Инъекция взрослых мух дрозофилы: метод соединения или доставки этикетки

- Подготовка конические иглы инъекции, потянув тонкостенные стеклянные капилляры с помощью иглы шкив. Держите иглу под микроскопом и сломайте кончик, убедившись, что отверстие достаточно большое, чтобы проколоть кутикулу взрослой мухи, не ранив ее больше, чем необходимо. Измерьте объем впрыска, загрузив иглу стерильным раствором буфера красителя и соли, а затем выбросив ее на каплю минерального масла на стадии микрометра. Используйте шкалу на микрометре для измерения диаметра выброшенной капли, которая может быть использована для расчета объема. настройки соответственно.

Загрузите иглу с помощью инъекционного раствора и смонтируйте ее на инъекционный сопло. Анестезия мух с CO2 и расположить их на CO2 летать площадку, которая будет держать их анестезии. Как только мухи находятся в правильной ориентации для вашего эксперимента, приступить к инъекциям. В примере протокола, мы будем вводить взрослых мух с флуорескеин помечены частицами для in vivo изображений.

- После потянув тонкостенные стеклянные капилляры с иглой шкив, использовать микрометр, чтобы держать иглу под микроскопом и использовать номер пять тонкой точки пинцета из нержавеющей стали, чтобы сломать кончик до 100 микрометров диаметром кончика. Чтобы измерить объем жидкости, которая будет введена в каждой мухи, загрузить капиллярную иглу с стерильной 5% пищевой краситель в PBS и изгнать жидкость на каплю минерального масла на 0,01 миллиметра стадии микрометра.

Выделите 10 микролитров по 1,6 миллиграмма на миллилитр частицы на небольшой квадрат парафильма и потяните жидкость в иглу. Гора иглы в сопло инжектора и линии анестезированной мух вдоль их назначенной области на лету площадку, брюшной стороне вверх, с головами, ориентированными на передней части площадки. Поместите флаконы в соответствующих областях на скамейке и вводить мух в верхнем углу живота с пятью 100 миллисекунд насосов жидкости, чтобы доставить около 10 нанолитров частиц всего. время на флаконе.

Затем загрузите новую иглу раствором Trypan Blue на 0,4% и установите пневматический инжектор на «закрытый», чтобы постоянный поток воздуха выталкивал жидкость из иглы. Через 30 минут после первоначальной инъекции, вводить каждую муху живота с Trypan Blue до тех пор, пока животы полны и растянуты. Гора мух на микроскоп слайды с электрической лентой брюшной стороны вниз, толкая крылья в сторону мухи, чтобы обеспечить их к ленте. Затем осторожно нажмите голову в ленту, чтобы убедиться, что муха не будет двигаться.