本视频演示了原位杂交的方法,其中2个不同的基因的时空表达模式可以在年轻的鸡胚显示2色整装。这种方法最初是由大卫威尔金森,多明戈斯恩里克,菲尔英厄姆和大卫ISH – Horowicz。
鸡胚是一个有价值的工具,在早期胚胎发育的研究。其透明度,可获得性和易于操纵,使其用于研究基因表达在脑,神经管,体节和心脏原基形成的理想工具。本视频演示了不同的步骤,在2色整装原位杂交;首先,胚胎从卵解剖和多聚甲醛固定。二,预杂交胚胎处理。具有两种不同的探针,再加上挖一个,并再加以FITC标记的杂交胚胎。杂交过夜后,胚胎培养与辛加上抗体。辛基板颜色反应的进行,和感兴趣的区域显示为蓝色。胚胎,然后加上与FITC标记抗体孵育。胚胎处理颜色用FITC反应,和感兴趣的区域显示为红色。最后,胚胎是固定的,为phtograph处理和切片。还介绍了故障排除指南。
2色整装原位杂交方法是用来确定空间和时间的基因表达模式,使用一个或两个基因的兴趣。应用领域包括新基因的基因表达模式的评估 (如1,2,以及以下侮辱基因表达的变化(3 胚胎操作 ,珠4,RNA 或DNA电构造5)。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是支持的玛格丽特M. Alkek基金会RHF。