成虫のショウジョウバエの注射:化合物またはラベル送達の方法

- ニードルプラーを使用して薄肉ガラスキャピラリーを引っ張って、テーパー状の注射針を準備します。顕微鏡で針をつかんで先端を折って、開口部が成虫のハエのキューティクルを必要以上に傷つけずに突き刺すのに十分な大きさであることを確認します。滅菌染料と塩緩衝液をニードルにロードし、ステージマイクロメーター上の鉱物油滴に排出して、注入量を測定します。マイクロメーターの目盛りを使用して、噴出された液滴の直径を測定し、それを使用して分注量を計算し、それに応じてインジェクターの設定を校正します。

ニードルに注射液をセットし、注射ノズルに取り付けます。ハエにCO2を麻酔し、麻酔をかけ続けるCO2フライパッドにハエを配置します。フライが実験の正しい向きになったら、注射を続行します。プロトコル例では、成虫のハエにフルオレセイン標識粒子を注入してin vivoイメージングを行います。

- ニードルプラーで薄肉ガラスキャピラリーを引っ張った後、マイクロメーターを使用して顕微鏡で針を保持し、5番の細いステンレス鋼ピンセットを使用して先端を100マイクロメートルの先端直径に壊します。各フライに注入される液体の量を測定するには、PBSで滅菌された5%食品着色料を含む毛細管針をロードし、0.01ミリメートルステージマイクロメートル上の鉱物油の滴に液体を排出します。

10マイクロリットルあたり1.6ミリグラムの粒子を小さな正方形のパラフィルムに分配し、液体を針に引き込みます。針をインジェクターノズルに取り付け、麻酔をかけたフライをフライパッドの指定された領域に沿って、腹側を上にして、ヘッドをパッドの前面に向けて並べます。バイアルをベンチの対応する領域に置き、腹部の上部隅にあるハエに5つの100ミリ秒の液体ポンプを注入して、合計で約10ナノリットルの粒子を送達します。注入時に各フライを適切なバイアルに移し、バイアルの時間に注意してください。

次に、新しい針に 0.4% トリパン ブルー溶液を充填し、空気圧インジェクターを「ゲート」に設定して、一定の空気の流れで液体を針から押し出すようにします。最初の注射から 30 分後、腹部がいっぱいになって膨張するまで、各ハエ腹部にトリパン ブルーを注入します。ハエを電気テープの腹側を下にして顕微鏡スライドに取り付け、翼をフライの側面に押してテープに固定します。次に、ヘッドをテープにそっと押し込み、フライが動かないようにします。