Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Environmental Microbiology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

Énumération des algues par l’intermédiaire de méthodologie cultivable
 

Énumération des algues par l’intermédiaire de méthodologie cultivable

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Les algues sont des organismes photosynthétiques qui vivent dans des environnements variés. Sol résidence algues peut être cultivée en laboratoire et leur concentration énumérés à l’aide de calculs simples.

Les algues sont un groupe hétérogène d’organismes qui ont un trait commun, à savoir la possession des pigments photosynthétiques, la chlorophylle couramment. La grande majorité des algues est microscopique, toutefois, la définition exacte du groupe est controversée et inclut également les algues, qui sont typiquement macroscopiques.

Dans l’environnement, algues peuvent causer des problèmes dans les eaux de surface telles que les lacs ou réservoirs, formant des proliférations d’algues qui appauvrissent les nutriments de l’eau, bloquant la lumière passant au-delà de la surface de l’eau et libérer des toxines. La possibilité d’énumérer des algues dans les échantillons permet aux scientifiques d’évaluer la santé d’un écosystème et le risque de prolifération des algues.

Populations d’algues dans les sols se produisent fréquemment à environ dix mille cellules par gramme. Ces chiffres sont généralement plus faibles que les concentrations correspondantes des bactéries, des champignons ou des actinomycètes, comme les algues ont besoin du soleil pour la photosynthèse, qui ne peut pas pénétrer loin au-dessous de la surface du sol.

Cette vidéo illustre comment la culture d’algues de sol en laboratoire et comment énumérer la concentration d’algues dans l’échantillon de sol départ.

Les algues ont des effets bénéfiques sur les écosystèmes. Algues bleu - vert ou cyanobactéries, ont la capacité de fixer l’azote gazeux de l’atmosphère, ce qui les rend utiles en augmentant l’azote du sol dans des milieux semi-arides et aussi comme un outil potentiel pour la production de biocarburants.

Autres algues sont eucaryotes et vont de la simple-celled à des organismes multicellulaires complexes, comme les algues. Il s’agit d’algues vertes, euglènes, dinoflagellés et diatomées, algues brunes et algues rouges.

Les algues sont phototrophes, obtention d’énergie de la photosynthèse et carbone de la biomasse du dioxyde de carbone. Ainsi, il peuvent être cultivés dans médias entièrement composé de nutriments inorganiques, sans un substrat de carbone organique ajouté. Ce manque de substrat organique empêche la croissance des bactéries hétérotrophes, qui dépendent de carbone organique externe pour la croissance.

Aux algues de culture pour le dénombrement, sol échantillons sont dilués en série décuplée à 10-6 g de sol / mL et mis en culture dans des milieux de culture. Plusieurs répliques sont faites pour chaque dilution. Ils sont ensuite incubés dans un endroit bien éclairé pendant 4 semaines afin de permettre la croissance des algues.

La présence d’algues dans toute dilution est déterminée par un signe positif de la croissance dans le milieu, qui apparaît généralement comme un vase verte. Enfin, développés empiriquement tableaux NPP conçu pour la croissance des algues est consultés, permettant à l’utilisateur de déterminer la concentration d’algues originale basée sur la croissance en dilution réplique. La méthode du NPP s’appuie sur les dilutions d’échantillons tels que les algues sont dilués à l’extinction, ce qui signifie qu’à une certaine dilution, aucune croissance de l’algue s’ensuit.

Maintenant que nous sommes familiarisés avec les concepts de croissance et en énumérant les algues des échantillons, examinons un comment cela s’effectue en laboratoire.

Pour commencer l’expérience, premier poids à 10 grammes de terre humide qui a soit été recueillies humide sur le terrain, ou été réhydratées et est resté humide pendant 2 à 3 jours. Le sol doit mais pas saturé.

Ensuite, préparer une série de dilutions dix fois en ajoutant les 10 grammes de sol tout d’abord à 95 mL d’une solution de Bristol modifiés ou MBS. Ce qualifier de suspension A.

Après avoir agité vigoureusement, continuer la série de dilution en ajoutant 1 mL de suspension A dans 9 mL de MBS dans un tube à essai. Continuer cette série de dilution dix fois un autre 4 fois pour donner des dilutions allant jusqu'à 10-6 g / mL.

Ensuite, inoculer 5 tubes répétés, chaque contenant 9 mL de MBS avec 1 mL de chacun de la dilution 10-1 à 10-5. Cela se traduit par 5 tubes de répétitions pour chaque dilution de 10-2 à 10-6. Plafonner les tubes sans serrer.

Enfin, incuber les tubes pendant un total de 4 semaines dans un endroit exposé aux rayons du soleil. Observer les tubes pour la croissance des algues une fois tous les 7 jours. Tubes présentant la croissance des algues seront affiche en verts.

La plupart du nombre Probable, ou NPP, l’analyse est une méthode mathématique couramment utilisée pour énumérer les micro-organismes est passées de dilution d’un substrat initial concentré. En prenant en compte les facteurs de dilution des solutions et le nombre d’éprouvettes présentant des signes positifs de la croissance à chaque dilution, le nombre le plus probable d’organismes par gramme d’échantillon de sol original peut être calculé en utilisant une table de NPP et la formule simple.

Pour calculer le NPP, la dilution la plus élevée avec le plus grand nombre de tubes positifs de répliquer est attribuée le label de p1, dans ce cas, la réplique du tube C. En revanche, certains des tubes de D & E sont négatifs avec aucun signe de la croissance des algues.

Le nombre de tubes dans les deux prochains dilutions plus élevées qui montrent une croissance positive est étiqueté comme p2 et p3. Ici, p2 = D et p3 = E.

La valeur de p1 peut être trouvée en regardant vers le bas de la première colonne de la table de NPP. Le même devrait être fait avec la colonne p2 . Enfin, la valeur de p3, dans la partie supérieure, est utilisée pour se croisent les deux définis par p1 et p2, pour donner une valeur de nombre le plus probable d’organismes par mL.

Ensuite, pour calculer la concentration d’organismes par gramme dans l’échantillon de sol original, cette valeur est divisée par la concentration des sols dans la dilution à laquelle p2 a été attribuée. L’équation suivante est utilisée pour définir le nombre réel d’organismes par gramme de sol.

Énumération algue et analyse du NPP ont un large éventail d’applications, dont certaines sont abordés ici.

Cette méthode de culture d’algues énumération peut servir dans une variété de configurations. Il peut être appliqué dans des rivières ou des lacs pour déterminer les niveaux d’algues et évaluer les risques d’efflorescences algales nuisibles. Alternativement, il peut être utilisé pour évaluer la propreté et la sécurité des eaux plus directement utilisé par les humains, y compris les piscines, fontaines d’eau ou d’autres sources d’eau potable. Idéalement, dans les piscines et les échantillons d’eau potable, il n’y a aucune algues présentes.

L’analyse de NPP pour dénombrement peut également être appliquée à d’autres microorganismes non-algues. Par exemple, la qualité de l’eau peut être évaluée à l’aide de micro-organismes indicateurs tels que les coliformes fécaux ou e. coli. Ici, les échantillons peuvent être cultivées avec un milieu contenant des produits chimiques qui sont modifiés pour produire la couleur ou la fluorescence en présence des organismes indicateurs. En effectuant plusieurs petites répliques de cette expérience dans des cellules individuelles, avec des échantillons diluées à une concentration connue, le rapport des cellules positives peut être référencé dans une table de NPP pour l’organisme indicateur spécifique et la concentration initiale dans les échantillons déterminé.

Algues peuvent aussi être cultivées pour les applications commerciales. Par exemple, certains types d’engrais biologiques utilisent des algues bleu - vert, qui peuvent agir comme des symbiotes de plantes, facilitant leur luminaire et l’absorption de l’azote, qui est particulièrement utile pour aider à la croissance des cultures dans les zones avec des sols pauvres. De même, les algues peuvent être cultivés pour les biocarburants, ou comme source d’aliments riches en éléments nutritifs pour le bétail.

Vous avez juste regardé introduction de JoVE culture algale et énumération. Vous devez maintenant comprendre comment diluer les échantillons de sol pour la croissance des algues, comment la culture d’algues dans le laboratoire et comment énumérer la concentration d’algues de vos échantillons de départ. Merci de regarder !

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter