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Visualizarse los microorganismos del suelo mediante el contacto Deslice análisis y microscopia
 

Visualizarse los microorganismos del suelo mediante el contacto Deslice análisis y microscopia

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Las relaciones entre los distintos organismos y componentes inorgánicos en el suelo son vitales para entender los cambios del suelo y estrés ambiental, pero no pueden ser acladas sin visualización directa.

Suelo, un sistema extremadamente complejo, es el hábitat de millones de diversos organismos. La región de tierra directamente alrededor de las raíces de plantas en particular, llama la rizosfera, contiene una selección única de organismos que están influenciadas directamente por las raíces de la planta.

El componente abiótico, o no-biológicos, de la rizosfera incluye partículas inorgánicas de tamaño y forma que contribuyen a la textura del suelo. La parte biótica o biológica, incluye residuos de plantas, raíces, materia orgánica y microorganismos.

Este video demostrará la visualización directa de los componentes bióticos y abióticos del suelo de la rizosfera, para entender los factores que afectan cambios de suelo y predecir presiones ambientales.

Organismos microscópicos tienden a residir en el agua en los poros del suelo. Las bacterias se encuentran entre los más simples y los organismos más abundantes presentan en el suelo y se encuentran en muchas morfologías incluyendo esferas llamadas cocos, varas llamadas bacilos y las formas filamentosas.

Especies de hongos, levaduras y moldes, son los organismos segundo más abundantes en el suelo. Trabajan para descomponer y reciclar la materia orgánica muerta. Hongos filamentosos microscópicos diferencian visualmente de otros microorganismos, como poseen hifas largas y ramificadas que liberan las esporas.

Observación directa de las relaciones entre estos organismos es difícil, pero puede lograrse utilizando un ensayo de contacto deslizante. Este método se realiza sumergiendo un portaobjetos de cristal en el suelo durante varios días y permitiendo que los organismos y las partículas del suelo adsorben a la superficie del portaobjetos.

La diapositiva entonces se quita en un ángulo para evitar manchas de la superficie. Los microbios son fijos con ácido acético y teñidos con tinción de rosa de Bengala para permitir la visualización mediante microscopía óptica.

Ahora que usted entiende los principios de la técnica de ensayo de contacto deslizante, permite echar un vistazo al proceso en el laboratorio.

En primer lugar, recoger la superficie del suelo jardín y transfiera el suelo en el laboratorio. Pesar 150 g de suelo en los 2 recipientes separados. Un envase debe etiquetarse como la muestra de tratamiento, que se modificará con nutrientes para estimular la rápida proliferación de microorganismos. Etiqueta de la otra como control, que será invariable.

Calcular el contenido de agua en el suelo, utilizando la técnica que se muestra en determinación del contenido de esta colección de humedad en el suelo video. Basado en este cálculo, determinar la cantidad de agua en el suelo sobre una base de peso seco. Calcular la cantidad de agua que debe añadirse para dar un contenido de humedad 15%. Esto lleva la humedad a capacidad de campo, óptima para el crecimiento de microorganismos.

Medir la cantidad calculada de agua destilada con una probeta graduada. Verter el volumen calculado de agua en cada recipiente. Basado en el peso seco previamente determinado del suelo, calcule la cantidad de glucosa necesaria para alcanzar una concentración de glucosa final de suelo de 1% en masa, utilizando la base de peso seco. Pesar esta cantidad de glucosa y añadir al contenedor de tratamiento solamente.

Pesar 200 mg de nitrato de amonio, luego añadir al contenedor de tratamiento solamente. El nitrato de amonio sirve como fuente de nutrientes nitrogenada para los microbios del suelo. Mezclar la mezcla de suelo, la glucosa y el nitrato de amonio en el envase.

A continuación, la etiqueta 4 portaobjetos limpio: dos como tratamiento y dos como control. Inserte las diapositivas de dos tratamientos en el envase del suelo tratamiento. Dejar una sección de cada diapositiva expuesta sobre la superficie del suelo y asegurar que existe una brecha entre las dos diapositivas.

Inserte las diapositivas de dos control en el envase del suelo control de la misma manera. Cubrir las copas con envoltura de plástico y asegúrelo con una banda de caucho. Perfore la envoltura de plástico varias veces para permitir a transferencia de aire, pero todavía evitar la evaporación excesiva.

Finalmente, pesar ambas tazas, registrar su peso y les Incube en un área designada a temperatura ambiente durante siete días.

Después de la incubación de siete días, calcular el contenido de humedad de suelo pesando las tazas de suelo. Determinar si el peso se ha perdido debido a la evaporación de agua y reemplace el agua si es necesario.

Retire el plástico del envase y retire las dos diapositivas del suelo pulsando cada diapositiva a una posición inclinada, y retirar para que la cara superior de la diapositiva es imperturbada.

Golpee suavemente el portaobjetos para eliminar partículas grandes del suelo. Limpie con una toalla de papel húmeda la cara inferior de las diapositivas. Déjelos secar a temperatura ambiente en una campana de humos. Una vez seco, recoger un portaobjetos con unas pinzas y sumergir en ácido acético en 1 a 3 min.

Enjuague la parte superior de la diapositiva con un chorro suave de agua destilada para eliminar el exceso de ácido. Repita estos pasos para todas las diapositivas. Deje que los portaobjetos al aire seco.

Apoye la diapositiva sobre una parrilla de tinción en un recipiente para recoger el exceso de tinte. Suavemente utilizando un gotero, cubrir la superficie de cada diapositiva con colorante Rosa de Bengala fenólico. Deje que los portaobjetos a la mancha de 5 a 10 minutos, teniendo cuidado de agregar más colorante según sea necesario para mantener las diapositivas mojadas. Suavemente enjuague los portaobjetos con agua para eliminar el tinte sobrante y deje que los portaobjetos se seque a temperatura ambiente.

Examinar los portaobjetos en un microscopio de luz, usando un objetivo de inmersión de aceite. El suelo tratado tendrá más microbios del suelo.

Las interacciones espaciales entre organismos hongos y bacterias en las muestras de suelo típica pueden visualizarse fácilmente. Las partículas del suelo mostrar formas irregulares oscuras.

Organismos fúngicos muestran gruesas hifas filamentosas y actinomycetes muestran hifas filamentosas delgadas.

Se encuentran bacterias como cocos pequeños o formas de varilla, normalmente en grupos, en las partículas del suelo o revestimiento de hifas de los hongos.

El aislamiento directo de los organismos del suelo es importante para la comprensión de las características de suelo y medio ambiente.

Nematodos entomopatógenos son microscópicas alrededor de gusanos que parasitan insectos. Mientras que no se visualizan en el análisis del contacto deslizante, pueden ser aislados de las muestras de suelo recogidas, como se muestra en este ejemplo.

En primer lugar, se ceban los nematodos en el suelo usando insectos identificadas por examen visual. Nematodos fueron aislados del cebo muerto insecto, colocar los insectos muertos en un ambiente húmedo y oscuro y permitiendo que los nematodos a migrar hacia fuera en el agua circundante. Los nematodos fueron recogidos del agua y analizados.

Hongos filamentosos son vitales para la salud del suelo debido a su papel en el reciclaje de nutrientes. En este ejemplo se realizó el aislamiento y observación de hongos filamentosos del suelo.

Las muestras de suelo fueron diluidas con agua y agregadas para separar estériles placas de agar rosa Bengala estreptomicina. La estreptomicina prevenir crecimiento bacteriano y permitió el crecimiento del hongo. Colonias fúngicas eran contadas y montadas en un portaobjetos de vidrio con cinta adhesiva. Los hongos fueron luego fotografiados utilizando un microscopio de luz.

Microorganismos del suelo descomponen naturalmente componentes en el suelo, tales como organismos y plantas muertas. Biodegradación y la colonización de películas plásticas biodegradables fue examinado, como se muestra en este ejemplo.

Hongos fueron aislados de películas de plástico enterradas en el suelo durante varios meses. Los hongos entonces fueron probados individualmente para el crecimiento de películas de plástico. Películas de plástico entonces se incubaron con la cepa de hongos seleccionada con ningún medio de crecimiento, para observar la degradación directa de la plástica por los hongos.

Sólo ha visto la introducción de Zeus para el ensayo de contacto deslizante para la proyección de imagen cualitativa de microbios del suelo. Ahora debería entender cómo preparar el contacto deslizante y visualizar los microbios del suelo. ¡Gracias por ver!

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