Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Pour commencer la dissection, utilisez une paire de forceps pour saisir le corps larvaire au milieu, et une deuxième paire pour déchirer la larve en deux. Puis pincez le crochet de la bouche à l’extrémité antérieure tout en tenant le corps sur le côté postérieur. Ensuite, poussez les forceps tenant la bouche à l’intérieur du corps. Utilisez les forceps postérieurs pour plier la paroi du corps à l’extérieur.
Dans cette préparation, les glandes salivaires et l’intestin peuvent être facilement identifiables et enlevés pour révéler le cerveau et les disques imaginaires. Les disques d’antenne, d’oeil, de jambe, d’aile et de haltère peuvent être vus. Une fois fixés, transférez la préparation larvaire sur une glissière avec le milieu de montage où les disques peuvent être disséqués davantage. Dans le protocole d’exemple, nous verrons comment disséquer les disques imaginaux d’aile utilisant cette préparation larvaire.
- Pour commencer, utilisez un bâton en bois ou des forceps contondants pour transférer les larves errantes du troisième stade dans une boîte de Pétri avec PBS. Ensuite, génotypez-les sous lumière fluorescente pour identifier les marqueurs fluorescents appropriés pour les larves de mosaïque. Avant de procéder, lavez les larves avec du PBS. Puis, au microscope à dissection, utilisez deux paires de forceps pour pincer le centre de la larve et déchirez le corps en deux. Ensuite, pincez les crochets buccaux tout en poussant la bouche vers le corps pour tourner le corps vers l’extérieur. Puis retirez les matériaux inutiles, comme les glandes salivaires et les gros corps. Les larves sont maintenant préparées pour fixation et la coloration des anticorps, qui est détaillée dans le protocole de texte.
Transférer les préparations des tissus tachés sur une lame de microscope à l’aide d’une pipette de transfert en plastique de deux millilitres. Puis à l’aide de forceps, déplacer la larve individuelle en gouttes de milieu de montage sur une lame de microscope. Maintenant, à l’aide de forceps, isoler les disques imaginaires. Commencez par maintenir l’extrémité des tissus disséqués et en tirant les disques d’antenne du cerveau et des yeux avec les autres forceps. Gardez le cerveau prêt à l’emploi.
Maintenant, localisez les disques imaginaires de l’aile. Les disques d’imagination de l’aile sont collés au côté latéral du tissu disséqué. Ensuite, fixez le tissu avec une force, et grattez doucement les disques d’aile. Puis placez le cerveau près des disques d’aile pour les protéger d’être écrasés par le coverslip. Maintenant couvrez doucement les structures avec un glissement de couverture, et scellez le coverslip avec le vernis à ongles. Stockez la glissière à 4 degrés Celsius.
