ラットモデルにおける尿道狭窄誘導とそれに続く頬粘膜移植尿道形成術

Summary

本プロトコルでは、Wistarラットで尿道狭窄誘導が開発され、続いて頬粘膜移植片による尿道再建が行われました。逆行性尿道造影とレーザードップラー評価を実施し、尿道再建(狭窄形成後)と移植片の留置を検証しました。

Abstract

尿道再建術は、泌尿器科医にとって重要な専門分野です。頬粘膜は、尿道移植が必要な場合に最適な選択肢と考えられていますが、場合によっては、不適切な場合や、特定の狭窄を修復するために最適化する必要があります。したがって、革新的な手順を開発し、実験モデルでそれらの推定上の成功を評価することは、臨床ニーズに適合するために重要です。この目標により、この研究では、Wistarラットの電気焼灼によって尿道狭窄が誘発されたプロトコルについて説明します。尿道再建は、1週間後に下唇から採取した頬粘膜移植片で行われ、腹側オンレー方式で配置されました。逆行性尿道造影では、尿道形成術後の尿道径が、狭窄導入後のそれぞれの値と比較して有意に改善したことが示されました。さらに、グラフトの配置は、レーザードップラーを使用した血液灌流分析によって評価されました。予想通り、濃い青色の領域は非血管新生頬粘膜移植片に対応しました。この手順は、尿道損傷と組織調節の正常な病態生理学的プロセスをうまくシミュレートし、頬粘膜移植片を使用して尿道再建を再現可能な方法でシミュレートし、組織工学または尿道移植に基づく将来の研究の基礎として役立ちます。

Introduction

尿道再建は、狭窄、外傷、または先天性欠損症の設定における尿道損傷の管理における泌尿器科外科医にとって大きな課題です¹。治癒目的で、尿道形成術はほとんどの患者に選択される治療法であり、長い(>2 cm)および前部尿道欠損症には何らかの形の置換尿道^{形成術が必要です}2。生殖器または生殖器外領域、膀胱壁粘膜、または広範囲の頬粘膜の全層または分割層の皮膚移植片など、多くの組織が尿道代替として^{使用されています2。}頬粘膜移植片には、湿った無毛の環境から得られる、収穫しやすい、感染に強い、上皮が厚い、偽憩室形成の可能性が低い、薄層であるなど、いくつかの利点があり、早期の吸収と接種が可能です³。フラップとは対照的に、移植片には血液供給がなく、レシピエントの血管床に依存して生存します⁴。

移植片または皮弁の動物モデルは、外科的技術の開発または改良、組織生理学、根本的なメカニズム、および失敗の原因の研究と理解、および革新的な^{治療戦略の評価}に広く使用されています^5,6。大型の動物は技術的な実行を容易にしますが、ネズミやマウスなどのげっ歯類は、取り扱いと維持が容易で、病気に耐性があり、費用対効果が高く、重要なことに、革新的な治療法をテストするために不可欠な分子メカニズムを調査するツールを備えています^5,6。皮弁と移植片のいくつかのモデルが、異なる組織、すなわち皮膚、骨、筋肉⁶、血管⁵、さらには固形臓器⁷を用いてラットで報告されている。しかし、尿道再建や組織工学のための移植片のマウスモデルに関する研究はほとんどありません。

それにもかかわらず、トランスレーショナルサイエンスの進歩は、病気を模倣する動物モデルに依存しています。これまでのところ、尿道再建は狭窄の直後に行われるため、局所的な病態生理学的環境は対処されていません。本研究では、頬粘膜移植片を用いた尿道再建を局所的な病態生理環境下で行うことを目的とする。この目的で、尿道狭窄は再建の1週間前に誘発されました。ラットで行われたこの実験モデルは、革新的な治療法をテストし、将来的にそれらの分子メカニズムと臨床的利点を調査することを可能にします。

Protocol

すべての動物実験は、指令2010/63/EUに従って実施されました。この手順は、ポルトガルの動物保護の所轄官庁であるDGAV(ライセンス番号0421/000/000/2021)によって認可された、機関の動物福祉機関によって承認されました。12〜14週齢の雄のWistar Han IGS(Crl:WI(Han)ラット(400-500 g)を本研究に使用しました。動物は市販の供給源から入手した( 資料表参照)。

1. 溶液の調製

1. 麻酔液
   1. 3 mLシリンジに2.3 mLのメデトミジン(1 mg / mL;0.715 mg / kg体重)を満たし、15 mL遠心チューブに移します。.
   2. 3 mLのシリンジに1.55 mLのフェンタニル(0.05 mg/mL;0.02 mg/kg体重)を入れ、同じ15 mLの遠心チューブに移します。
   3. 10 mLのシリンジに6.15 mLのミダゾラム(5 mg / mL;9.5 mg / kg体重)を満たし、同じ15 mLの遠心チューブに移し、10 mLの麻酔薬溶液を作ります。
   4. チューブにラベルを付け、暗所で4°Cで保管します。
      注:この麻酔薬の組み合わせ(メデトミジン、フェンタニル、ミダゾラム)は、最大3時間の麻酔手術ウィンドウを提供します。アチパメゾールとフルマゼニルを投与すると、効果が元に戻る可能性があります。.
2. 抗鎮静液
   1. 1 mLのシリンジに0.7 mLのアチパメゾール(5 mg / mL;3.72 mg / kg体重)を満たし、15 mLの遠心チューブに移します。.
   2. 10 mLのシリンジに9.3 mLのフルマゼニル(0.1 mg / mL;1.56 mg / kg体重)を満たし、同じ15 mLの遠心チューブに移し、10 mLの抗鎮静溶液を作成します。.
   3. チューブにラベルを付け、暗所で4°Cで保管します。
3. 術後鎮痛液
   1. 1 mL シリンジに 0.5 mL のカルプロフェン(50 mg/mL、体重 5 mg/kg)を充填し、15 mL 遠心チューブに移します。
   2. 9.5 mLのNaCl溶液(0.9%)を加え、10 mLのカルプロフェン溶液を得る。
   3. 1 mLシリンジに1 mLのブプレノルフィン(0.3 mg / mL;0.01〜0.05 mg / kg体重)を満たし、15 mLの遠心分離チューブに移します。.
   4. 9 mLのNaCl溶液(0.9%)を加え、10 mLのブプレノルフィン溶液を得る。
   5. チューブにラベルを付け、暗所で4°Cで保管します。
4. 周術期抗生物質
   1. 2.5 mLのシリンジに2.5 mLのエンロフロキサシン(25 mg/mL;体重10 mg/kg)を充填し、15 mLの遠心チューブに移します。
   2. 7.5 mLのNaCl溶液(0.9%)を加え、10 mLのエンロフロキサシン溶液を得る。
   3. チューブにラベルを付け、暗所で4°Cで保管します。
      注:上記の溶液を調製するためのすべての試薬の詳細は、 材料表に記載されています。

2.尿道狭窄の外科的誘導

注:外科的処置は、実体顕微鏡(10倍)を使用して行われました( 材料表を参照)。

1. メスの刃(番号11)、先のとがった鉗子、スプリングハサミ、外科用鉗子、眼科用針ホルダー、手術用ハサミ、ニードルホルダーなど、すべての手術器具を使用前に滅菌してください。滅菌綿球を使用して手術野をきれいにします。
2. ラットを保持する前に、注射器に麻酔液をロードします。
3. チューブやタオルで動物を拘束し、尻尾を上げて腹部を露出させます。
4. 動物を拘束したまま、麻酔液(ステップ1.1で調製)の腹腔内注射を行います。
5. 麻酔を評価するために、ラットのペダル離脱反射をテストします。
6. 動物の両目に保護アイジェルを塗ります。抗生物質溶液(ステップ1.1で調製)を体重10mg/kgで皮下注射する。
7. 加熱パッドの背側褥瘡の位置にラットを置き、10倍または20倍の倍率の解剖顕微鏡を使用して外科的処置を行います。
8. 陰茎と周囲の腹部の皮膚をポビドンヨード(100 mg / mL)で洗浄します。.
9. 包皮を手動で引っ込め、陰茎亀頭の背側に表面的なステイ縫合糸(7.0縫合糸、 資料表を参照)を配置して陰茎に牽引を加え、針ホルダーを所定の位置に残して陰茎を引っ込めたままにします。
10. 22Gの静脈カテーテルを尿道に挿入し、潤滑剤ゲルを使用してカテーテル挿入します。
11. 外科用メスの刃(番号11)を使用して、陰茎の皮膚に縦方向に1cmの腹側切開を行います。
12. 先の尖った鉗子とスプリングハサミを使用して、中央シャフトレベルで尿道が露出するまで陰茎組織層を解剖します。
13. 電気焼灼装置( 材料表参照)を用いて、尿道の外側(両側に1か所ずつ)、陰茎の中央軸の高さで腹側に10Wの電流を1秒間流します。
14. 6.0の吸収性ランニング縫合糸で切開部を閉じます( 材料表を参照)。
15. 尿道カテーテルを抜去します。陰茎牽引縫合糸を取り除きます。
16. 鎮痛剤の皮下注射を実行します:カルプロフェンは体重5 mg / kg、ブプレノルフィンは体重0.03 mg / kgです。.
17. 注射器に鎮静剤溶液(ステップ1.2で調製)を装填し、動物を腹側褥瘡にした状態で、緩んだ皮膚をテント状にして鎮静剤溶液の皮下注射を投与します。

3.頬粘膜移植による尿道形成術の外科的処置

注:外科的処置は、実体顕微鏡(10倍)を使用して行われました( 材料表を参照)。

1. この介入に必要なすべての手術器具を滅菌します:先のとがった鉗子、スプリングハサミ、眼科用針ホルダー、手術用ハサミ、針ホルダー、3つの蚊の鉗子、およびメスの刃(番号11)。小さなスポンジを使用して手術野をきれいにします。
2. 麻酔薬、抗生物質を投与し、前述のように動物を拘束して配置します(ステップ2.2-2.8)。
3. 下唇の頬粘膜、陰茎、および周囲の腹部の皮膚をポビドンヨード(100 mg / mL)で洗浄します。.
4. 下唇、両側、中央に3本のステイ縫合糸(7.0縫合糸)を入れ、それぞれに蚊を残して下唇を引っ込め、内側の粘膜を露出させます。
5. スプリングハサミと先のとがった鉗子を使用して、下唇内頬粘膜の直径4mmの移植片を採取し、滅菌生理食塩水(0.9%NaCl)で小さなレシピエントに入れます。
6. 止血のためにスポンジでドナー領域を圧迫します。
7. 下唇の以前に配置したステー縫合糸を取り除きます。
8. 前述したように陰茎を露出させます(ステップ2.9)。
9. 22Gの静脈カテーテルを尿道に挿入し、潤滑剤ゲルを使用してカテーテル挿入します。
10. スプリングハサミを使用して、円周方向の冠状下切開を行い、陰茎を根元まで外します。
11. 先のとがった鉗子とスプリングハサミを使用して、残りの層を解剖し、尿道を露出させます。
12. 外科用メスの刃(番号11)とスプリングハサミを使用して、冠状溝から3 mm遠位から4 mmの延長で縦方向の腹側切開を行い、以前に導入した狭窄のレベルで尿道をへら状にします(ステップ2)。
13. 7.0素材のステイ縫合糸を2本、へらの両側に1本ずつ置き、それぞれに蚊を残して尿道を引っ込めます。
14. 7.0の非吸収性縫合糸を2本、スパチュレーションの両端に1本ずつ配置します。
15. 頬粘膜移植片を腹側オンレー方式で配置し、粘膜側を尿道内腔に向けます。
16. 縫合糸の1つを移植片の端に通し、ランニング縫合糸で半楕円を実行します。
17. ステップ3.15とステップ3.16を繰り返し、もう一方の縫合糸を移植片の反対側に貼り付けます。
18. 尿道カテーテルを抜去します。陰茎の皮膚の位置を変えます。
19. 円周方向の冠状下切開部を6.0の吸収性断続縫合糸で閉じます。
20. 陰茎牽引縫合糸を取り除きます。
21. ステップ2.16-2.17で説明されているように、鎮痛剤とそれに続く鎮静剤を投与します。.

4.術後モニタリング

1. ラットを1時間ごとに3〜4回観察し、麻酔からの回復を確認します。呼吸を監視し、ペダルと目の反射を評価します。
2. 鎮痛剤を12時間ごとに48時間皮下注射します。.
   注:カルプロフェンは1 mL / 500 mg体重で投与され、ブプレノルフィンは0.5 mL / 500 mg体重で投与されました( 材料表を参照)。.
3. 各手順の後、48時間柔らかい食事と水を 自由に提供してください。
4. 手術後のラットを毎日監視し、健康状態と手術部位の外観を登録します。評価される徴候には、顔の表情、発声、活動状態、痛みの徴候、飲食物の摂取、排尿、出血などがあります。

5.血液灌流評価

注:血流は、狭窄誘発の直前、尿道形成術の直前、および尿道形成術の直後に測定されます。

1. レーザードップラー灌流イメージングを実行します。
   1. 麻酔液を使用してラットを麻酔します(ステップ1.1)。
   2. ステップ2.9で説明したように、陰茎牽引のある37°Cの加熱パッドにラットを仰臥位で置きます。
   3. レーザードップラー灌流撮像装置( 材料表参照)を起動してデータを取得します。レーザービームで読み取る関心領域を事前設定します。
   4. 鎮静剤溶液(ステップ1.2)を塗布して麻酔を元に戻します。
   5. 画像解析ソフトウェアを使用して、陰茎の領域の周囲に関心領域(ROI)を描画し、時間の経過とともにフラックス値をレジストレーションします。

6.放射線写真による評価

注:尿道形成術後の狭窄誘発の確認と狭窄の解消は、逆行性尿道造影で確認されます。この評価は、狭窄誘導の1週間後(尿道形成術前)と尿道形成術の2週間後に行われます。

1. モノプラン血管造影システムを使用して逆行性尿道造影を行います( 材料表を参照)。
   1. 麻酔液を使用してラットに麻酔をかけます。
   2. ステップ2.9で説明したように、動物を右斜めの褥瘡で血管造影マットレスの上に置き、陰茎牽引を行います。
   3. 陰茎を含む動物の骨盤領域にコーンビームを集中させます。
   4. 22Gの静脈カテーテルを遠位尿道に2mm進めます。
   5. 1 mL のヨウ素 X 線造影剤 (623 mg/mL のイオプロミド溶液と 0.9% NaCl の 1:1 の比率) を尿道に点滴します。
   6. 同時に、尿道内腔を満たすX線造影剤を特定し、尿道の直径を評価するために、プレーンX線撮影を実行します。
   7. イメージングが完了したら、鎮静剤溶液で麻酔を戻します。

7.安楽死

注:安楽死は、尿道形成術の3週間後(狭窄誘発の4週間後)、最後の灌流評価の直後に行われます。

1. 2.5 mLシリンジに2 mL / kgのペントバルビタールナトリウム(400 mg / mL)を入れます。.
2. 動物を安楽死させるために溶液の腹腔内注射を行います。

Representative Results

体重400〜500g、生後12〜14週齢の合計12匹の雄のWistarラットを尿道狭窄誘導に使用しました。逆行性尿道造影(RUG1)は1^{週間後に実施され}、8、技術の成功が確認されました。尿道の直径は、狭窄誘導のレベルでミリメートルで測定されました。この後、ラット尿道の腹側面に頬粘膜移植片による尿道形成術が行われました。同じラットを尿道形成術の14日後に2回目の逆行性尿道造影(RUG2)に提出し、移植片留置のレベルで尿道径をミリメートル単位で測定した。RUG1 と RUG2 の平均直径はそれぞれ 1.04 mm と 1.52 mm であり、尿道透過性の有意な改善 (p < 0,0001) を示しており (図 1)、それによって外科的介入の成功と測定間の良好な一貫性が確認されました。

局所灌流は、組織の微小循環環境を監視するための非侵襲的な方法として、尿道形成術の直前と直後にレーザードップラーによっても評価されました。組織灌流は色分けされた画像で示され、低灌流または灌流なしは濃い青色で、最も高い灌流レベルは赤色です。平均磁束値は、Moor LDI V5.3画像処理ソフトウェアを使用して取得されます( 材料表を参照)。

ラット個体群のばらつきを考慮して、35匹の雄のWistarラットを使用しました。尿道形成術前と直後の平均血流は、それぞれ603.4と137.6の任意の単位(A.U.)でした。予想通り、局所血流の有意な減少(p < 0,0001)を示す領域(青色)は、非血管新生移植片に対応します(図2)。

麻酔薬に対する良好な耐性は、すべての研究動物で見られました。しかし、ラボで得られた以前の結果(データは示さず)により、麻酔時間は動物の完全回復を可能にするために重要であり、優先的に45分を超えないことが明らかになりました。術後、ラットには大きな合併症もありませんでした。

図1:逆行性尿道造影(RUG)分析 。 (A)尿道形成術前(RUG1)および14日後の逆行性尿道造影(RUG2)の代表画像。(B)ミリメートルで表される直径の定量的評価は、尿道形成術の14日後に有意な増加を示しました。略語:RUG1 =尿道形成術前の逆行性尿道造影;RUG2 = 尿道形成術の 14 日後の逆行性尿道造影。群間の変化は、両側対応のあるt検定(n = 12)を用いて評価した。スケールバー:10 mm。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。

図2:レーザードップラー分析 。 (A)尿道形成術前と直後のレーザードップラーフローの代表的な画像。(B)血流を定量的に評価したところ、尿道形成術後の血液灌流が有意に減少した。グループ間の変化は、両側ウィルコクソンの一致ペア符号付き順位検定(n = 35)によって評価されました。スケールバー:0.5 cm。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。

Discussion

頬粘膜移植による尿道形成術は、尿道再建の主要な基礎です。しかし、合併症や罹患率を減らすために、すでに説明されているものを最適化し、組織工学材料や生物学的移植片などの新しい手順を確立するための革新的な手順を開発する必要があります。前臨床モデルを確立し、手術技術を定義するために、いくつかの手順が発表されています。Souzaら1は、12匹のニュージーランドウサギを対象とした^{研究を実施しました} 。腹側縦皮膚切開を行い、尿道を中膜から動員し、続いて尿道の背側部分を切除し、欠損を生じさせた。同時に、頬粘膜移植片を頬から採取し、7-0の吸収性縫合糸で背側オンレーとして配置しました。本研究では、雄のWistarラットを用いた。サイズが小さいため、技術的には要求が厳しくなりますが、取り扱いは簡単です。尿道狭窄の病態生理学と移植片の生理学を模倣するために、このモデルでは、尿道狭窄様疾患が以前に誘発されました 尿道形成術と同じ手術時に行われた尿道欠損とは対照的に。Souzaらと同様に、グラフトで尿道を閉じるためのランニング縫合糸^{も使用されました}1。それにもかかわらず、非吸収性縫合糸が使用されたのは、これにより、組織学的研究などのさらなる研究における移植片周囲の識別が可能になるためです。Martín-Canoら9は、Wistarラットを用いた^{モデルを開発しました。} 冠状下円周切開が行われ、続いて陰茎脱脂が行われ、良好な尿道露出が可能になりました。移植片は下唇から採取され、尿道は縦方向の腹側正中線切開によって開かれ、移植片は非吸収性のランニング縫合糸を備えた腹側オンレー方式で配置されました。手術中、尿道の特許を維持するために尿道カテーテルが留置されました。本明細書に記載のこの技術は、陰茎脱毛術の同じアプローチを用いており、これは、手技中に尿道の特許を保持するための尿道の良好な露出およびカテーテルの留置を可能にする。しかし、Martín-Canoらは、この手術で以前に尿道損傷を行っておらず、組織がより健康であったため、自然な移植片の採取に影響を与えた可能性があります。

実際、単純な尿道の損傷と治癒は、冠状下円周切開、陰茎脱脂、および尿道を損傷するための縦方向の腹側正中切開とそれに続くランニング縫合糸による閉鎖からなるWistarラットを用いたラットモデルを開発したHoferら¹⁰のような他の人によって評価されています。結論は、皮膚治癒に類似した炎症、増殖、成熟、およびリモデリングの段階で、尿道の治癒が起こるということでした。これは損傷部位に限定されるものではなく、尿道周囲組織の大部分および海綿体にも当てはまります。Tavucku et ^al.11は、Sprague-Dawleyラットを用いた尿道損傷のモデルについても記述しており、陰陰嚢腹側正中皮膚切開を行って尿道を露出させ、電気焼灼電流を流して尿道損傷を誘発しました。彼らのデータは、線維症の強力な指標であるI型コラーゲンとIII型コラーゲンの比率の増加を示しました。この理論的根拠に従えば、損傷した組織は健康な組織よりも線維化が多く、移植片の採取は両方の組織で等しくないと予想されます。尿道形成術が損傷した組織で行われると仮定すると、このモデルの主な利点は、通常の病態生理学的プロセスをよりよく模倣することです。もう一つの大きな利点は、狭窄誘発を確認し、後に尿道径に基づく尿道形成術の成功を確認するための逆行性尿道造影の実現です。実際、すべての動物は尿道形成術後に尿道径が改善し、手術の成功を示しています。Souza et ^al.1も逆行性尿道検査を実施しましたが、これは研究の終了時のみでした。この研究とTavukcu et ^al.11では、両方の尿道造影が行われ、尿道造影分析によって手順の有効性が結論付けられました。さらに、尿道形成術の前後に灌流評価を行い、頬粘膜移植片に対応する血管新生(青)の領域全体を確認しました。

それにもかかわらず、この手順には、ラットの尿道のサイズにより、要求の厳しい外科的技術、手術期間、揮発性麻酔の欠如など、いくつかの制限があります。しかし、大型の動物は技術的な実行を容易にしますが、げっ歯類に比べて利用可能な分子ツールが少なく、革新的な治療法の背後にある分子メカニズムを調査する上で制限される可能性があることを考慮することが重要です。別の制限は、尿道狭窄を誘発するために単一の方法を使用することであり、これは、外傷、感染、または先天性欠損症を含む他の多くの原因が原因であり、異なる病態生理学的表現型につながる可能性があります。しかし、電気焼灼は、シンプルで簡単で再現性のあるアプローチが可能で、一貫した結果が得られるため、使用されました。

私たちの知る限り、これは最初のラット手順です:(1)頬粘膜移植片の配置の1週間前に尿道狭窄を誘発することにより、移植前の局所病態生理学的環境を模倣します。(2)逆行性尿道造影による尿道狭窄とその解決を確認します。(3)レーザードップラーでグラフト位置を確認します。(4)実験モデルにより、グラフトの使用を最適化し、例えば、分子メカニズムを調査することができる組織工学材料に基づいて新しい治療戦略を開発し、臨床ニーズに合わせてトランスレーショナルサイエンスに影響を与えることができます。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Atipamezole	OrionPharma		ANTISEDAN (atipamezole) is indicated for the reversal of the sedative and analgesic effects.
Buprenorphine	RichterPharma		Buprenorphine is a derivative of the opioid alkaloid thebaine that is a more potent (25-40 times) and longer lasting analgesic than morphine.
Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Stereo Microscope	Carl Zeiss Microscopy, Germany		OPMI 1 FC from ZEISS symbolizes quality, precision and reliability. The manual system is easy to use and delivers high fidelity images with the legendary ZEISS optics.
Carprofen	Zoetis		Carprofen is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) of the propionic acid class.
Catheter 22 G. x 1''	B Braun	Introcan Safety	IV Catheter of fluorinated ethylene propylene (FEP) with firmer construction for arterial access.
Enrofloxacin	Bayer		Enrofloxacin is a fluoroquinolone antibiotic.
Fentanyl	Braun	3644960	Fentanyl is a powerful synthetic opioid analgesic.
Flumazenil	Fresenius Kabi		Benzodiazepine antagonist is used for the complete or partial reversal of the sedative effects caused by benzodiazepines.
High temperature cautery	Fiab	F7244	Disposable cautery, sterile, high temperature (1200 °C), 28 mm fine tip.
Instillagel gel	Farco-pharma		Cellulose-based lubricant with local anaesthetic and disinfecting properties.
Iopromide	Bayer		Non-ionic injectable contrast medium, with iodine.
Laser Doppler imaging system (perfusion imager moorLDI2-HIR and dedicated software)	MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK	5710	The angiogenesis models uses Laser Doppler imaging to assess blood perfusion in the hind limbs, one of which is ligated surgically. Dedicated measurement and comparison software allows the definition of regions of interest for blood flow assessment on the ischaemic versus non-ischaemic limb to establish a "reperfusion ratio" which can be assessed as often as needed and over a number of days on the same subject.
Lubrithal Eye Gel	Dechra		Eye gel used in animals for prevention of dry eyes during anaesthesia. Lubricating and moisturising action on cornea and conjunctiva.
Male Wistar Han IGS (Crl:WI(Han) rats	Charles River Laboratories, Spain		Twelve to fourteen-week-old
Metedomidin	Virbac	037/01/07RFVPT	Medetomidine is a synthetic drug used as surgical anesthetic.
Midazolam	Labesfal		Benzodiazepine medication is used for anesthesia and procedural sedation.
Monoplan Angiography System	Philips Medical Systems	Azurion 7 M20	A stationary diagnostic fluoroscopic x-ray system specifically designed to optimize the capability of users to visually and quantitatively evaluate the anatomy and function of blood vessels of the heart, brain and other organs, as well as the lymphatic system.
Mosquito forceps	Henry Schein	102-4346	Hartman-Mosquito Hemostatic Forcep Curved 3-1/2" Stainless Steel
Needle Holder	Henry Schein	100-2570	Needle holder Mayo-Hegar, stainless steel, 14 cm
Ophtalmic Needle Holder	Asico	AE-6143	Needle holder barranquer most delicate without lock
Pentobarbital Sodium	Ecuphar		Pentobarbital Sodium is the sodium salt of pentobarbital used for euthanasia.
Pointed Forceps	Aesculap	BD335R	Microforceps, 0.30 mm tip
Polysorb 6.0	Medtronic (Covidien)	UL-101	Coated Synthetic Absorbable Suture aimed to reduce the inflammatory reaction in tissues, followed by gradual encapsulation of the suture by fibrous connective tissue.
Providone-Iodine	Mylan		Povidone-iodine 10% is an antiseptic drug, used as a disinfectant before and after surgery.
Scalpel Blade nº11	B Braun	BB511	Carbon steel, sterile
Spring Scissor	Henry Schein	600-4826	Surgical scissors 31 castroviejo
Surgical Forceps	Aesculap	BD33R	Microforceps, 0.20mm tip
Surgical Scissor	Aesculap	MA873R	Micro Iris Scissor, curved shrap tips
SurgiPro 7.0	Medtronic (Coviden)	VP-702-X	Non-Absorbable Monofilament Polypropylene Suture indicated for use in general soft tissue ligation.