İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Laboratuvarımız uzun yıllardır vasküler düz kas kasılmalarını ölçmek için tel miyograf yöntemini kullanmaktadır. Bu tekniği düz kas kasılma mekanizmasını incelemek için kullanıyoruz. Bu yöntemi, hipertansiyon tedavisi için yeni ilaçları araştırmak için kullanıyoruz.

Bu tekniğin temel avantajı, damar segmentinin montajdan sonra en az dört saat hayatta kalması ve yüksek potasyumun neden olduğu kasılmayı birçok kez korumasıdır. Çok kanallı sistem, yeni ilaçların yüksek tedavi taraması için fırsat verir. Ötenazi yapılan farenin vücudunu karnı yukarı bakacak şekilde sabitleyin ve karnı% 70 etanol ile nemlendirin.

Daha sonra, kasıktan ventral orta hat boyunca cildi kesmek için makas kullandıktan sonra, ilk insizyonun başlangıcından itibaren her bacağa doğru kesiler yapın. Cildi her iki taraftan geriye doğru çekin, ardından peritonu açmak için benzer kesiler yapın. Daha sonra, gastrointestinal sistemi vücuttan besleme damarları ile tamamen izole etmek için yemek borusu, kolon ve diğer bağ dokularını kesmek için makas kullanın.

GI yolundan kanı HEPES-Tyrode veya H-T solüsyonu ile duruladıktan sonra, izole edilen segmenti oda sıcaklığında mezenterik arter diseksiyonu için kaplanmış bir Petri kabına aktarın. Mide, jejunum, ileum ve çekumu saat yönünde düzeltin ve mide ve çekumu sırasıyla sol ve sağ tarafa sabitleyin. Stereoskopik mikroskobun transmisyon ışık kaynağını açın ve diseke mezenterik arterleri ortaya çıkarmak için bağırsağı pimlerle sabitleyin.

Daha sonra atardamarların etrafındaki yağ dokularını forseps ile sıkıştırın ve diseksiyon makası ile tüm bağ dokularını keserek atardamarları dikkatlice izole edin. Fazla bir arteri forseps ile kavrayın ve mezenterik arter ağacını soğuk kalsiyum iyonu içermeyen H-T çözeltisine aktarın ve daldırın. Mezenterik bir pasajın bağırsak duvarına proksimaldeki arterin 1.4 milimetrelik bir kısmını kesin ve bu arter segmentinin her iki tarafını dikkatlice açmak için iki forseps kullanın.

2,5 santimetre uzunluğunda iki parça paslanmaz çelik tel hazırlayın ve bunları aynı tabağa yerleştirin. Arterin bir ucunu nazikçe sıkıştırmak için forseps kullanın. Ardından, iki teli arterin lümenine tek tek dikkatlice yerleştirmek için başka bir forseps kullanın.

Tellerin düz tutulduğundan ve endotelyuma temas etmediğinden emin olun. İki forseps kullanarak, her iki teli de dişli kabın dışına aynı anda sıkıştırın ve kabı Petri kabından dikkatlice H-T çözeltisi ile doldurulmuş bir miyograf odasına aktarın. Montaj için yer açmak için haznenin çenelerini birbirinden ayırın, ardından iki forseps kullanarak yerleştirilen iki telden birinin her iki tarafını kavrayın ve kabı çene boşluğuna yerleştirin.

Sıkıştırılmış telin her iki tarafını mikrometreye bağlı çenenin vidalarının etrafına sarın. Sol taraftaki vidayı saat yönünde çevirerek sabitleyin. Ardından teli düzeltmek için forseps kullanın.

Ardından, sağ taraftaki vidayı saat yönünde çevirerek sabitleyin. Damarın her zaman çene boşluğunun içinde olduğundan emin olun, ancak hasarı önlemek için çeneye dokunmayın. Mikrometreyi kullanarak iki çeneyi kapatın.

İki çenenin yeterince yakın olduğundan, ancak birbirine değmediğinden ve sabitlenmemiş telin sabit telin üzerinde olduğundan emin olun. Sağ forsepsleri kullanarak, kuvvet dönüştürücüsüne bağlı çenenin köşesindeki vidasız teli dikkatlice katlayın ve sağ taraftaki vidanın etrafına saat yönünde sarın. Ardından vidayı sabitleyin.

Telin sol tarafının açılmasını ve sarılmasını tekrarlayın ve sol taraftaki vidayı sabitleyin. Daha sonra, mikrometreyi dikkatlice döndürerek kabı germeden çeneleri hafifçe birbirinden ayırın, böylece iki çene arasındaki boşluk iki teli barındırabilir. Ardından, mikrometre tarafındaki teli dönüştürücü tarafındaki telin yatay düzlemine hareket ettirmek için forseps kullanın.

Arterleri diğer odalara monte ettikten sonra, tüm odaları ekipmana bağlayın ve odaların üzerini kapatın. %100 oksijen kaynağını ve bir sıcaklık probunu takın ve 37 santigrat dereceye kadar ısıtmaya başlayın. Grafik yazılımını açın.

Kayda başlamak için Başlat düğmesine basın. İlgili kanal için DMT normalleştirme penceresini açmak için DMT menüsünden ilgilendiğiniz kanalı seçin. Pencereye aşağıdaki sabit değerleri girin: Doku uç noktaları a1, 0.1; Doku uç noktaları a2, 4; Tel çapı, 40.

Pencere daha sonra hesaplanan kap uzunluğunu 1,40 milimetre olarak gösterir. Uygun doku odasının mikrometresini okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değeri girin ve Nokta Ekle'düğmesine tıklayın.

Bu değer, X'in başlangıç değeridir.60 saniyelik bir gecikmeden sonra, pencere bu mikrometre değerine karşılık gelen kuvveti ve etkin basıncı görüntüler. Eş zamanlı olarak mikrometre okuma kutusu aktif hale gelir. Mikrometreyi saat yönünün tersine çevirerek normalleştirilen kabı gerin.

Mikrometre değerini mikrometre okuma kutusuna girin ve Nokta Ekle' butonuna tıklayın. Tekrar 60 saniyelik bir gecikme süresi bekleyin. Kabı germeye devam edin ve pencere, kabı IC-one'ına germek için gereken hesaplanan mikrometre ayarı olan mikrometre X-one değerini gösterene kadar mikrometre değerleri ekleyin.

Mikrometreyi X-one değerine ayarlayın. Normalizasyondan sonra, haznedeki kabı 15 ila 20 dakika dengeleyin. Dengelendikten sonra, 10 dakika boyunca kasılmayı indüklemek için HT çözeltisini 5 mililitre yüksek potasyum çözeltisi ile değiştirerek kabı yüksek potasyum çözeltisi ile zorlayın.

10 dakikalık inkübasyonu taze yüksek potasyum çözeltisinde tekrarladıktan sonra, beş mililitre H-T çözeltisi ile üç ila dört kez yıkayın. Yine, kasılmayı indüklemek için damarı beş mililitre yüksek potasyum çözeltisi ile zorlayın. Beş dakika sonra, kabı bir mikromolar Neoliensinin son konsantrasyonunda gevşetmek için hazneye 0.5 mikrolitre Neoliensinin stok çözeltisi ekleyin.

Kuvvet birkaç dakika sonra stabil olduğunda, konsantrasyonu iki mikromolar seviyeye çıkarmak için 0.5 mikrolitre daha Neoliensinine stok çözeltisi ekleyin. Doz yanıt eğrisini oluşturmak için konsantrasyonu dört, altı, sekiz ve 10 mikromolar'a çıkarmak için her seferinde bir mikrolitre stok çözeltisi ekleyin. Normalizasyon prosedürü sırasında, kap IC-100 değerine ulaşana kadar birkaç kez gerildi ve her gerilmiş döngü, 60 saniye içinde sağlam bir kasılma, hızlı gevşeme ve bir kuvvet bakımı içeriyordu.

Yüksek potasyum çözeltisinin neden olduğu vasküler düz kasın kasılması genellikle iki faz, sağlam bir faz ve sürekli bir faz gösterdi. Çok telli bir miyograf sistemi kullanarak fare mezenterik arterinin izometrik kontraktilitesini ölçmek için bir yöntem tanımladık. Bu yöntem, vasküler düz kasın fonksiyonlarını değerlendirmek ve düz kas gevşeticileri taramak için kullanılabilir.

Bu yöntem ile diğerleri arasındaki temel fark, montaj adımlarındadır. Burada kullanılan bu adımın gerçekleştirilmesi kolaydır ve dokuya veya cihaza zarar vermez. Bu prosedürü takiben, EP ve Anjiyotensin II gibi diğer stimülatörler de bu agoniste duyarlı bazı yeni ilaçlar bulmak için düz kas kasılmasını uyarmak için kullanılabilir.