इस वीडियो से पता चलता है कि कैसे एक प्रोग्राम खींचने का उपयोग इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए पैच pipettes और तेज इलेक्ट्रोड बनाने. उसी प्रक्रिया के लिए इंजेक्शन सुई सहित काँच उपकरण की एक किस्म बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है है.
Abstract
ग्लास microelectrodes (pipettes भी कहा जाता है) इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के दशकों के लिए एक workhorse किया गया है. आज, ऐसे pipettes गिलास capillaries से बना रहे हैं एक प्रोग्राम खींचने का उपयोग कर. इस तरह के उपकरणों या तो एक धातु फिलामेंट या एक लेजर और बाहर गुरुत्वाकर्षण, एक मोटर या दोनों का उपयोग करते हुए कांच आकर्षित का उपयोग केशिका गर्मी. पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए pipettes केवल गर्मी और गुरुत्व का उपयोग का गठन कर रहे हैं, जबकि intracellular रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोड तेज गर्मी, गुरुत्वाकर्षण, और एक मोटर का एक संयोजन का उपयोग करें. intracellular रिकॉर्डिंग pipettes बनाने के लिए इस्तेमाल की प्रक्रिया के लिए आवेदनों की एक किस्म के लिए इंजेक्शन सुई Xenopus oocytes में क्रेना इंजेक्शन सहित, बनाने के लिए इस्तेमाल करने के लिए इसी तरह की है. सामान्य, केशिका गिलास में <व्यास में 1.2 मिमी पैच दबाना रिकॉर्डिंग के लिए pipettes करने के लिए प्रयोग किया जाता है, जबकि संकरा कांच intracellular रिकॉर्डिंग (बाहरी व्यास = 1.0 मिमी) के लिए प्रयोग किया जाता है. प्रत्येक उपकरण के लिए, खींचने थोड़ा अलग क्रमादेशित है. इस वीडियो से पता चलता है कि रिकॉर्डिंग pipettes पूर्व स्थापित खींचने प्रोग्राम का उपयोग कर के दोनों प्रकार बनाने के लिए.
Protocol
पुलिंग pipettes P-97 ज्वलंत / ब्राउन Sutter के रूप में खींचने जैसे microelectrode का उपयोग, लगभग 10-20 pipettes का एक सेट खींचो. अपने केशिका गिलास का चयन करें. हम borosilicate capillaries (BF150-110-10 Sutter, 1.5mm बाहरी व्यास, 1.1mm भीतरी व्यास, लंबे 10cm) का ?…
Discussion
प्रोटोकॉल सचित्र यहाँ इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रयोगशालाओं में दैनिक उपयोग में है और यह भी कोशिकाओं और जानवरों के लिए इंजेक्शन सुई बनाने के लिए इस्तेमाल किया. एक प्रोग्राम खींचने के साथ, यह आसान है का उपयोग करत?…
Acknowledgements
स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान, राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन, अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन, पेशी Dystrophy एसोसिएशन, डोनाल्ड बी और डेलिया ई. बैक्सटर फाउंडेशन, Klingenstein फंड और तंत्रिका विज्ञान के लिए McKnight बंदोबस्ती: हम निम्नलिखित वित्तपोषी एजेंसियों और नींव समर्थन के लिए धन्यवाद.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Micropipette Puller
Instrument
Sutter Instruments
P-97
Or similar instrument (e.g. Sutter P-87 or P-2000)
Glass Capillaries
Reagent
Sutter Instruments
BF150-86-10
Or, similar capillary glass. To make filling the pipette easier, use a capillary with a glass filament.
L. Brown, A., E. Johnson, B., B. Goodman, M. Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller. J. Vis. Exp. (20), e939, doi:10.3791/939 (2008).