Summary

MEFS Matrigel 2 Matrigel üzerine MEFS Yarma hESC:

Published: June 09, 2008
doi:

Summary

Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm 2

Abstract

Bu video MEF plakaları geçiş hESC nasıl fare embriyonik fibroblast besleyici hücre ücretsiz Matrigel plakaları (MEF) besleyici hücreler, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir.

Protocol

hESC kültür günlük bakım hESC kültür ortamı, her 24 saatte bir değiştirilmesi gerekir. 4 ° C'de depolanan ES medya stok şişesi, gerekli (6 plaka başına ~ 20ml) çözüm miktarı 50ml şahin tüp içindeki yeri ve bir su banyosunda 37 ° C sıcak çıkarın. Medya ısındı sonra, nihai konsantrasyonu 10 ng 4 saklanan bFGF ° C ekleyin. 4 ° C, kullanımdan hemen sonra geri bFGF stok koy! 6 kuyucuğu çıkar ama medya 500μl ~. Girdap enkaz kaldırma için askıya alma kültürü ?…

Discussion

Bu video nasıl geçit hESC MEF plakalardan besleyici, hücre Matrigel plakaları göstermektedir. Matrigel koloninin yoğunluğu MEFS olağan bölerek yoğunluğu kolonilerin daha yüksek olduğunu unutmayın. Ekim-4 ve SSEA-4, hESC pluripotency belirteçleri, immünofloresan boyaması ve mikroskobu veya flow sitometri besleyici-kültür koşullarında farklılaşmamış bir devlet hESC bakım onaylamak için ihtiyaç vardır.

Acknowledgements

Teitell laboratuar İnsan embriyonik kök hücre çalışmaları California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) tohum hibe RS1-00313 tarafından desteklenmektedir. Geniş, UCLA, özellikle Dr. Amander Clark, Dr Jerome Zack ve verdikleri destek için çalışmalarımız UCLA Broad Enstitüsü Kök Hücre Çekirdek Tesis üyeleri Rejeneratif Tıp ve Kök Hücre Araştırma Merkezi üyelerine teşekkür ederiz.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Knockout Serum Replacer (KSR) Reagent Gibco 10828-028  
DMEM/F12 Reagent Gibco 11330-057  
Non-essential Amino Acids Reagent Gibco 11140-050  
GlutaMax Reagent Gibco 35050-061  
DMEM Reagent Gibco 11995-065  
FBS Reagent Clontech 631107  
L-glutamine Reagent Gibco 25030-081  
BME Reagent Fisher BP176-100  
bFGF Reagent R&D Systems 233-FB-025  
Collagenase IV Reagent Gibco 17104-019  
Dispase Reagent Stem Cell Technologies 17105-041  
Penicillin / Streptomycin Reagent Gibco 15140-122  
Gelatin Reagent Chemicon ES-006-B  
Matrigel Reagent BD Biosciences 354277  
Oct-4 antibody Reagent Santa Cruz Biotechnology SC-9081  
anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 Reagent R&D Systems FAB1435P  
FITCI-conjugated antirabbit IgG Reagent Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. 715-095-152  

References

  1. Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
  2. Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).

Play Video

Cite This Article
Khvorostov, I., Zhang, J., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e831, doi:10.3791/831 (2008).

View Video