Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Først etablere ønsket brystkreftcellelinje i kultur. Dagen før operasjonen barberer du musens underliv og bruker depilatorisk krem for å fjerne pelsen og eksponere de inguinale brystvortene. På operasjonsdagen samler du cellene, bedøver musen og bekrefter mangel på respons på tåklemmen. Bruk pinsett, klem huden rundt brystvorten for å skape en oppløftet tunnel.
Deretter, med sprøyten av oppsamlede celler, pierce huden. Nålen skal følge tunnelen til spissen kommer nær brystvorten. Beveg nålespissen forsiktig opp i mammaryfettputen, like under brystvorten. Fjern pinsettene for å danne et hudtelt med nålen og injiser deretter cellene sakte.
Til slutt trekker du sprøyten tilbake, pass på at du ikke forstyrrer den runde kulen rundt brystvorten. Injiserte celler og påfølgende svulster uttrykker luciferase og kan spores ved hjelp av bioluminescent avbildning. I eksempelprotokollen vil vi vise etableringen av murin ortotopisk brystkreft. Dagen før operasjonen, hold mottakerens mus manuelt og vri dyremagesiden opp til pelsen som skal barbernes rundt de fjerde brystvortene.
Tørk pelsen med et tynt lag med depilatorisk krem. Brukt destillert vann for å fjerne kremen etter 30 til 60 sekunder. Og tørk musen med myke papirhåndklær. På operasjonsdagen fortynner du murin brystkreftcellefjæringen til en 2 x 10 til femte celler per milliliter PBS-konsentrasjon i et sterilt mikrocentrifugerør på is.
Før hver injeksjon, last en, en milliliter sprøyte utstyrt med en .45 av 16 nål, med 50 mikroliter celler per mus. Og bekreft mangel på respons på tåklemme i hvert bedøvet dyr. Påfør salve på dyrenes øyne, og bruk pinsett til å telte huden rundt den fjerde brystvorten til den første musen for å lage en tunnel for sprøyten å følge.
Hold sprøyten med skråkanten vendt oppover og delsnitt inn i huden på fem til 10 milliliter fra brystvorten, følg tunnelen til nålespissen nesten når brystvorten. - Bruk av pinsett til å telte huden rundt den første brystvorten skaper en tunnel som sprøyten skal følge. Nålen skal legges inn mellom pinsettspissene og skal ri opp, i stedet for å deprimere inn i vevet. Beveg nålespissen forsiktig opp i mammaryfettputen til skråkanten er under brystvorten.
Og slipp hudteltet for å tillate en langsom injeksjon av kreftcellene. - Ved innsetting, beveg nålespissen forsiktig opp i mammaryfettputen til skråkanten er under brystvorten, og at du føler motstand for å sikre levering av cellene til riktig sted. Når alle cellene er injisert, vri nålen litt til siden og trekk sprøyten sakte tilbake. Bruk en bomullspinne for å påføre trykk på nålesåret i 10 til 20 sekunder, for å sikre at det ikke er væskeseiling.
Den injiserte brystvorten skal vises som en gjennomsiktig hvit flat sfære, med brystvorten i midten.
