Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm 2
Abstract
Bu video MEF plakaları geçiş hESC nasıl fare embriyonik fibroblast besleyici hücre ücretsiz Matrigel plakaları (MEF) besleyici hücreler, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) nasıl büyümeye göstermektedir.
Protocol
hESC kültür günlük bakım hESC kültür ortamı, her 24 saatte bir değiştirilmesi gerekir. 4 ° C'de depolanan ES medya stok şişesi, gerekli (6 plaka başına ~ 20ml) çözüm miktarı 50ml şahin tüp içindeki yeri ve bir su banyosunda 37 ° C sıcak çıkarın. Medya ısındı sonra, nihai konsantrasyonu 10 ng 4 saklanan bFGF ° C ekleyin. 4 ° C, kullanımdan hemen sonra geri bFGF stok koy! 6 kuyucuğu çıkar ama medya 500μl ~. Girdap enkaz kaldırma için askıya alma kültürü ?…
Discussion
Bu video nasıl geçit hESC MEF plakalardan besleyici, hücre Matrigel plakaları göstermektedir. Matrigel koloninin yoğunluğu MEFS olağan bölerek yoğunluğu kolonilerin daha yüksek olduğunu unutmayın. Ekim-4 ve SSEA-4, hESC pluripotency belirteçleri, immünofloresan boyaması ve mikroskobu veya flow sitometri besleyici-kültür koşullarında farklılaşmamış bir devlet hESC bakım onaylamak için ihtiyaç vardır.
Acknowledgements
Teitell laboratuar İnsan embriyonik kök hücre çalışmaları California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) tohum hibe RS1-00313 tarafından desteklenmektedir. Geniş, UCLA, özellikle Dr. Amander Clark, Dr Jerome Zack ve verdikleri destek için çalışmalarımız UCLA Broad Enstitüsü Kök Hücre Çekirdek Tesis üyeleri Rejeneratif Tıp ve Kök Hücre Araştırma Merkezi üyelerine teşekkür ederiz.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .Science. 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).
Khvorostov, I., Zhang, J., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e831, doi:10.3791/831 (2008).