Elettrocardiografia Zebrafish (ECG): un saggio minimamente invasivo per valutare la funzione cardiaca

- Per iniziare, posizionare un lato ventrale di pesce anestetizzato in una fessura in una spugna bagnata. Inserire l&;elettrodo positivo nella linea mediana del pesce a livello dell'arteriosi bulbosa. Successivamente, inserire l&;elettrodo negativo sotto il ventricolo e da 0,5 a 1 millimetro a sinistra della linea mediana per creare un piombo bipolare attraverso il quale misurare le differenze di potenziale elettrico. Infine, inserire l'elettrodo di riferimento vicino alla regione anale per far a terra il segnale elettrico.

Inizia a registrare, e dopo un breve periodo di tempo, rivedere la traccia per assicurarsi che siano soddisfatti quattro criteri. Tutte le forme d&onda devono essere visibili e distinte l&una dall&altra. L&onda P, che rappresenta la depolarizzazione atriale, deve essere positiva. La somma netta delle onde Q, R e S, che rappresenta la depolarizzazione ventricolare, deve essere positiva. E infine, l&onda T, che rappresenta la ripolarizzazione atriale, deve essere positiva. Se i criteri non vengono soddisfatti, regolare gli elettrodi fino a quando non viene registrata una traccia adeguata.

Dopo la registrazione, svegliare il pesce immergendolo in acqua ossigenata e spruzzando acqua sulle branchie fino a quando le branchie o il pesce iniziano a muoversi regolarmente. Nell'esempio, eseguiremo l'elettrocardiografia di superficie su un pesce zebra adulto.

- Il giorno dell'esperimento, trasportare il pesce zebra dall'acquario al laboratorio. Per impostare il sistema di registrazione ECG in vivo, collegare le attrezzature essenziali e inserire i tre elettrodi in acciaio inossidabile codificati a colori del piombo ECG nei tre portali di accesso abbinati al colore dell'amplificatore. Per l'induzione dell'anestesia di livello 4, immergere un pesce zebra adulto in un piatto contenente una soluzione di anestesia alle concentrazioni predeterminate più basse approvate dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali.

Una volta che il pesce zebra ha mantenuto il livello per l'anestesia per tre secondi, utilizzare un paio di forcep smussate per trasferire immediatamente il pesce su una spugna umida con una superficie ventrale fessurata per il posizionamento dei tre elettrodi ECG. Inserire delicatamente l'elettrodo positivo nella linea mediana ventrale a livello dell'arteriosi bulbosa da 1 a 2 millimetri sopra una linea immaginaria che collega i due bordi inferiori degli opercoli.

Posizionare l'elettrodo negativo caudally e da 0,5 a 1 millimetro lasciato lateralmente all'elettrodo positivo a una distanza maggiore della lunghezza massima apicale-basale del ventricolo zebrafish adulto. Quindi, posizionare l'elettrodo di riferimento caudally vicino alla regione anale. Per la registrazione ECG, avviare il sistema e aprire il programma di acquisizione dati ECG. Selezionare l'impostazione desiderata dai menu a discesa per intervallo, passaggio basso e passaggio alto.

- Il singolo passaggio più critico è il posizionamento del piombo per massimizzare il rapporto segnale/rumore. Applicare tutti e quattro i criteri di convalida dopo il primo tentativo di registrazione ECG per ogni pesce per ottenere un feedback corretto.

- Se è previsto un normale ECG, riposizionare gli elettrodi in base alle esigenze fino a quando non sono soddisfatti tutti questi quattro criteri di convalida. Se è prevista un&onda T normale ma l&onda T è troppo piccola, riposizionare gli elettrodi per massimizzare l&litude dell&onda T. Riprendere la registrazione ECG dopo aver ottimizzato il posizionamento del piombo salvando le sweep ECG per un'analisi successiva.

Al termine della sessione di registrazione dell'ECG, rimuovere con cura gli elettrodi senza ferire il pesce. Negli studi di sopravvivenza, trasferire il pesce in acqua di pesce fresca e ossigenata priva di tricaina. In questo video per facilitare ai lettori la visione del recupero del pesce dall'anestesia, l'ossigenazione viene interrotta.

Per facilitare il recupero dall'anestesia negli studi di sopravvivenza, utilizzare una pipetta Pasteur per spruzzare vigorosamente acqua sulle branchie fino a quando il pesce non riprende il normale movimento branchiale o nuotare. Quindi monitorare il pesce per il pieno recupero dall'anestesia prima di riportare il pesce all'acquario. Il pesce è considerato completamente recuperato dall'anestesia quando può nuotare in posizione verticale per almeno 5 secondi.