Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Under et dissektionsmikroskop og i serum supplerede medier skal du fjerne forplantningskanalen fra hver flue med pincet. Fjern først dele af fordøjelseskanalen, der kan have ledsaget forplantningskanalen.
For at udsætte cellerne inde i kirtlerne for dissociationsopløsningen, skal du holde midten af hver kirtel med pincet og skære gennem kirtlen med et par skarpe pincet. Fjern den proksimale del af kirtlen og ejakulatorkanalen for at efterlade den distale ende af kirtlerne, der indeholder den sjældne sekundære cellepopulation, der er ansvarlig for udskillelse af proteiner, der er involveret i parring. Endelig overføres tilbehørkirtlens spidser til et mikrocentrifugerør som forberedelse til fordøjelsen.
- Inden proceduren påbegyndes, skæres og flammes rundt, skal der være brede 200 mikroliterspidser til håndtering af kirtlerne og passere spidsen åbning af flere 1000 microliter tips i nærheden af en flamme i mindre end et sekund for at indsnævre åbningerne. Derefter sortere de modificerede tips fra smallere til bredere baseret på deres hastighed aspiration. For tilbehør kirtel dissektion, sted 20 til 25 mandlige drosophila i et glas parabol på is og bruge pincet og en dissektion mikroskop til at fjerne den reproduktive tarmkanalen af en mandlig flyve.
Ryd tilbehørskkirtlen par fra alle de andre væv, herunder testikler og ejakulatorisk pære, og overfør tilbehørskirtlerne til en glasplade, der indeholder serum suppleret medium ved stuetemperatur. Når der er indsamlet 20 par tilbehørkirtler, vaske kirtlerne i en skål MED PBS i et til to minutter ved stuetemperatur. Ved afslutningen af vasken overføres kirtlerne til frisklavet dissociationsopløsning, og der anvendes skarpe pincet under et dissekerende mikroskop for at klemme midten af en kirtelflipp fast.
Ved hjælp af et andet par pincet skæres vævet med den skarpe spids for at adskille den proksimale region af tilbehørskirtlen og ejakulatorkanalen fra den del af kirtlen, der indeholder sekundære celler. Brug derefter en forvædlet flamme afrundet bred 200 mikroliter pipettespids til at overføre kirtlerne til et 1,5 milliliter rør.
