यह संवेदनाहारी संयोजन (medetomidine, fentanyl, और midazolam) 3 घंटे संवेदनाहारी शल्य चिकित्सा खिड़की के लिए एक अप प्रदान करता है. एटिपामेज़ोल और फ्लुमाज़ेनिल का प्रशासन प्रभाव को वापस कर सकता है।
- विरोधी शामक समाधान
- एटिपामेज़ोल (5 मिलीग्राम / एमएल; 3.72 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के 0.7 एमएल के साथ 1 एमएल सिरिंज भरें और 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- फ्लुमाजेनिल (0.1 मिलीग्राम / एमएल; 1.56 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के 9.3 एमएल के साथ 10 एमएल सिरिंज भरें और उसी 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, इस प्रकार 10 एमएल विरोधी शामक समाधान बनाएं।
- ट्यूब लेबल और अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर यह दुकान.
- पोस्टऑपरेटिव एनाल्जेसिया समाधान
- 0.5 एमएल कार्प्रोफेन (50 मिलीग्राम / एमएल; 5 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के साथ 1 एमएल सिरिंज भरें और 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- NaCl समाधान (0.9%) के 9.5 एमएल जोड़ें, एक 10 एमएल carprofen समाधान प्राप्त करना.
- ब्यूप्रेनोर्फिन (0.3 मिलीग्राम / एमएल; 0.01-0.05 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के 1 एमएल के साथ 1 एमएल सिरिंज भरें और 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- NaCl समाधान (0.9%) के 9 एमएल जोड़ें, एक 10 एमएल buprenorphine समाधान प्राप्त करना.
- ट्यूबों को लेबल करें और उन्हें अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
- पेरीऑपरेटिव एंटीबायोटिक
- एनरोफ्लोक्सासिन (25 मिलीग्राम / एमएल; 10 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के 2.5 एमएल के साथ 2.5 एमएल सिरिंज भरें और 15 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें।
- NaCl समाधान (0.9%) के 7.5 एमएल जोड़ें, एक 10 एमएल enrofloxacin समाधान प्राप्त करना.
- ट्यूब लेबल और अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर यह दुकान.
नोट: उपरोक्त समाधान तैयार करने के लिए सभी अभिकर्मकों का विवरण सामग्री की तालिका में सूचीबद्ध हैं।
2. मूत्रमार्ग की सख्ती का सर्जिकल प्रेरण
नोट: सर्जिकल प्रक्रियाओं को स्टीरियो माइक्रोस्कोप (10x) ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके किया गया था।
- उपयोग करने से पहले सभी सर्जिकल उपकरण जीवाणु: स्केलपेल ब्लेड (संख्या 11), नुकीले संदंश, वसंत कैंची, सर्जिकल संदंश, नेत्र सुई धारक, सर्जिकल कैंची और एक सुई धारक। शल्य चिकित्सा क्षेत्र को साफ करने के लिए बाँझ कपास गेंदों का प्रयोग करें.
- चूहे को पकड़ने से पहले संवेदनाहारी समाधान के साथ सिरिंज लोड करें।
- एक ट्यूब या एक तौलिया का उपयोग कर जानवर को रोकें और पेट को बेनकाब करने के लिए पूंछ को ऊपर उठाएं।
- पशु संयमित रखें और संवेदनाहारी समाधान (चरण 1.1 में तैयार) के एक intraperitoneal इंजेक्शन प्रदर्शन.
- संज्ञाहरण का आकलन करने के लिए चूहे के पेडल वापसी सजगता का परीक्षण.
- जानवर की दोनों आंखों में सुरक्षात्मक आंख जेल लागू करें। शरीर के वजन के 10 मिलीग्राम / किग्रा पर एंटीबायोटिक समाधान (चरण 1.1 में तैयार) का एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन करें।
- एक गर्म पैड पर पृष्ठीय decubitus स्थिति में चूहे प्लेस और शल्य चिकित्सा प्रक्रिया प्रदर्शन करने के लिए 10x या 20x बढ़ाई पर एक विच्छेदन खुर्दबीन का उपयोग करें.
- लिंग और आसपास की पेट की त्वचा को पोविडोन-आयोडीन (100 मिलीग्राम /
- मैन्युअल रूप से चमड़ी को वापस लें और लिंग पर कर्षण लागू करने के लिए पेनाइल ग्लान्स के पृष्ठीय पहलू में एक सतही रहने वाला सिवनी (7.0 सिवनी; सामग्री की तालिकादेखें) रखें, लिंग को वापस लेने के लिए सुई धारक को छोड़ दें।
- एक स्नेहक जेल का उपयोग कैथीटेराइजेशन के लिए मूत्रमार्ग में एक 22 जी शिरापरक कैथेटर रखें.
- एक शल्य स्केलपेल ब्लेड (संख्या 11) का प्रयोग, शिश्न त्वचा में एक 1 सेमी अनुदैर्ध्य उदर चीरा प्रदर्शन.
- नुकीले संदंश और वसंत कैंची का प्रयोग, मध्य शाफ्ट स्तर पर मूत्रमार्ग को उजागर जब तक शिश्न ऊतक परतों काटना.
- एक इलेक्ट्रोकॉटरी डिवाइस ( सामग्री की तालिकादेखें) के साथ, मूत्रमार्ग के पार्श्व पहलुओं में (प्रत्येक तरफ एक स्थान पर), लिंग के मध्य शाफ्ट के स्तर पर 10 डब्ल्यू के साथ एक वर्तमान लागू करें।
- चीरा को 6.0 शोषक चलने वाली सिवनी के साथ बंद करें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
- मूत्रमार्ग कैथेटर निकालें। शिश्न कर्षण सीवन निकालें.
- एनाल्जेसिया के चमड़े के नीचे इंजेक्शन करें: शरीर के वजन के 5 मिलीग्राम / किग्रा पर कार्प्रोफेन, और शरीर के वजन के 0.03 मिलीग्राम / किग्रा पर ब्यूप्रेनोर्फिन।
- विरोधी शामक समाधान (चरण 1.2 में तैयार) के साथ सिरिंज लोड और, उदर decubitus में जानवर के साथ, विरोधी शामक समाधान के एक चमड़े के नीचे इंजेक्शन प्रशासन के लिए ढीली त्वचा तम्बू है.
3. एक मुख श्लेष्म ग्राफ्ट के साथ यूरेथ्रोप्लास्टी की सर्जिकल प्रक्रिया
नोट: सर्जिकल प्रक्रियाओं को स्टीरियो माइक्रोस्कोप (10x) ( सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके किया गया था।
- इस हस्तक्षेप के लिए आवश्यक सभी सर्जिकल उपकरणों को निष्फल करें: नुकीले संदंश, वसंत कैंची, नेत्र सुई धारक, सर्जिकल कैंची, सुई धारक, तीन मच्छर संदंश, और एक स्केलपेल ब्लेड (संख्या 11)। शल्य चिकित्सा क्षेत्र को साफ करने के लिए छोटे स्पंज का प्रयोग करें.
- संवेदनाहारी, एंटीबायोटिक, संयम का प्रशासन करें और जानवर को पहले वर्णित के रूप में रखें (चरण 2.2-2.8)।
- निचले होंठ, लिंग और आसपास की पेट की त्वचा के मुख श्लेष्म को पोविडोन-आयोडीन (100 मिलीग्राम / एमएल) से साफ करें।
- निचले होंठ में, दोनों तरफ और बीच में तीन स्टे टांके (7.0 टांके) रखें, और निचले होंठ को वापस लेने और आंतरिक श्लेष्म को उजागर करने के लिए प्रत्येक में एक मच्छर छोड़ दें।
- वसंत कैंची और नुकीले संदंश का प्रयोग, निचले होंठ भीतरी मुख श्लेष्म के एक 4 मिमी व्यास भ्रष्टाचार फसल, और बाँझ खारा (0.9% NaCl) के साथ एक छोटे प्राप्तकर्ता में जगह है.
- हेमोस्टेसिस के लिए स्पंज के साथ दाता क्षेत्र में संपीड़न लागू करें।
- निचले होंठ के पहले रखे स्टे टांके निकालें।
- लिंग बेनकाब के रूप में पहले वर्णित (2.9 कदम).
- एक स्नेहक जेल का उपयोग कैथीटेराइजेशन के लिए मूत्रमार्ग में एक 22 जी शिरापरक कैथेटर रखें.
- वसंत कैंची का उपयोग करके, एक परिधि, उप-कोरोनल चीरा करें और लिंग को आधार पर डिग्लव करें।
- बताया संदंश और वसंत कैंची का प्रयोग, शेष परतों काटना और मूत्रमार्ग बेनकाब.
- एक शल्य स्केलपेल ब्लेड (संख्या 11) और वसंत कैंची का प्रयोग, एक अनुदैर्ध्य उदर चीरा प्रदर्शन, 4 मिमी के एक विस्तार में कोरोनल सल्कस के लिए 3 मिमी बाहर का शुरू, पहले शामिल सख्ती (चरण 2) के स्तर पर मूत्रमार्ग spatulating.
- 7.0 सामग्री के दो स्टे टांके रखें, स्पैट्यूलेशन के प्रत्येक तरफ एक, और मूत्रमार्ग को वापस लेने के लिए प्रत्येक में एक मच्छर छोड़ दें।
- दो 7.0 गैर-शोषक टांके रखें, स्पैट्यूलेशन के प्रत्येक छोर पर एक।
- मूत्रमार्ग लुमेन का सामना करना पड़ mucosa पक्ष के साथ एक उदर onlay फैशन में buccal mucosa भ्रष्टाचार रखें.
- ग्राफ्ट एंड के माध्यम से टांके में से एक पास करें और एक रनिंग सिवनी के साथ आधा दीर्घवृत्त करें।
- चरण 3.15 और चरण 3.16 को भ्रष्टाचार के दूसरी तरफ अन्य सिवनी के साथ दोहराएं।
- मूत्रमार्ग कैथेटर निकालें। शिश्न की त्वचा को बदलें।
- एक 6.0 अवशोषित बाधित सिवनी के साथ परिधि, उप कोरोनल चीरा बंद करें.
- शिश्न कर्षण सीवन निकालें.
- विरोधी शामक समाधान के बाद एनाल्जेसिया प्रशासन, के रूप में कदम 2.16-2.17 में वर्णित है.
4. पश्चात की निगरानी
- चूहों को हर घंटे तीन से चार बार देखें, संज्ञाहरण से उनकी वसूली की पुष्टि करें। श्वसन की निगरानी करें और पेडल और आंखों की सजगता का आकलन करें।
- चमड़े के नीचे 48 घंटे के लिए हर 12 घंटे में एनाल्जेसिया इंजेक्ट करें।
नोट: कार्प्रोफेन को शरीर के वजन के 1 एमएल / 500 मिलीग्राम पर प्रशासित किया गया था, और ब्यूप्रेनोर्फिन को शरीर के वजन के 0.5 एमएल / 500 मिलीग्राम पर प्रशासित किया गया था ( सामग्री की तालिकादेखें)। - प्रत्येक प्रक्रिया और पानी एड लिबिटम के बाद 48 घंटे के लिए नरम भोजन प्रदान करें।
- सर्जरी के बाद दैनिक चूहों की निगरानी करें और उनके स्वास्थ्य की स्थिति और सर्जरी साइट उपस्थिति दर्ज करें। मूल्यांकन किए गए संकेतों में चेहरे की अभिव्यक्ति, स्वर, गतिविधि की स्थिति, दर्द का कोई संकेत, भोजन और पेय अंतर्ग्रहण, शून्य और रक्तस्राव शामिल हैं।
5. रक्त छिड़काव मूल्यांकन
नोट: रक्त प्रवाह को सख्त प्रेरण से तुरंत पहले, यूरेथ्रोप्लास्टी से तुरंत पहले और यूरेथ्रोप्लास्टी के तुरंत बाद मापा जाता है।
- लेजर डॉपलर छिड़काव इमेजिंग प्रदर्शन.
- संवेदनाहारी समाधान (चरण 1.1) का उपयोग चूहों संवेदनाहारी करें।
- चूहे लापरवाह एक 37 डिग्री सेल्सियस लिंग कर्षण के साथ हीटिंग पैड पर रखो, के रूप में चरण 2.9 में वर्णित है.
- डेटा प्राप्त करने के लिए लेजर डॉपलर परफ्यूजन इमेजर ( सामग्री की तालिकादेखें) शुरू करें। लेजर बीम द्वारा पढ़े जाने वाले ब्याज के क्षेत्र को पूर्व-निर्धारित करें।
- संज्ञाहरण वापस करने के लिए विरोधी शामक समाधान (चरण 1.2) लागू करें।
- छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके, लिंग के क्षेत्र के चारों ओर ब्याज के क्षेत्र (आरओआई) को आकर्षित करें और समय के साथ प्रवाह मूल्यों को पंजीकृत करें।
6. रेडियोग्राफिक मूल्यांकन
नोट: यूरेथ्रोप्लास्टी के बाद सख्त प्रेरण पुष्टि और सख्त संकल्प की पुष्टि एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम के साथ की जाती है। यह मूल्यांकन सख्त प्रेरण (यूरेथ्रोप्लास्टी से पहले) और यूरेथ्रोप्लास्टी के 2 सप्ताह बाद 1 सप्ताह बाद किया जाता है।
- एक मोनोप्लान एंजियोग्राफी प्रणाली का उपयोग करके एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- संवेदनाहारी समाधान का उपयोग चूहों संवेदनाहारी जोड़ना.
- एंजियोग्राफी गद्दे पर एक सही तिरछा decubitus में पशु रखें, penile कर्षण के साथ, के रूप में चरण 2.9 में वर्णित है.
- लिंग सहित जानवर के श्रोणि क्षेत्र पर शंकु बीम पर ध्यान दें।
- बाहर का मूत्रमार्ग में एक 22 जी शिरापरक कैथेटर उन्नत 2 मिमी रखें.
- मूत्रमार्ग में आयोडीन रेडियोग्राफिक कंट्रास्ट सामग्री (623 मिलीग्राम/एमएल आयोप्रोमाइड समाधान और 0.9% NaCl का 1:1 अनुपात) का 1 एमएल डालना शुरू करें।
- इसके साथ ही, मूत्रमार्ग लुमेन को पूरा करने वाले रेडियोग्राफिक कंट्रास्ट की पहचान करने और मूत्रमार्ग व्यास का आकलन करने के लिए सादे रेडियोग्राफी करें।
- इमेजिंग के पूरा होने पर, विरोधी शामक समाधान के साथ संज्ञाहरण वापस.
7. इच्छामृत्यु
नोट: यूरेथ्रोप्लास्टी (सख्त प्रेरण के 4 सप्ताह बाद) के 3 सप्ताह बाद इच्छामृत्यु की जाती है, अंतिम छिड़काव मूल्यांकन के तुरंत बाद।
- 2 एमएल / किग्रा पेंटोबार्बिटल सोडियम (400 मिलीग्राम / एमएल) के साथ 2.5 एमएल सिरिंज भरें।
- जानवर euthanize करने के लिए समाधान के एक intraperitoneal इंजेक्शन प्रदर्शन.
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Representative Results
मूत्रमार्ग की सख्ती प्रेरण के लिए कुल 12 नर विस्टार चूहों का उपयोग किया गया था, जिनका वजन 400-500 ग्राम और 12-14 सप्ताह था। एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम (RUG1) 1 सप्ताह बाद8 प्रदर्शन किया गया था, जो तकनीक की सफलता की पुष्टि करता है। मूत्रमार्ग व्यास को स्ट्रिक्चर इंडक्शन के स्तर पर मिलीमीटर में मापा गया था। इसके बाद, चूहे मूत्रमार्ग के उदर चेहरे में एक बुक्कल म्यूकोसा ग्राफ्ट के साथ एक यूरेथ्रोप्लास्टी का प्रदर्शन किया गया था। यूरेथ्रोप्लास्टी के 14 दिनों के बाद एक ही चूहों को दूसरे प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम (आरयूजी 2) में प्रस्तुत किया गया था, और मूत्रमार्ग व्यास को ग्राफ्ट प्लेसमेंट के स्तर पर मिलीमीटर में मापा गया था। मतलब RUG1 और RUG2 व्यास क्रमशः 1.04 मिमी और 1.52 मिमी थे, मूत्रमार्ग पारगम्यता(चित्रा 1)में एक महत्वपूर्ण सुधार (पी < 0,0001) दिखा रहे थे, जिससे सर्जिकल हस्तक्षेप की सफलता और माप के बीच अच्छी स्थिरता की पुष्टि होती है।
ऊतक माइक्रोकिरुलेटरी वातावरण की निगरानी के लिए एक गैर-प्रमुख विधि के रूप में यूरेथ्रोप्लास्टी से तुरंत पहले और बाद में लेजर डॉपलर द्वारा स्थानीय छिड़काव का भी मूल्यांकन किया गया था। ऊतक छिड़काव रंग-कोडित छवियों में दिखाया गया है, जहां कम या कोई छिड़काव गहरा नीला है, और उच्चतम छिड़काव स्तर लाल हैं। मूर LDI V5.3 इमेज प्रोसेसिंग सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके माध्य प्रवाह मान प्राप्त किए जाते हैं ( सामग्री की तालिकादेखें)।
चूहे की आबादी की परिवर्तनशीलता को ध्यान में रखते हुए, 35 नर विस्टार चूहों का उपयोग किया गया था। यूरेथ्रोप्लास्टी से पहले और तुरंत बाद औसत रक्त प्रवाह क्रमशः 603.4 और 137.6 मनमाना इकाइयां (एयू) था। जैसा कि अपेक्षित था, स्थानीय रक्त प्रवाह (नीले रंग में) में एक महत्वपूर्ण कमी (पी < 0,0001) दिखाने वाला क्षेत्र गैर-संवहनी ग्राफ्ट (चित्रा 2) से मेल खाता है।
संवेदनाहारी प्रक्रिया के लिए अच्छी सहनशीलता सभी अध्ययन जानवरों में पाई गई; हालांकि, प्रयोगशाला में प्राप्त पिछले परिणाम (डेटा नहीं दिखाया गया) से पता चला है कि संज्ञाहरण समय कुल पशु वसूली की अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण हो सकता है, अधिमानतः 45 मिनट से अधिक नहीं। ऑपरेशन के बाद, चूहे भी बड़ी जटिलताओं से मुक्त थे।
चित्रा 1: प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम (आरयूजी) विश्लेषण। (ए) यूरेथ्रोप्लास्टी (आरयूजी 2) से पहले (आरयूजी 1) और 14 दिन बाद एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम की प्रतिनिधि छवियां। (बी) मिलीमीटर में व्यक्त व्यास के मात्रात्मक मूल्यांकन ने यूरेथ्रोप्लास्टी के 14 दिनों के बाद एक महत्वपूर्ण वृद्धि का प्रदर्शन किया। संक्षिप्ताक्षर: RUG1 = यूरेथ्रोप्लास्टी से पहले प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम; RUG2 = यूरेथ्रोप्लास्टी के 14 दिन बाद रेट्रोग्रेड यूरेथ्रोग्राम। बीच-समूह परिवर्तनों का मूल्यांकन दो-पूंछ वाले युग्मित टी-टेस्ट (एन = 12) का उपयोग करके किया गया था। स्केल बार: 10 मिमी। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: लेजर डॉपलर विश्लेषण। (ए) लेजर डॉपलर प्रवाह की प्रतिनिधि छवियां पूर्व और तुरंत बाद यूरेथ्रोप्लास्टी। (बी) रक्त प्रवाह के मात्रात्मक मूल्यांकन ने यूरेथ्रोप्लास्टी के बाद काफी कम रक्त छिड़काव का प्रदर्शन किया। बीच-समूह परिवर्तनों का मूल्यांकन दो-पूंछ वाले विलकॉक्सन मिलान-जोड़े हस्ताक्षरित रैंक टेस्ट (एन = 35) द्वारा किया गया था। स्केल बार: 0.5 सेमी। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
बुक्कल म्यूकोसा ग्राफ्ट के साथ यूरेथ्रोप्लास्टी मूत्रमार्ग पुनर्निर्माण में एक प्रमुख आधारशिला है। हालांकि, जटिलताओं और रुग्णता को कम करने के लिए पहले से वर्णित लोगों को अनुकूलित करने और नए स्थापित करने के लिए नवीन प्रक्रियाओं को विकसित किया जाना चाहिए, जैसे कि ऊतक-इंजीनियर सामग्री और जैविक ग्राफ्ट। प्रीक्लिनिकल मॉडल स्थापित करने और सर्जिकल तकनीकों को परिभाषित करने के लिए कई प्रक्रियाएं प्रकाशित की गई हैं। सूजा एट अल 1 ने 12 न्यूजीलैंड खरगोशों सहित एक अध्ययन किया। एक उदर अनुदैर्ध्य त्वचा चीरा प्रदर्शन किया गया था, और मूत्रमार्ग को ट्यूनिका अल्बुगिनिया से जुटाया गया था, इसके बाद मूत्रमार्ग के एक पृष्ठीय खंड का छांटना, एक दोष पैदा करना। इसके साथ ही, गाल से एक मुख श्लेष्म ग्राफ्ट काटा गया था और 7-0 अवशोषक सिवनी के साथ पृष्ठीय ऑनले के रूप में रखा गया था। वर्तमान अध्ययन में, नर विस्टार चूहों का उपयोग किया जाता है। छोटे आकार के कारण, वे तकनीकी रूप से अधिक मांग योग्य हैं, हालांकि संभालना आसान है। मूत्रमार्ग की सख्ती के पैथोफिज़ियोलॉजी और ग्राफ्ट के शरीर विज्ञान की नकल करने के लिए, इस मॉडल में, एक मूत्रमार्ग की सख्ती जैसी बीमारी पहले प्रेरित की गई थी, जैसा कि यूरेथ्रोप्लास्टी के समान ऑपरेटिव समय पर किए गए मूत्रमार्ग दोष के विपरीत था। सूजा एट अल की तरह, ग्राफ्ट के साथ मूत्रमार्ग को बंद करने के लिए चलने वाले टांके का भी उपयोग किया गयाथा 1. फिर भी, गैर-अवशोषित सिवनी का उपयोग किया गया था क्योंकि यह आगे के अध्ययनों में ग्राफ्ट परिधि की पहचान करने की अनुमति देता है, जैसे कि हिस्टोलॉजिकल वाले। मार्टिन-कैनो एट अल 9 ने विस्टार चूहों का उपयोग करके एक मॉडल विकसित किया। एक उप-कोरोनल परिधि चीरा बनाया गया था, इसके बाद पेनाइल डीग्लोविंग किया गया था, जिससे एक अच्छा मूत्रमार्ग जोखिम की अनुमति मिलती है। ग्राफ्ट को निचले होंठ से काटा गया था, मूत्रमार्ग को एक अनुदैर्ध्य उदर मिडलाइन चीरा के माध्यम से खोला गया था, और ग्राफ्ट को गैर-शोषक चलने वाले टांके के साथ एक उदर ऑनले फैशन में रखा गया था। प्रक्रिया के दौरान, मूत्रमार्ग पेटेंट को बनाए रखने के लिए एक मूत्रमार्ग कैथेटर रखा गया था। इस के साथ साथ वर्णित तकनीक शिश्न degloving, जो मूत्रमार्ग का एक अच्छा प्रदर्शन और प्रक्रिया के दौरान मूत्रमार्ग पेटेंट रखने के लिए एक कैथेटर की नियुक्ति की अनुमति देता है के एक ही दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया. हालांकि, मार्टिन-कैनो एट अल प्रक्रिया में किसी भी पिछले मूत्रमार्ग की चोट नहीं की, जो प्राकृतिक भ्रष्टाचार लेने को प्रभावित कर सकता था, क्योंकि ऊतक स्वस्थ थे।
वास्तव में, सरल मूत्रमार्ग की चोट और उपचार का मूल्यांकन दूसरों द्वारा किया गया है, जैसे होफर एट अल 10, जिन्होंने विस्टार चूहों के साथ एक चूहे का मॉडल विकसित किया है जिसमें एक उप-कोरोनल परिधि चीरा, पेनाइल डिग्लोविंग और मूत्रमार्ग को घायल करने के लिए एक अनुदैर्ध्य उदर मिडलाइन चीरा शामिल है, इसके बाद एक चल रहे सिवनी के साथ बंद हो जाता है। निष्कर्ष यह था कि, सूजन, प्रसार, परिपक्वता और त्वचीय उपचार के अनुरूप रीमॉडेलिंग के चरणों में, मूत्रमार्ग का उपचार होता है। यह चोट की साइट तक सीमित नहीं है, बल्कि पेरियूरेथ्रल ऊतक और कॉर्पस स्पोंजियोसम के विशाल बहुमत पर भी लागू होता है। Tavucku et al.11ने स्प्रैग-डॉली चूहों के साथ मूत्रमार्ग की चोट के एक मॉडल का भी वर्णन किया, मूत्रमार्ग को उजागर करने के लिए एक पेनोस्क्रोटल वेंट्रल मिडलाइन त्वचा चीरा का प्रदर्शन किया और फिर मूत्रमार्ग की चोट को प्रेरित करने के लिए इलेक्ट्रोकॉटरी करंट लगाया। उनके डेटा ने कोलेजन प्रकार I से कोलेजन प्रकार III अनुपात में वृद्धि दिखाई, जो फाइब्रोसिस का एक मजबूत संकेतक है। इस तर्क के बाद, एक घायल ऊतक में स्वस्थ की तुलना में अधिक फाइब्रोसिस होता है, और यह उम्मीद की जाती है कि ग्राफ्ट दोनों ऊतकों में समान नहीं है। यह मानते हुए कि घायल ऊतकों में यूरेथ्रोप्लास्टी की जाती है, इस मॉडल का एक बड़ा फायदा यह है कि यह सामान्य पैथोफिजियोलॉजिकल प्रक्रिया की बेहतर नकल करता है। एक अन्य प्रमुख लाभ सख्त प्रेरण की पुष्टि करने के लिए एक प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम की प्राप्ति है और बाद में मूत्रमार्ग व्यास के आधार पर यूरेथ्रोप्लास्टी की सफलता की पुष्टि करने के लिए। वास्तव में, सभी जानवरों में यूरेथ्रोप्लास्टी के बाद एक बेहतर मूत्रमार्ग व्यास था, जो प्रक्रिया की सफलता को दर्शाता है। सूजा एट अल 1ने भी प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम का प्रदर्शन किया, लेकिन केवल अध्ययन के अंत में। इस अध्ययन में और Tavukcu एट अल 11 में, दोनों यूरेथ्रोग्राम प्रदर्शन किए गए थे, मूत्रमार्ग विश्लेषण द्वारा प्रक्रिया की प्रभावशीलता का समापन। इसके अतिरिक्त, यूरेथ्रोप्लास्टी से पहले और बाद में एक छिड़काव मूल्यांकन किया गया था, जिसने मुख म्यूकोसा ग्राफ्ट के अनुरूप कुल गैर-संवहनी (नीला) क्षेत्र की पुष्टि की।
फिर भी, इस प्रक्रिया से संबंधित कई सीमाएँ हैं, जैसे चूहों के मूत्रमार्ग का आकार जिसके परिणामस्वरूप एक मांग वाली सर्जिकल तकनीक, सर्जरी की अवधि और वाष्पशील संज्ञाहरण की अनुपस्थिति होती है। हालांकि, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि, हालांकि बड़े जानवर आसान तकनीकी निष्पादन की सुविधा प्रदान करते हैं, कृन्तकों की तुलना में कम आणविक उपकरण उपलब्ध हैं, जो नवीन उपचारों के पीछे आणविक तंत्र की जांच करने के लिए एक सीमा हो सकती है। एक और सीमा मूत्रमार्ग की सख्ती को प्रेरित करने के लिए एक ही विधि का उपयोग है, जो आघात, संक्रमण या जन्मजात दोषों सहित कई अन्य कारणों से हो सकता है, जिससे विभिन्न पैथोफिजियोलॉजिकल फेनोटाइप हो सकते हैं। हालांकि, इलेक्ट्रोक्यूटरी का उपयोग किया गया था क्योंकि यह लगातार परिणामों के साथ एक सरल, आसान, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य दृष्टिकोण की अनुमति देता है।
हमारे ज्ञान के लिए, यह पहली चूहे की प्रक्रिया है कि: (1) मुख श्लेष्म ग्राफ्ट प्लेसमेंट से 1 सप्ताह पहले मूत्रमार्ग की सख्ती को प्रेरित करके ग्राफ्ट से पहले एक स्थानीय पैथोफिजियोलॉजिकल वातावरण की नकल करता है; (2) प्रतिगामी यूरेथ्रोग्राम द्वारा मूत्रमार्ग की सख्ती और इसके संकल्प की पुष्टि करता है; (3) लेजर डॉपलर द्वारा भ्रष्टाचार स्थान की पुष्टि करता है; और (4) एक प्रयोगात्मक मॉडल को ग्राफ्ट के उपयोग को अनुकूलित करने और उदाहरण के लिए, ऊतक-इंजीनियर सामग्री के आधार पर नई चिकित्सीय रणनीतियों को विकसित करने की अनुमति देता है, जिसमें आणविक तंत्र की जांच की जा सकती है, नैदानिक आवश्यकता को फिट करने के लिए अनुवाद विज्ञान पर प्रभाव के साथ।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
हम यूरेथ्रोग्राम की प्राप्ति में उनके सहयोग के लिए Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte के रेडियोलॉजी विभाग के प्रमुख João Leitão, और Centro Hospitalar Universitário Lisboa Norte के रेडियोलॉजी विभाग के तकनीशियन Catia Fernandes को धन्यवाद देते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Atipamezole | OrionPharma | ANTISEDAN (atipamezole) is indicated for the reversal of the sedative and analgesic effects. | |
| Buprenorphine | RichterPharma | Buprenorphine is a derivative of the opioid alkaloid thebaine that is a more potent (25-40 times) and longer lasting analgesic than morphine. | |
| Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Stereo Microscope | Carl Zeiss Microscopy, Germany | OPMI 1 FC from ZEISS symbolizes quality, precision and reliability. The manual system is easy to use and delivers high fidelity images with the legendary ZEISS optics. | |
| Carprofen | Zoetis | Carprofen is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) of the propionic acid class. | |
| Catheter 22 G. x 1'' | B Braun | Introcan Safety | IV Catheter of fluorinated ethylene propylene (FEP) with firmer construction for arterial access. |
| Enrofloxacin | Bayer | Enrofloxacin is a fluoroquinolone antibiotic. | |
| Fentanyl | Braun | 3644960 | Fentanyl is a powerful synthetic opioid analgesic. |
| Flumazenil | Fresenius Kabi | Benzodiazepine antagonist is used for the complete or partial reversal of the sedative effects caused by benzodiazepines. | |
| High temperature cautery | Fiab | F7244 | Disposable cautery, sterile, high temperature (1200 °C), 28 mm fine tip. |
| Instillagel gel | Farco-pharma | Cellulose-based lubricant with local anaesthetic and disinfecting properties. | |
| Iopromide | Bayer | Non-ionic injectable contrast medium, with iodine. | |
| Laser Doppler imaging system (perfusion imager moorLDI2-HIR and dedicated software) | MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK | 5710 | The angiogenesis models uses Laser Doppler imaging to assess blood perfusion in the hind limbs, one of which is ligated surgically. Dedicated measurement and comparison software allows the definition of regions of interest for blood flow assessment on the ischaemic versus non-ischaemic limb to establish a "reperfusion ratio" which can be assessed as often as needed and over a number of days on the same subject. |
| Lubrithal Eye Gel | Dechra | Eye gel used in animals for prevention of dry eyes during anaesthesia. Lubricating and moisturising action on cornea and conjunctiva. | |
| Male Wistar Han IGS (Crl:WI(Han) rats | Charles River Laboratories, Spain | Twelve to fourteen-week-old | |
| Metedomidin | Virbac | 037/01/07RFVPT | Medetomidine is a synthetic drug used as surgical anesthetic. |
| Midazolam | Labesfal | Benzodiazepine medication is used for anesthesia and procedural sedation. | |
| Monoplan Angiography System | Philips Medical Systems | Azurion 7 M20 | A stationary diagnostic fluoroscopic x-ray system specifically designed to optimize the capability of users to visually and quantitatively evaluate the anatomy and function of blood vessels of the heart, brain and other organs, as well as the lymphatic system. |
| Mosquito forceps | Henry Schein | 102-4346 | Hartman-Mosquito Hemostatic Forcep Curved 3-1/2" Stainless Steel |
| Needle Holder | Henry Schein | 100-2570 | Needle holder Mayo-Hegar, stainless steel, 14 cm |
| Ophtalmic Needle Holder | Asico | AE-6143 | Needle holder barranquer most delicate without lock |
| Pentobarbital Sodium | Ecuphar | Pentobarbital Sodium is the sodium salt of pentobarbital used for euthanasia. | |
| Pointed Forceps | Aesculap | BD335R | Microforceps, 0.30 mm tip |
| Polysorb 6.0 | Medtronic (Covidien) | UL-101 | Coated Synthetic Absorbable Suture aimed to reduce the inflammatory reaction in tissues, followed by gradual encapsulation of the suture by fibrous connective tissue. |
| Providone-Iodine | Mylan | Povidone-iodine 10% is an antiseptic drug, used as a disinfectant before and after surgery. | |
| Scalpel Blade nº11 | B Braun | BB511 | Carbon steel, sterile |
| Spring Scissor | Henry Schein | 600-4826 | Surgical scissors 31 castroviejo |
| Surgical Forceps | Aesculap | BD33R | Microforceps, 0.20mm tip |
| Surgical Scissor | Aesculap | MA873R | Micro Iris Scissor, curved shrap tips |
| SurgiPro 7.0 | Medtronic (Coviden) | VP-702-X | Non-Absorbable Monofilament Polypropylene Suture indicated for use in general soft tissue ligation. |
References
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