هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 2 من 3.
Abstract
هذا الفيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEF) الخلايا المغذية ، وكيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لتغذية خالية من الخلايا لوحات Matrigel.
Protocol
hESC صيانة الثقافة اليومية يجب تغيير الثقافة وسائل الإعلام كل ساعة hESC 24. من المخزون ES زجاجة الوسائط المخزنة في 4 درجات مئوية ، واخراج كمية من محلول اللازمة (~ 20ml في 6 – جيدا لوحة) ، ضع في أنبوب الصقر 50ml ، ودافئة إلى 37 درجة مئو…
Discussion
هذا الفيديو يوضح كيفية الانتقال من لوحات hESCs MEF لوحات التغذية Matrigel خالية من الخلايا. علما بأن كثافة مستعمرة على Matrigel أعلى من كثافة المستعمرات من خلال تقسيم المعتاد على MEFs. وهناك حاجة وتلطيخ المناعي الخلوي المجهري أو تدفق للعلامات hESC تعدد القدرات ، مثل أكتوبر وSSEA – 4 – 4 ، لتأكيد الح?…
Acknowledgements
وتدعم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الدراسات في المختبر Teitell بواسطة معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) منح البذور RS1 – 00313. نشكر أعضاء المركز واسع في الطب التجديدي ، وأبحاث الخلايا الجذعية في جامعة كاليفورنيا ، وخصوصا الدكتور Amander كلارك ، والدكتور جيروم زاك ، وأعضاء معهد الجذعية في جامعة كاليفورنيا واسع مرفق الخلية الأساسية لدعمهم لدراساتنا.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .Science. 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).
Khvorostov, I., Zhang, J., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e831, doi:10.3791/831 (2008).