Summary
विभिन्न एक्स्ट्रागोनैडल ऊतकों और अंगों में कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) कई बीमारियों के रोगजनन से जुड़ा हुआ है। अंडाशय और FSH-उपचारित माउस मॉडल (OVF) का उपयोग FSH के एक्स्ट्रागोनैडल क्रियाओं का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।
Abstract
प्रजनन से एक गैर-प्रजनन चरण (रजोनिवृत्ति) में संक्रमण के दौरान, कई महिलाओं को महत्वपूर्ण शारीरिक और रोग संबंधी परिवर्तनों का अनुभव होता है, जिसमें हड्डी के द्रव्यमान में कमी, रक्त लिपिड में वृद्धि और आंत की चिपचिपाहट में वृद्धि शामिल है। रजोनिवृत्ति संक्रमण के दौरान कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) का स्तर बढ़ता है। कई अध्ययनों से पता चला है कि विभिन्न एक्स्ट्रागोनैडल ऊतकों और अंगों में एफएसएच कई बीमारियों के रोगजनन से जुड़ा हुआ है। इस प्रकार, एक पशु मॉडल का निर्माण करना जो विवो में एफएसएच के स्वतंत्र प्रभावों का अध्ययन करने में मदद कर सकता है, विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। इस अध्ययन में, C57BL/6 महिला चूहों को ओवरीएक्टोमाइज्ड किया गया और हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी-गोनाडल अक्ष के प्रभाव को खत्म करने के लिए एस्ट्राडियोल वालरेट (OVX + E2) के साथ पूरक किया गया। ओवीएक्स + ई 2 चूहों को अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजेन और बढ़ते एफएसएच स्तरों की विशेषता वाले माउस मॉडल (ओवीएफ) बनाने के लिए इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के माध्यम से विलायक (एनएस) या पुनः संयोजक एफएसएच की विभिन्न खुराक प्राप्त हुई। इस प्रकार, हमने रजोनिवृत्ति संक्रमण के प्रारंभिक चरण की नकल करने के लिए सफलतापूर्वक एक प्रयोगात्मक माउस मॉडल उत्पन्न किया, जो ऊंचा सीरम एफएसएच स्तरों की विशेषता है। ओवीएफ मॉडल में स्थिर, कम लागत और संचालित करने में आसान होने के फायदे हैं, जो एफएसएच के एक्स्ट्रागोनैडल कार्यों का पता लगाने के लिए अध्ययन के लिए उपयुक्त है। यहां, हम माउस OVF मॉडल के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं।
Introduction
रजोनिवृत्ति संक्रमण के दौरान कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) का स्तर बढ़ता है (रजोनिवृत्ति संक्रमण शब्द को 2011 में प्रजनन उम्र बढ़ने की कार्यशाला (स्ट्रॉ) + 10 प्रणाली के चरणों में परिभाषित किया गया था)1। यह रजोनिवृत्ति संक्रमण के दौरान होता है, एफएसएच स्तर बढ़ने और अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजन1 की विशेषता वाली अवधि, महिलाओं को मासिक धर्म चक्र में परिवर्तन और विभिन्न कोशिकाओं और ऊतकों से जुड़े महत्वपूर्ण शारीरिक परिवर्तनों का अनुभव होता है। ये परिवर्तन महिलाओं के जीवन की गुणवत्ता और स्वास्थ्य को गंभीर रूप से प्रभावित कर सकते हैं। एफएसएच के प्रभावों की खोज से महिलाओं के जीवन और स्वास्थ्य की गुणवत्ता में सुधार हो सकता है।
एफएसएच पूर्वकाल पिट्यूटरी में गोनैडोट्रोप कोशिकाओं से स्रावित होता है और गोनाडल फ़ंक्शन और प्रजनन को नियंत्रित करने में महत्वपूर्ण है2. एफएसएच का कार्य एफएसएच रिसेप्टर (एफएसएचआर) के माध्यम से मध्यस्थ है, जो जी प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर (जीपीसीआर)3से संबंधित है। एफएसएचआर आमतौर पर गोनाड, अर्थात् अंडाशय और वृषण में व्यक्त किया जाता है। यह साबित हो गया है कि एफएसएचआर सार्वभौमिक रूप से कई एक्स्ट्रागोनैडल कोशिकाओं और ऊतकों में व्यक्त किया जाता है, जिसमें यकृत4, हिप्पोकैम्पस5, ओस्टियोक्लास्ट6, एडिपोसाइट्स7 और एंडोथेलियल कोशिकाएं8 शामिल हैं। उभरते अध्ययनों ने एफएसएच के अतिरिक्त गोनाडल कार्यों और डिस्लिपिडेमिया4, अल्जाइमर रोग5, ऑस्टियोपोरोसिस 9,10, एथेरोस्क्लेरोसिस11, मोटापा9 और कैंसर12 में इसकी संभावित नैदानिक प्रासंगिकता का खुलासा किया है। इस प्रकार, एक पशु मॉडल का निर्माण जो विवो में एफएसएच के स्वतंत्र प्रभावों का अध्ययन करने में मदद कर सकता है, अकेले एफएसएच के कार्यों की खोज में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।
प्रोटोकॉल में, हम अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजन और बढ़ती एफएसएच स्तर13 के साथ एक माउस मॉडल की स्थापना के लिए प्रक्रिया शुरू की. माउस मॉडल ओवरीएक्टोमाइज्ड सर्जरी द्वारा रजोनिवृत्ति संक्रमण की नकल करता है और फिर एस्ट्राडियोल वालरेट और पुनः संयोजक एफएसएच के साथ पूरक होता है। चूंकि अंडाशय संचालित चूहों के साथ समान एस्ट्रोजन के स्तर को बनाए रखने के लिए बहिर्जात एस्ट्रोजेन के साथ पूरक किया गया था, पिट्यूटरी ग्रंथि में एस्ट्रोजेन प्रतिक्रिया के कारण अंतर्जात एफएसएच का स्तर स्थिर था। इस स्थिति में, यह एस्ट्रोजेन के स्तर को बदलने के बिना बहिर्जात एफएसएच को प्रशासित करके एफएसएच स्तर को नियंत्रित कर सकता है। इस प्रकार, ओवीएफ माउस मॉडल एस्ट्रोजेन के प्रभाव को बाहर कर सकता है और एफएसएच के एक्स्ट्रागोनैडल शारीरिक और रोग संबंधी प्रभावों का निरीक्षण कर सकता है। हमारा मानना है कि विस्तृत और विज़ुअलाइज्ड प्रक्रिया शोधकर्ताओं के लिए अपनी प्रयोगशाला में ओवीएफ माउस मॉडल स्थापित करने और आवश्यकतानुसार रजोनिवृत्ति संक्रमण के दौरान शारीरिक और रोग संबंधी परिवर्तनों की जांच करने के लिए इसे लागू करने के लिए उपयोगी है।
Protocol
निम्नलिखित प्रोटोकॉल अनुसंधान जानवरों के उपयोग के संबंध में सभी संस्थागत नैतिक दिशानिर्देशों का अनुपालन करता है और शेडोंग प्रांतीय अस्पताल, चीन में पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। सभी सर्जिकल जोड़तोड़ गहरी संज्ञाहरण के तहत किया गया था, और जानवरों को प्रक्रिया के दौरान किसी भी स्तर पर दर्द का अनुभव नहीं हुआ।
1. पूर्व ऑपरेशन तैयारी
- साधन नसबंदी
- भाप एक आटोक्लेव में शल्य चिकित्सा उपकरणों निष्फल (121 डिग्री सेल्सियस 15 मिनट के लिए) सर्जरी से पहले. पर्याप्त डिस्पोजेबल टांके और सुई तैयार करें।
- सर्जरी प्लेटफॉर्म सेटअप
- सर्जिकल प्रक्रियाओं के लिए समर्पित कमरे में सर्जरी करें। ऑपरेशन के लिए कम से कम 60 सेमी x 60 सेमी का बेंच क्षेत्र असाइन करें। 75% शराब के साथ क्षेत्र की सतह को साफ करें और एक डिस्पोजेबल चिकित्सा तौलिया के साथ कवर करें, और फिर इसे पराबैंगनी विकिरण 30 मिनट पहले (चित्रा 1 ए) कीटाणुरहित करें।
- पशु तैयारी
- एक 12 घंटे प्रकाश, 12 घंटे अंधेरे चक्र के साथ एक तापमान नियंत्रित कमरे (20-25 डिग्री सेल्सियस) में सभी जानवरों हाउस. सर्जरी से पहले 8 सप्ताह के लिए आवास सुविधा के लिए 57 सप्ताह की महिला C6BL/1 चूहों को अनुकूलित करें।
- सर्जरी से पहले चूहों का वजन। प्रक्रिया के दौरान किसी भी स्तर पर दर्द रहितता प्राप्त करने के लिए Tribromoethanol (280 मिलीग्राम / किग्रा) के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा सामान्य संज्ञाहरण के साथ सभी 9 सप्ताह की महिला चूहों का प्रशासन करें। मेलॉक्सिकैम (2 मिलीग्राम/किग्रा) को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें, दर्द से राहत के लिए ऑपरेशन से लगभग 1 घंटे पहले।
- सर्जरी के दौरान कॉर्नियल सूखापन को रोकने के लिए आंखों का मरहम लगाएं।
- एक साफ कपास झाड़ू का उपयोग करके पीठ पर बालों को हटाने लोशन लागू करें। लोशन 3-5 मिनट के लिए एक माउस पर बैठते हैं, तो धुंध और कपास झाड़ू का उपयोग कर बाल हटा दें. इस चरण को तब तक दोहराएं जब तक कि माउस के पीछे से सभी बाल हटा न दिए जाएं।
- 75% अल्कोहल के साथ त्वचा को साफ करने के लिए धुंध और कपास झाड़ू का उपयोग करें। सर्जरी प्लेटफॉर्म पर माउस को ठीक करें एक रबर की पट्टी या कपास रस्सी (चित्रा 1 बी) का उपयोग करके वापस लें और पीठ को साफ करने के लिए आयोडोफोर समाधान लागू करें।
नोट: ओवरीएक्टोमी से पहले एक पैर की अंगुली-चुटकी के माध्यम से संज्ञाहरण की गहराई की पुष्टि करें।
2. ओवरीएक्टोमी
नोट: ट्राइब्रोमोथेनॉल को लगभग 30 मिनट तक बनाए रखा जा सकता है, यह सुनिश्चित करना कि सर्जरी यथासंभव पूरी हो गई है।
- एक डिस्पोजेबल स्केलपेल का उपयोग करके जांघ के आधार से अनुदैर्ध्य रूप से एक ~ 1.0 सेमी पृष्ठीय चीरा बनाएं, यह सुनिश्चित करना कि केवल त्वचा और चमड़े के नीचे के प्रावरणी को उकसाया जाता है और इस समय पीछे के पेरिटोनियम में काटने से बचा जाता है।
- चीरा को बाईं ओर खींचें, और एक सफेद वसा पैड देखा जा सकता है। सूक्ष्म संदंश और कैंची का उपयोग intraperitoneal गुहा बेनकाब करने के लिए सफेद वसा पैड के साथ ~ 0.5 सेमी कटौती.
- पीछे पेरिटोनियम काटने के बाद, धीरे-धीरे और धीरे सूक्ष्म संदंश के साथ intraperitoneal गुहा से सफेद वसा पैड हटा दें. तुरंत लथपथ धुंध के बाहर 0.9% बाँझ खारा के साथ सफेद वसा ऊतक गीला. पेट की गुहा के बाहर रहते हुए उजागर ऊतक को हमेशा सिक्त रखें।
- एक गुलाबी दानेदार पदार्थ, अर्थात् अंडाशय, सफेद वसा पैड(चित्रा 2ए)के निचले हिस्से से जुड़ा होता है। अंडाशय एक पतली वाहिनी से जुड़े होते हैं, अर्थात् गर्भाशय। गर्भाशय के डिम्बग्रंथि अंत ligate और बाएं अंडाशय (चित्रा 2B) को हटाने के लिए 5-0 अवशोषक टांके का प्रयोग करें.
- एक अंडाशय को हटाते समय, आसपास के फैटी ऊतक को जितना संभव हो उतना संरक्षित करें। सर्जिकल उपकरणों और अंडाशय के बीच सीधे संपर्क से बचें और डिम्बग्रंथि ऊतक के इंट्रापेरिटोनियल आरोपण को रोकें।
- ध्यान से इंट्रापेरिटोनियल गुहा में वापस सफेद वसा पैड रखें। 5-0 शोषक सिवनी(चित्रा 2सी)के साथ पीछे पेरिटोनियम पर एक सरल आंतरायिक सिवनी करें। सिवनी पूरा होने के बाद, 0.9% बाँझ खारा लथपथ धुंध के साथ किसी भी खून बह रहा साफ है.
- त्वचा चीरा को दाईं ओर खींचें और उसी विधि का उपयोग करके दाएं अंडाशय को हटा दें।
- 4-0 गैर-शोषक टांके के साथ एक आंतरायिक सिवनी करें और 0.9% बाँझ खारा लथपथ धुंध(चित्रा 2डी)के साथ किसी भी रक्तस्राव को साफ करें।
- दोनों टांके को पूरा करने के बाद घाव को आयोडोफोर समाधान से साफ करें। इंट्रापेरिटोनली व्यापक स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक दवाओं को इंजेक्ट करें।
3. ऑपरेशन के बाद का अवलोकन
- सर्जरी के बाद चूहों को 37 डिग्री सेल्सियस लगातार तापमान कंबल में ले जाएं। जब तक चूहों स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित कर सकते हैं, अपने व्यक्तिगत पिंजरे में जानवरों को रखने. पशु लावारिस मत छोड़ो जब तक यह पर्याप्त चेतना प्राप्त कर लिया है स्टर्नल recumbency बनाए रखने के लिए.
- दर्द से राहत के लिए ऑपरेशन के 24 घंटे बाद मेलॉक्सिकैम (2 मिलीग्राम/किग्रा) को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें।
- यह सुनिश्चित करने के लिए प्रतिदिन चूहों की निगरानी करें कि सर्जिकल घाव जटिलताओं (स्फुटन) के किसी भी संकेत के बिना ठीक से ठीक हो रहा है।
4. एस्ट्राडियोल पूरकता
- एस्ट्राडियोल वैलेरेट के साथ पूरक फ़ीड तैयार करें। प्रति 1 किलो फ़ीड पूरक 2.6 मिलीग्राम बीटा-एस्ट्राडियोल 17-वैलेरेट का उपयोग करें।
- सर्जरी के पूरा होने के 3 दिन बाद, चूहों को एस्ट्राडियोल वालरेट के साथ खिलाएं।
5. एफएसएच इंजेक्शन
- पुनः संयोजक मानव एफएसएच समाधान तैयार करें। 0.9% बाँझ खारा के साथ इंजेक्शन के लिए पुनः संयोजक मानव एफएसएच पाउडर को 100 आईयू / एमएल में भंग करें।
- प्रयोगात्मक योजनाओं के अनुसार समूह चूहों और 2 सप्ताह के लिए intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से पुनः संयोजक एफएसएच के विलायक या विभिन्न खुराक दे. पुनः संयोजक एफएसएच की जैविक गतिविधि के अनुसार, रजोनिवृत्ति संक्रमण अवधि के दौरान महिलाओं में सीरम एफएसएच स्तर के बराबर चूहों में एफएसएच की इंजेक्शन खुराक का उपयोग करें।
नोट: विभिन्न उपचारों के आधार पर, अंडाशय एस्ट्रोजन-पूरक चूहों को बेतरतीब ढंग से तीन समूहों में विभाजित किया गया था, विलायक (एनएस) समूह 100 माइक्रोन / दिन विलायक, कम खुराक एफएसएच (एल-एफएसएच) समूह प्राप्त करने वाले समूह को प्रति दिन 15 आईयू / किग्रा शरीर का वजन प्राप्त होता है और उच्च खुराक एफएसएच (एच-एफएसएच) समूह प्रति दिन 30 आईयू / किग्रा शरीर का वजन प्राप्त करता है।
Representative Results
ओवीएफ माउस मॉडल अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजन और बढ़ते एफएसएच स्तर13 के साथ रजोनिवृत्ति संक्रमण के प्रारंभिक चरण की नकल करता है। सबसे पहले, अंडाशय हटाने की सर्जरी के लिए, 9 सप्ताह की महिला C57BL/6 चूहों को सामान्य संज्ञाहरण दिया गया और या तो एक शम ऑपरेशन (शम) या द्विपक्षीय ओवरीएक्टोमी (OVX) के अधीन किया गया। जैसा कि पापानिकोलाउ दाग वाली कोशिकाओं की धब्बा छवियों ने स्पष्ट रूप से प्रोस्ट्रस, एस्ट्रस, मेटेस्टस और एस्ट्रस चक्र के डायस्ट्रस चरणों की पहचान की, ओवीएक्स चूहों ने एस्ट्रस चक्र(चित्रा 3ए)खो दिया, और एलिसा विधि ने सीरम एस्ट्राडियोल(ई2) स्तर(चित्रा 3बी)में उल्लेखनीय कमी दिखाई। दूसरा, ओवीएक्स चूहों को बीटा-एस्ट्राडियोल 17-वैलेरेट (ओवीएक्स + ई 2) के साथ पूरक किया गया था ताकि शाम समूह के समान स्तर पर सीरम एस्ट्रोजन को बनाए रखा जा सके। तीसरा, ओवीएक्स + ई 2 चूहों को अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजेन और बढ़ते एफएसएच स्तर(चित्रा 4)द्वारा विशेषता माउस मॉडल (ओवीएफ) बनाने के लिए इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के माध्यम से विलायक (एनएस) या पुनः संयोजक एफएसएच की विभिन्न खुराक प्राप्त हुई।
चित्र 1. सर्जिकल वातावरण और माउस मुद्रा। (ए) ऑपरेशन के लिए कम से कम 60 सेमी x 60 सेमी का एक बेंच क्षेत्र। 75% अल्कोहल के साथ क्षेत्र की सतह को साफ करें और इसे डिस्पोजेबल मेडिकल तौलिया के साथ कवर करें, और फिर पराबैंगनी विकिरण के साथ 30 मिनट पहले कीटाणुरहित करें। (बी) सर्जरी मंच पर माउस को ठीक करें एक रबर की पट्टी या कपास रस्सी का उपयोग कर। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 2. सर्जिकल ऑपरेशन के प्रमुख चरण। (ए) डिम्बग्रंथि की स्थिति, (बी) ओवरीएक्टोमी, (सी) सिवनी पेरिटोनियम, और (डी) सिवनी त्वचा चीरा। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3. योनि कोशिका विज्ञान। योनि कोशिका विज्ञान अंडाशय चक्र के चरणों का प्रतिनिधित्व करता है और अंडाशय चूहों (OVX) और शम संचालित लोगों में अंतर्जात एस्ट्रोजन (शाम; n = 12 शाम समूह के लिए; n = 10 प्रति OVX समूह)। (ए) योनि कोशिका विज्ञान ल्यूकोसाइट्स, कॉर्निफाइड उपकला कोशिकाओं और न्यूक्लियेटेड उपकला कोशिकाओं की सापेक्ष उपस्थिति के अनुसार एस्ट्रस चक्र के चरणों का प्रतिनिधित्व करता है। एस्ट्रस के चरणों में प्रोस्ट्रस शामिल हैं, न्यूक्लियेटेड उपकला कोशिकाओं की प्रबलता; एस्ट्रस, एन्यूक्लिएटेड कॉर्निफाइड कोशिकाओं की प्रबलता; मेटेस्ट्रस, ल्यूकोसाइट्स की उपस्थिति, और कॉर्निफाइड और न्यूक्लियेटेड एपिथेलियल कोशिकाएं; डायस्ट्रस, ल्यूकोसाइट्स की प्रबलता। स्केल बार = 100 माइक्रोन। (बी) अंडाशय चूहों (OVX) और शम संचालित लोगों (शाम) में अंतर्जात एस्ट्रोजन. डेटा को SEM ± माध्य के रूप में दिखाया जाता है। छात्र के t-परीक्षण का उपयोग सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए किया जाता है। पी< 0.001। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4. ओवीएफ मॉडल और सीरम हार्मोन का स्तर। (ए) फ्लो-चार्ट ओवीएफ मॉडल। (बी) सीरम एस्ट्रोजन (ई 2) और एफएसएच सांद्रता का एलिसा विश्लेषण। डेटा को माध्य ± SEM के रूप में दर्शाया जाता है। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए एक तरफा एनोवा का उपयोग किया गया था। * पी< 0.05 और ** पी< 0.01। इस आंकड़े को4 से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
Discussion
प्रजनन से गैर-प्रजनन चरण (रजोनिवृत्ति) में संक्रमण के दौरान, कई महिलाएं महत्वपूर्ण शारीरिक और रोग संबंधी परिवर्तनों का अनुभव करती हैं। रजोनिवृत्ति संक्रमण के दौरान एफएसएच का स्तर बढ़ताहै 1. उभरते अध्ययनों से पता चला है कि विभिन्न एक्स्ट्रागोनैडल ऊतकों और अंगों में एफएसएच डिस्लिपिडेमिया4, अल्जाइमर रोग5, ऑस्टियोपोरोसिस 9,10, एथेरोस्क्लेरोसिस11, मोटापा9 और कैंसर12 सहित कई बीमारियों के रोगजनन में महत्वपूर्ण है। इस प्रकार, एक पशु मॉडल का निर्माण करना जो विवो में एफएसएच के स्वतंत्र प्रभावों का अध्ययन करने में मदद कर सकता है, विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। ओवीएफ माउस मॉडल अपेक्षाकृत स्थिर एस्ट्रोजन और बढ़ते एफएसएच स्तरों के साथ रजोनिवृत्ति संक्रमण के प्रारंभिक चरण की नकल करता है और एफएसएच के एक्स्ट्रागोनैडल कार्यों का पता लगाने के लिए अध्ययन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है।
इस विधि में, ओवरीएक्टोमी जांघ आधार से ऊपर की ओर लगभग 1 सेमी(चित्रा 1बी)एक एकल पृष्ठीय वापस चीरा का उपयोग कर बनाया गया था. त्वचा को तेज विदारक कैंची का उपयोग करके पृष्ठीय मांसपेशियों के साथ लगभग एक साथ काट दिया गया था, और पेरिटोनियल गुहा इस प्रकार पहुँचा गया था। ऑपरेशन के बाद, मांसपेशियों चीरा कोई suturing की आवश्यकता है, और त्वचा घाव एक catgut सिवनी (चित्रा 2) के साथ द्विपक्षीय बंद कर दिया गया था. ऑपरेशन तकनीकी रूप से आसान है, कम समय लेने वाला है, और अन्य तरीकों की तुलना में मादा चूहों के लिए कम हानिकारक है।
कुछ विवरण जिन्हें सर्जरी प्रक्रिया के दौरान ध्यान दिया जाना चाहिए। सबसे पहले, सभी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं को पश्चात संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए साफ और जितना संभव हो उतना बाँझ रखा जाना चाहिए। दूसरा, क्योंकि डिम्बग्रंथि ऊतक बहुत नाजुक है, शल्य चिकित्सा उपकरणों intraperitoneal आरोपण से बचने के लिए, ओवरीएक्टोमी के दौरान सीधे अंडाशय से संपर्क नहीं कर सकते. तीसरा, सर्जरी के बाद, चूहों को पोस्टऑपरेटिव हाइपोथर्मिया को रोकने के लिए वसूली के दौरान 37 डिग्री सेल्सियस निरंतर तापमान कंबल में ले जाया गया, जिससे मृत्यु हो गई।
पिछले एक अध्ययन ने साबित कर दिया है कि अंतर्जात एस्ट्रोजन को प्रीमेनोपॉज़ल महिलाओं की डिम्बग्रंथि थेका कोशिकाओं या पोस्टमेनोपॉज़ल महिलाओं के स्तन की वसा स्ट्रोमल कोशिकाओं में और परिधीय ऊतक14 में मामूली मात्रा में संश्लेषित किया जाता है। सीरम एस्ट्रोजन अंडाशय चूहों के लिए तेजी से गिरा लेकिन (चित्रा 3 बी) को समाप्त नहीं किया जा सकता है। हालांकि, एक्स्ट्रागोनैडल ऊतक में संश्लेषित अंतर्जात एस्ट्रोजन ओवीएफ मॉडल(चित्रा 4बी)में एस्ट्रोजन के स्तर की स्थिरता को प्रभावित नहीं करता है।
OVF मॉडल में कुछ सीमाएँ हैं। एक बार सर्जिकल ऑपरेशन सावधान नहीं होता है और डिम्बग्रंथि इंट्रापेरिटोनियल आरोपण की ओर जाता है, इससे मॉडल विफलता हो सकती है। इस मामले में, सीरम एस्ट्रोजन तेजी से नहीं गिरता है और एस्ट्रस चक्र के विभिन्न चरणों के दौरान उतार-चढ़ाव करता है। एस्ट्रोजन और एफएसएच के बहिर्जात प्रशासन के बाद, शरीर को संतुलन तक पहुंचने में लगभग 1 सप्ताह लगता है। इस प्रकार, 1 सप्ताह के भीतर होने वाले ओवीएफ मॉडल के पैथोलॉजिकल परिवर्तन एफएसएच के प्रभावों का संकेत नहीं दे सकते हैं।
अंत में, OVF मॉडल के स्थिर, कम लागत वाले और संचालित करने में आसान होने के फायदे हैं। एफएसएच के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के बाद उच्च-स्तरीय एफएसएच के प्रणालीगत प्रभाव देखे जा सकते हैं; यही है, ओवीएफ मॉडल उन अध्ययनों के लिए उपयुक्त है जो एफएसएच के एक्स्ट्रागोनैडल कार्यों का पता लगाते हैं। हालांकि, मॉडल सर्जरी और इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन प्रक्रियाओं के लिए आवश्यकताएं काफी अधिक हैं। यदि फंडिंग पर्याप्त है, तो विशिष्ट नॉकआउट मॉडल सबसे अच्छा विकल्प हैं।
Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
हम तकनीकी सहायता के लिए शेडोंग प्रांतीय अस्पताल की पशु प्रयोगशाला को धन्यवाद देना चाहते हैं। इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (NSFC 82101645), शेडोंग प्रांत, चीन (ZR2020QH088) के नेचुरल साइंस फाउंडेशन और शेडोंग प्रांत (2021KJ051) में कॉलेजों के युवा नवाचार के लिए विज्ञान और प्रौद्योगिकी सहायता योजना द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| beta-estradiol 17-valerate | Macklin | E829824 | |
| Estradiol sensitive ELISA | Demeditec | DE4399 | |
| Hematoxylin Staining Solution | Beyotime | C0107 | |
| Meloxicam | Aladdin | M129228 | |
| recombinant human Follicle-stimulating hormone | Merck Serono | N19Z8803G | |
| Tribromoethanol | Sigma | T48402 | Aliphatic name: 2,2,2-Tribromoethanol |
References
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