Name: İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Öğrenin fare mezenterik arterinde izometrik kontraktaliteyi wire myografi ile ölçme yöntemini. Bu teknik hipertansiyon tedavisi için yeni ilaç taraması ve vasküler düz kas fonksiyonlarını değerlendirmede kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Wei Qi He (Soochow Üniversitesi, Suzhou, Çin) ve Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal Üniversitesi, Xi'an, Çin Halk Cumhuriyeti) Teknik yardım için teşekkür ederiz. Bu eser Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 ve 81473420) ve proje finanse öncelik Akademik Program geliştirme, Jiangsu Yükseköğretim kurumlarının (Grant No tarafından desteklenmiştir ysxk-2016).

Hayvan manipülasyonlar kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) modeli hayvan araştırma merkezi Nanjing Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. çözüm hazırlık
<ol><li>137.0 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu (H-T) hazırlamak pH 7.3 7.4.</li>
	<li>Kalsiyum olmadan HEPES Tyrode çözüm hazırlamak (Ca2 +-H-T ücretsiz) 140.6 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH 7.3 7.4 kullanarak.</li>
	<li>124 mM 15.7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-glukoz ve 10 mM HEPES, pH kullanarak KCl (yüksek K+) kullanarak HEPES Tyrode solüsyonu hazırlayın 7.3 7.4.</li>
</ol>2. deney hazırlık
<ol><li>H-T ve 37 ° C su banyosu kullanarak yüksek-K+ çözümler onceden.</li>
	<li>Myograph sistem, veri edinme donanım ve bilgisayarı açın.</li>
	<li>Dikkatle tüm myograph odaları 5 mL H-T çözeltisi ile doldurun.</li>
	<li>Petri tabağı 4 ° C H-T ve Ca2 +20 mL ile doldurulması-H-T çözümleri, sırasıyla ücretsiz ve depolamak buzda.</li>
	<li>10 cm boyalı Petri kabına 20 mL H-T çözeltisi ile doldurun ve oda sıcaklığında korumak.</li>
</ol>3. fare mezenterik arter diseksiyonu
<ol><li>8-12-hafta-yaşlı C57BL/6J kadın ya da erkek fare tarafından servikal çıkığı ötenazi. Fare yukarı bakacak şekilde, karın ile pin.</li>
	<li>Karın % 70 etanol ile nemlendirin. O zaman, cilt makas ile ventral orta çizgi boyunca kasığından ve kesikler ilk kesik başından itibaren aşağıya doğru bacaklar her iki tarafta yapın. Cilt her iki tarafta çek; Karın zarını açmaya benzer insizyon olun.</li>
	<li>Makas kullanarak, özofagus, iki nokta üst üste ve tamamen damarlara vücuttan beslenme ile gastrointestinal sistem izole etmek için diğer bağ dokusu kesmek.</li>
	<li>Forseps ile izole segment kanı yıkamak için H-T 2.4 adımda hazırlanan ve yavaşça doku birkaç kez H-T çözümde Durulama soğuk içeren çanak içine taşıyın.</li>
	<li>İzole segment içine 2.5 adımda hazırlanan kuşe Petri kabına aktarmak ve mezenterik arter diseksiyonu oda sıcaklığında gerçekleştirin.</li>
	<li>Mide, değişir, ileum ve caecum yönünde düzeltmek ve mide ve caecum sırasıyla sol ve sağ tarafında, pin.</li>
	<li>Mezenterik damarlara yatak germek ve bağırsak disseke mezenterik arterler ortaya çıkarmak için pin ile düzeltin. Not: Bu koşullar altında üstüne damar damar vardır.</li>
	<li>Stereoskopik mikroskop iletim ışık kaynağında açmak ve arterler mikroskop altında incelemek. Tüm doku çözümde dalmış emin olun.</li>
	<li>Forseps ile arterlerin çevresinde yağ dokuları klamp ve diseksiyon makasla keserek bağ dokusu arterler yalıtmak. Damarların yaralanmasına kaçının.</li>
</ol>4. arteryel montaj
<ol><li>Aktarım ve mezenterik arter ağaç soğuk Ca2 +sokmak-ücretsiz (2.4 adımda hazırlanan) H-T çözüm forseps ile aşırı arterler sıkma tarafından.</li>
	<li>Arter 1.4 mm kısmı bir mezenterik arcade Bağırsak duvarına proksimal kesmek ve iki forseps bu arter parçasının her iki dikkatlice açın.</li>
	<li>Paslanmaz çelik tel 2,5 cm uzunluğunda iki kesimi hazırlamak ve onları aynı çanak yerleştirin.</li>
	<li>Forseps kullanarak atardamara bir ucunu yavaşça kelepçe ve dikkatlice iki tel, başka bir forseps yardımıyla tek tek arter lümen yerleştirin. Teller düz tutulur ve endotel dokunmayın emin olun.</li>
	<li>İki forseps kullanarak, iki çelik teller dişli geminin dışında aynı anda kelepçe ve dikkatle gemi daha önce H-T çözüm (adım 2.3) ile dolu bir myograph odasına Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Jaws ayrı montaj için yer açmak için canı cehenneme. Her iki tarafında iki forseps kullanarak iki eklenen kablolardan biri klamp ve taşıyıcıyı çene boşluğu (Şekil 1A) koyun.</li>
	<li>Her iki vidayı mikrometre (Şekil 1B) bağlı çene etrafında klempe tel sarın.</li>
	<li>Sol taraftaki vidayı saat yönünde büküm tarafından tamir. Sağ forseps kullanarak Tel düzeltmek, daha sonra saat yönünde (Şekil 1 c) büküm sağ taraftaki vidayı düzeltmek. Gemi her zaman çene boşluğu içinde olduğundan emin olun, ama zarar görmemesi için çene dokunmayın.</li>
	<li>Mikrometre (Şekil 1 d) kullanarak iki jaws kapatın. Onlar birbirleriyle ve sabitlenmemiş tel üst kısmında sabit tel olduğunu dokunma ama bu iki jaws yeterince yakın olduğundan emin olun.</li>
	<li>Sağ taraftaki forseps kullanarak, dikkatle unscrewed Tel Dönüştürücü zorlamak için bağlı çene köşesinde katlayın ve sağdaki vida (Şekil 1E) etrafında saat yönünde kaydırmak. O zaman, vida saptamak. Tel sol tarafında bu adımı yineleyin ve sol taraftaki vidayı (Şekil 1F) düzeltin.</li>
	<li>Biraz ayrı jaws dikkatle mikrometre (Şekil 1G) döndürerek hareket ettirin. Gemi germe kaçının. Forseps tel tel dönüştürücü yan yatay düzlemde de mikrometre tarafından taşımak için kullanın. Dikkatle iki çene arasındaki boşluğu sadece iki kablo ağırlayacak mikrometre döndürür.</li>
	<li>Arterler diğer odaları üzerine takmak için 4.2-4.11 adımları yineleyin. Tüm odalar için RGB sinyali, odaları kapsar, % 100 oksijen kaynağı ve sıcaklık probu takın ve 37 ° C'ye ısınma başlangıç Grafik yazılımı açık ve kayıt işlemini başlatmak için Grafiği görünümü penceresinde Başlat düğmesine basın.</li>
	<li>Yaklaşık 20 dk equilibrate.</li>
</ol>5. normalleştirme
Not: deneysel koşullar standartlaştırmak amacıyla ve gemilerin güvenilir fizyolojik yanıt elde etmek için bir normalleştirme yordam gerekli15' tir. Aktif güç ve geminin iç çevresi arasındaki ilişkiyi göre Tel myograph sistemi takılı gemi5,8iç çevresi (IC) değerlendirmek için bir standart normalleştirme program vardır, 9. Kısaca, IC (µm) hesapladığınızda, mikrometre okumak ve değeri X değeri ve dönüştürücü giriş çıkış için kuvvet, duvar gerilimi (mN/mm), dinlenme Yani, Y değeri olarak kullanılır. Program ile donatılmış bir eğri (x, Y) dönmek ve 100 mmHg (IC100) transmural basınç için karşılık gelen IC hesaplamak. Gemi normalleştirilmiş iç çevresi (IC1) için küme etkin yanıt maksimal ne zaman.
<ol><li>Kuvvetleri tüm kanallar için sıfıra küme aygıtta ve başka bir 1-2 min için equilibrate.</li>
	<li>Normalleştirme ayarları seçin "DMT menüve parametreleri aşağıdaki gibi ayarlayın: Mercek kalibrasyon (mm/div): 0,36; Hedef basınç (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0.9; Online ortalama süre (saniye): 2; Gecikme süresi (saniye): 60. DMT normalleştirme ayarları penceresini kapatmak için Tamam düğmesini tıklatın.</li>
	<li>Kanal ilgi DMT menü bir DMT normalleştirme karşılık gelen kanal penceresini seçin. Sabit değerleri penceresine aşağıdaki gibi girin: doku endpoints a1: 0.1; Doku endpoints a2: 4; Tel çapı (µm): 40. Pencerenin 1,40 mm hesaplanan gemi uzunluğu görüntüler.</li>
	<li>Uygun doku odası mikrometre okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değer girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. Bu değer ilk (X0) X değeridir. Sonra 60 s gecikme süresi, kuvvet ve etkili basınç (ERTP) bu mikrometre değerine karşılık gelen pencerede görüntülenir. Aynı anda, mikrometre okuma kutusunu etkin hale gelir.</li>
	<li>Saat yönünün tersi yönde mikrometre çevirerek normalleştirilmiş gemi germek. Mikrometre değer mikrometre okuma kutusuna girin ve Noktası Ekle düğmesini tıklatın. 60 dinleme için bekleyin tekrar s.</li>
	<li>Adımları yineleyin 5.5, gemi germek ve pencere "onun IC1gemi germek için gereken hesaplanan mikrometre ayardır mikrometre X1" değerini görüntüler kadar ölçüm değerleri eklemek devam edin.</li>
	<li>Mikrometre X1 değeri ayarlayın. Not: Normalleştirilmiş gerilim genellikle 1-2 mN olduğunu.</li>
</ol>6. arter daralma kayıt
Not: H-T ve yüksek-K+ çözüm bu bölümde kullanılan da dahil olmak üzere tüm çözümler adım 2.1 hazırlanmıştır.
<ol><li>Normalleştirme sonra 15-20 dk odasında gemi equilibrate. Not: Bu çözüm bu adımda değiştirmenize gerek yoktur.</li>
	<li>Gemi yüksek-K+ çözüm ile iki kez meydan.<ol>
<li>Gemi meydan okumak için 5 mL daralma 10 dk, 3 - 4 kez 5 mL H-T çözeltisi ile yıkayarak takip için ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile H-T çözüm değiştirin. Not: Tipik daralma 3 mN ve 2.5 mN12etrafında sabit bir sürekli güç üzerinde bir maksimal kuvvet sahiptir. İlk challenge 2.5 mN aşağıda bir maksimal güç üretir veya sürekli gücü zamanla azalır veya ikinci sorun ilk doz daha daha daha düşük bir kuvvet oluşturur, gemi atılır ve daha fazla araştırma yapılması için kullanılmaz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>5 mL daralma ikna etmek için yüksek-K+ çözeltisi ile gemi meydan. 5 dk sonra 0.5 µL neoliensinine hisse senedi çözüm (DMSO 10 mM)14 gemi 1 µM neoliensinine son bir konsantrasyon, dinlenmek için odasına ekleyin.</li>
	<li>Kuvvet ne zaman istikrarlı (Bu genellikle birkaç dakika sürer), t oluşturmak için 4, 6, 8 ve 10 µM için konsantrasyonu artırmak için hisse senedi çözüm her zaman konsantrasyonu için 2 µM. eklemek 1 µL artırmak için odasına neoliensinine hisse senedi çözümü başka bir 0.5 µL Ekle o doz-yanıt eğrisi. Not: Stok ve çalışma konsantrasyonları ilaçlar arasında değişir.</li>
</ol>

<ol><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+and+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li>
<li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMulvany%2C+MJ+%22Procedures+for+investigation+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%22">Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph</a>. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li>
<li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li>
<li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3adel+Campo%2C+L+%22Wire+Myography+to+Study+Vascular+Tone+and+Vascular+Structure+of+Isolated+Mouse+Arteries%22">Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries</a>. , Springer. New York. (2015).</li>
<li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li>
<li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li>
<li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+phosphatase+target+subunit+1+%28MYPT1%29+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li>
<li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li>
<li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn%2C+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant%5BTitle%5D)+AND+%22Fitoterapia%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li>
<li>Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li>
<li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+hypertension%3A+analysis+of+worldwide+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li>
<li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Hipertansiyon ciddi komplikasyonlar kardiyovasküler dahil olmak üzere ve böbrek hastalıkları16nedeniyle yaygın halk sağlığı mücadeledir. Hipertansiyon patogenezinde anlama ve keşfetmek daha fazla Anti-Hipertansif İlaçlar Bu alandaki acil bir görev haline gelmiştir. Kan basıncı oluşturulur ve dolaşım periferik direnç tarafından yapılmaktadır. Poiseuille'nın kanunen nispeten küçük arterlerin dolaşım direnci büyük bir kısmı oluşturmak ve kan basıncı3,<sup class="xre...

Burada kullanılan küçük gemi myograph sistem ölçmek için küçük direniş damarlarının iç çapı 100 400 µm. izole küçük gemiler için (yaklaşık 2 mm uzun) arasında değişen izometrik kasılma iki 40-µm çapı kablo tarafından eklenmiş ve o zamanlar oldu mikrometre tarafı ve dönüştürücü tarafı jaws sıralı olarak monte edilmiş. Bu myograph teknik ilk 19721 ' önerdi ve öncelikle Mulvany ve onun meslektaşları2,3,4,5,6tarafından geliştirildi. Şimdi kararlı donanımları, kolay performans ve bir standart normalleştirme yordamı7,8,9ile olgun bir tekniktir. Biz bazı değişikliklerle bu yöntem için fare mezenterik arter ölçümlerde kullanılan.
Vasküler düz kas hemen hemen tüm kan damarlarının duvarlarında hatları. Temel işlevleri çeşitli uyaranlara yanıt olarak Kuvvetleri kasılması ile oluşturmaktır. Vasküler düz kas normal contractility için kan basıncı düzenleme esastır ve beslenme ek10. Anormal kan basıncı sonuçları hastalıkları, hipertansiyon, kalp yetmezliği ve iskemisi. de dahil olmak üzere çeşitli Yönetmeliği Çeşitli çalışmalarda anormal kan basıncı her zaman işlevsel olmayan vasküler düz kas contractility7,11,12,13ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. Myograph yöntemi izometrik contractility vasoconstrictors, inhibitörleri ve ilaçlar da dahil olmak üzere çeşitli uyaranlara tarafından indüklenen fare damarlarının incelenmesi sağlar. Başarılı ölçümleri daralma kan basıncı bakım ve yeni tedavi yaklaşımları keşfetmek için ve vasküler düz kas ilişkili hastalıkların patogenezinde mekanizmaları anlamamıza yardımcı olacaktır.
Birçok Çince otlar yaygın damar hastalıkları klinik tedavisi için kullanılmıştır; Ancak, onların etkili maddeler genellikle bilinmeyen kalır. Böylece, yalıtım ve etkili bileşenleri kimliği roman uyuşturucu gelişimi için çok önemli. Çoklu tel myograph teknoloji otlar aktif bileşenleri süzmek için basit bir yaklaşım sunmaktadır. Biz fare mezenterik arter daralma araştırmak için küçük gemi myograph sistemini kullanarak çeşitli çalışmalarda bildirdi ve doğal bileşikler ile Anti-hipertansiyon etkinlik12,13,14tespit. Burada, biz ayrıntılı tarif protokol için myograph yöntemi ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole neoliensinine gevşetici etkisini değerlendirmek 14.

<table><tbody><tr><td>Çok telli miyograf sistemi</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik tel</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder diseksiyon makası</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forseps</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab / 8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>Yazılım</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 ve orta nokta; 6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-Glikoz</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

İzometrik contractility ölçüm tel myography kullanarak fare mezenterik arter

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Telli myograph teknik vasküler düz kaslar yanıt-e doğru depolarization, GPCR agonistler/inhibitörleri ve uyuşturucu. contractility değerlendirmek için kullanılır Vasküler düz kas fizyolojik fonksiyonları, vasküler hastalıklar hipertansiyon gibi patogenezi ve düz kas gevşetici ilaçlar gelişimi üzerinde birçok çalışma yaygın olarak kullanılır. Yaygın olarak kullanılan model hayvan hastalık modelleri ve genetiği değiştirilmiş suşları büyük bir havuz faredir. Biz fare mezenterik arter ayrıntılı izometrik kasılma ölçmek için bu yöntem tanıttı. Fare mezenterik direnç arter 1.4 mm segmentinin izole ve onun Lümen ile iki çelik tel geçirerek myograph odası üzerinde monte edilmiş. Denge ve normalleştirme adımlardan sonra gemi kesimi tarafından iki kez önce daralma tahlil bir yüksek-K+ çözüm potentiated. Bu yöntemde ilaç geliştirme uygulama örneği, fare mezenterik bir Çin bitki, lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyolar izole bir roman doğal madde, neoliensinine, gevşetici etkisi ölçülen arterler. Myograph odası üzerinde monte edilmiş gemi kesimleri ile a yüksek-K+ eriyik teşvik. İstikrarlı bir sürekli faz güç gerilim ulaştığı zaman toplu neoliensinine doz odasına eklenmiştir. Biz o neoliensinine düz kas kasılması, bir doz bağımlı gevşetici etkisi vardı böylece hipertansiyon karşı potansiyel etkinlik ayılar düşündüren bulundu. Buna ek olarak, gemi segment montaj sonra en az 4 saat hayatta kalmak ve çoğu zaman, biz önermek için yüksek-K+ çözüm tarafından indüklenen contractility korumak gibi tel myograph sistem uyuşturucu tarama zaman alan işlem için kullanılabilir.

Biz bir çok tel myograph sistemi kullanarak fare mezenterik arter izometrik contractility ölçülen ve lotus tohum (Nelumbo nucifera Gaertn.) embriyo saf neoliensinine gevşetici etkisi değerlendirildi 14. fare mezenterik direnç arter izole, bağ dokuların temizlenmesi ve 1.4 mm parça halinde kesilmiş. Arter segment Ca2 +iki çelik teller tarafından eklenmiş-ücretsiz bir petri çözümde H-T ve sonra segment myograph odası (Şekil 2A...

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Laboratuvarımız uzun yıllardır vasküler düz kas kasılmalarını ölçmek için tel miyograf yöntemini kullanmaktadır. Bu tekniği düz kas kasılma mekanizmasını incelemek için kullanıyoruz. Bu yöntemi, hipertansiyon tedavisi için yeni ilaçları araştırmak için kullanıyoruz.Bu tekniğin temel avantajı, damar segmentinin montajdan sonra en az dört saat hayatta kalması ve yüksek potasyumun neden olduğu kasılmayı birçok kez korumasıdır. Çok kanallı sistem, yeni ilaçların yüksek tedavi taraması için fırsat verir. Ötenazi yapılan farenin vücudunu karnı yukarı bakacak şekilde sabitleyin ve karnı% 70 etanol ile nemlendirin.Daha sonra, kasıktan ventral orta hat boyunca cildi kesmek için makas kullandıktan sonra, ilk insizyonun başlangıcından itibaren her bacağa doğru kesiler yapın. Cildi her iki taraftan geriye doğru çekin, ardından peritonu açmak için benzer kesiler yapın. Daha sonra, gastrointestinal sistemi vücuttan besleme damarları ile tamamen izole etmek için yemek borusu, kolon ve diğer bağ dokularını kesmek için makas kullanın.GI yolundan kanı HEPES-Tyrode veya H-T solüsyonu ile duruladıktan sonra, izole edilen segmenti oda sıcaklığında mezenterik arter diseksiyonu için kaplanmış bir Petri kabına aktarın. Mide, jejunum, ileum ve çekumu saat yönünde düzeltin ve mide ve çekumu sırasıyla sol ve sağ tarafa sabitleyin. Stereoskopik mikroskobun transmisyon ışık kaynağını açın ve diseke mezenterik arterleri ortaya çıkarmak için bağırsağı pimlerle sabitleyin.Daha sonra atardamarların etrafındaki yağ dokularını forseps ile sıkıştırın ve diseksiyon makası ile tüm bağ dokularını keserek atardamarları dikkatlice izole edin. Fazla bir arteri forseps ile kavrayın ve mezenterik arter ağacını soğuk kalsiyum iyonu içermeyen H-T çözeltisine aktarın ve daldırın. Mezenterik bir pasajın bağırsak duvarına proksimaldeki arterin 1.4 milimetrelik bir kısmını kesin ve bu arter segmentinin her iki tarafını dikkatlice açmak için iki forseps kullanın.2,5 santimetre uzunluğunda iki parça paslanmaz çelik tel hazırlayın ve bunları aynı tabağa yerleştirin. Arterin bir ucunu nazikçe sıkıştırmak için forseps kullanın. Ardından, iki teli arterin lümenine tek tek dikkatlice yerleştirmek için başka bir forseps kullanın.Tellerin düz tutulduğundan ve endotelyuma temas etmediğinden emin olun. İki forseps kullanarak, her iki teli de dişli kabın dışına aynı anda sıkıştırın ve kabı Petri kabından dikkatlice H-T çözeltisi ile doldurulmuş bir miyograf odasına aktarın. Montaj için yer açmak için haznenin çenelerini birbirinden ayırın, ardından iki forseps kullanarak yerleştirilen iki telden birinin her iki tarafını kavrayın ve kabı çene boşluğuna yerleştirin.Sıkıştırılmış telin her iki tarafını mikrometreye bağlı çenenin vidalarının etrafına sarın. Sol taraftaki vidayı saat yönünde çevirerek sabitleyin. Ardından teli düzeltmek için forseps kullanın.Ardından, sağ taraftaki vidayı saat yönünde çevirerek sabitleyin. Damarın her zaman çene boşluğunun içinde olduğundan emin olun, ancak hasarı önlemek için çeneye dokunmayın. Mikrometreyi kullanarak iki çeneyi kapatın.İki çenenin yeterince yakın olduğundan, ancak birbirine değmediğinden ve sabitlenmemiş telin sabit telin üzerinde olduğundan emin olun. Sağ forsepsleri kullanarak, kuvvet dönüştürücüsüne bağlı çenenin köşesindeki vidasız teli dikkatlice katlayın ve sağ taraftaki vidanın etrafına saat yönünde sarın. Ardından vidayı sabitleyin.Telin sol tarafının açılmasını ve sarılmasını tekrarlayın ve sol taraftaki vidayı sabitleyin. Daha sonra, mikrometreyi dikkatlice döndürerek kabı germeden çeneleri hafifçe birbirinden ayırın, böylece iki çene arasındaki boşluk iki teli barındırabilir. Ardından, mikrometre tarafındaki teli dönüştürücü tarafındaki telin yatay düzlemine hareket ettirmek için forseps kullanın.Arterleri diğer odalara monte ettikten sonra, tüm odaları ekipmana bağlayın ve odaların üzerini kapatın. %100 oksijen kaynağını ve bir sıcaklık probunu takın ve 37 santigrat dereceye kadar ısıtmaya başlayın. Grafik yazılımını açın.Kayda başlamak için Başlat düğmesine basın. İlgili kanal için DMT normalleştirme penceresini açmak için DMT menüsünden ilgilendiğiniz kanalı seçin. Pencereye aşağıdaki sabit değerleri girin: Doku uç noktaları a1, 0.1; Doku uç noktaları a2, 4; Tel çapı, 40.Pencere daha sonra hesaplanan kap uzunluğunu 1,40 milimetre olarak gösterir. Uygun doku odasının mikrometresini okuyun. Mikrometre okuma kutusuna değeri girin ve Nokta Ekle'düğmesine tıklayın.Bu değer, X'in başlangıç değeridir.60 saniyelik bir gecikmeden sonra, pencere bu mikrometre değerine karşılık gelen kuvveti ve etkin basıncı görüntüler. Eş zamanlı olarak mikrometre okuma kutusu aktif hale gelir. Mikrometreyi saat yönünün tersine çevirerek normalleştirilen kabı gerin.Mikrometre değerini mikrometre okuma kutusuna girin ve Nokta Ekle' butonuna tıklayın. Tekrar 60 saniyelik bir gecikme süresi bekleyin. Kabı germeye devam edin ve pencere, kabı IC-one'ına germek için gereken hesaplanan mikrometre ayarı olan mikrometre X-one değerini gösterene kadar mikrometre değerleri ekleyin.Mikrometreyi X-one değerine ayarlayın. Normalizasyondan sonra, haznedeki kabı 15 ila 20 dakika dengeleyin. Dengelendikten sonra, 10 dakika boyunca kasılmayı indüklemek için HT çözeltisini 5 mililitre yüksek potasyum çözeltisi ile değiştirerek kabı yüksek potasyum çözeltisi ile zorlayın.10 dakikalık inkübasyonu taze yüksek potasyum çözeltisinde tekrarladıktan sonra, beş mililitre H-T çözeltisi ile üç ila dört kez yıkayın. Yine, kasılmayı indüklemek için damarı beş mililitre yüksek potasyum çözeltisi ile zorlayın. Beş dakika sonra, kabı bir mikromolar Neoliensinin son konsantrasyonunda gevşetmek için hazneye 0.5 mikrolitre Neoliensinin stok çözeltisi ekleyin.Kuvvet birkaç dakika sonra stabil olduğunda, konsantrasyonu iki mikromolar seviyeye çıkarmak için 0.5 mikrolitre daha Neoliensinine stok çözeltisi ekleyin. Doz yanıt eğrisini oluşturmak için konsantrasyonu dört, altı, sekiz ve 10 mikromolar'a çıkarmak için her seferinde bir mikrolitre stok çözeltisi ekleyin. Normalizasyon prosedürü sırasında, kap IC-100 değerine ulaşana kadar birkaç kez gerildi ve her gerilmiş döngü, 60 saniye içinde sağlam bir kasılma, hızlı gevşeme ve bir kuvvet bakımı içeriyordu.Yüksek potasyum çözeltisinin neden olduğu vasküler düz kasın kasılması genellikle iki faz, sağlam bir faz ve sürekli bir faz gösterdi. Çok telli bir miyograf sistemi kullanarak fare mezenterik arterinin izometrik kontraktilitesini ölçmek için bir yöntem tanımladık. Bu yöntem, vasküler düz kasın fonksiyonlarını değerlendirmek ve düz kas gevşeticileri taramak için kullanılabilir.Bu yöntem ile diğerleri arasındaki temel fark, montaj adımlarındadır. Burada kullanılan bu adımın gerçekleştirilmesi kolaydır ve dokuya veya cihaza zarar vermez. Bu prosedürü takiben, EP ve Anjiyotensin II gibi diğer stimülatörler de bu agoniste duyarlı bazı yeni ilaçlar bulmak için düz kas kasılmasını uyarmak için kullanılabilir.

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Izole mezenterik arterler kuvvet ölçümleri için otomatik bir kasılmaların kâğıda çizilmesi yöntemi açıklanmıştır. Fenilefrin ve ekstrasellüler kalsiyum yanıtlarını belirlemek için 510A Mulvany Halpern Otomatik Çift Tel Myograph kullanır. 300 mikron, bağımsız yöntemi 60 çaplarının küçük damarlarda agonistleri izometrik yanıtları tutarlı tespitine imkan sağlamaktadır.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi olarak, bir geminin bir sağlam küçük bir bölümü iki küçük kanüller üzerine monte edilir ve uygun bir lümen basınca basınçlandırılmıştır. Burada, fare 3 vasorelaxation tepki ölçmek için yöntem...

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Murin sol ventrikül papiller kas in vitro kardiyak kontraktiliteyi araştırmak için kullanılabilir. Bu makalede ayrıntılı olarak izolasyon ve deneysel protokoller kalp kasılma özelliklerini incelemek için açıklar.

Farelerde Kardiyak inotropiyi Soruşturma İzole papiller Kaslar kontraktilite Ölçümleri

Protokol, farelerden izole edilen mezenterik arterlerin transmural izometrik gerginliğini değerlendirmek için tel miyografi kullanımını açıklar ve endotel hücrelerden ve perivasküler adipoz dokulardan salınan faktörlerin modülasyonunun özel olarak değerlendirilmesidir.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Bu protokol, fare aort endotel fonksiyonunun deneysel ex vivo değerlendirmesinde çok odacıklı bir miyograf sistemi kullanılarak tensometrik miyograf tekniğinin kavramlarını ve teknik uygulamasını açıklamaktadır.

Fare Torasik Aortunda Endotele Bağlı Vazogevşemenin Tensometrik Küçük Hacimli Oda Miyografisi ile Ölçülmesi

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Orta serebral arter (MCA) ligasyonu, hayvan modellerinde fokal serebral iskemi çalışma bir tekniktir. Bu yöntemde, orta serebral arter kraniotomi maruz kalmaktadır ve koterizasyon tarafından bağlandı. Bu yöntem son derece tekrarlanabilir infarkt hacimleri ve mevcut diğer yöntemlere göre artış post-operatif sağkalım oranları verir.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Öğrenin fare mezenterik arterinde izometrik kontraktaliteyi wire myografi ile ölçme yöntemini. Bu teknik hipertansiyon tedavisi için yeni ilaç taraması ve vasküler düz kas fonksiyonlarını değerlendirmede kullanılır.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Daha fazla video keşfet