Drosophila Larva Imaginal Disc Dissektion: En metode til at observere Udvikling Epithelia

- For at begynde dissektionen skal du bruge et par pincet til at gribe larvekroppen i midten og et andet par til at rive larven midt over. Klem derefter mundkrogen i den forreste ende, mens du holder kroppen på den bageste side.

I dette præparat kan spytkirtlerne og tarmen let identificeres og fjernes for at afsløre hjernen og imaginale skiver. Antennerne, øjet, benet, vingen og haltereskiverne kan ses. Når de er fastgjort, overføres larvepræparatet på et dias med monteringsmedie, hvor diskene kan dissekeres yderligere. I eksempelprotokollen vil vi se, hvordan man dissekerer vinge-imaginalskiver ved hjælp af dette larvepræparat.

- Til at begynde med skal du bruge en træpind eller stumpe pincet til at overføre vandrende tredje instar larver til en petriskål med PBS. Skriv dem derefter under fluorescerende lys for at identificere de relevante fluorescerende markører for mosaiklarver. Før du fortsætter, vask larverne med PBS. Derefter under et dissektionsmikroskop skal du bruge to par pincet til at klemme larvens centrum og rive kroppen i halvdelen. Dernæst klemmes mundkrogene, mens du skubber munden mod kroppen for at vende kroppen vrangen ud. Fjern derefter unødvendige materialer, såsom spytkirtlerne og fedtlegemerne. fiksering og antistof farvning, som er beskrevet i tekstprotokollen.

Overfør de farvede vævspræparater til et mikroskop dias ved hjælp af en to milliliter plastoverførsel pipette. Derefter ved hjælp af pincet, flytte individuelle larve i dråber af montering medium på et mikroskop dias. Nu ved hjælp af pincet, isolere imaginal diske. Start med at holde nede i slutningen af dissekeret væv og trække væk hjernen og øjet antenne diske med de andre pincet. Hold hjernen klar til brug.

Find nu vingens imaginale skiver. Vingens imaginale skiver sidder fast på den laterale side af dissekeret væv. Dernæst skal du sikre vævet med en kraft og forsigtigt ridse vingeskiverne af. Placer derefter hjernen nær vingeskiverne for at beskytte dem mod at blive knust af coverlipet. Nu dækker forsigtigt strukturerne med en dæksedler og forsegler dækslet med neglelak.