Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- للبدء ، اغمر الحشرات المخدرة في محلول الإيثانول بنسبة 70٪ للحد من رهاب الماء في السفاح.
بعد ذلك، قم بإزالة الرأس والبطن من الصدر. استخدم ملقط لتطبيق ضغط لطيف على تقاطع كوكسا-ثوراكس، وفصل الساق. ضع الساقين بعناية في محلول paraformaldehyde البارد بنسبة 4٪ بين عشية وضحاها للسماح لها باختراق الأنسجة.
ثم، قم بإزالة محلول التثبيت وغسل الأنسجة عدة مرات بالمنظفات المالحة المخزنة بالفوسفات والتي تحتوي على المنظفات.
وأخيرا، قم بتركيب الساقين في قطرة من الوسط المتصاعد.
في المثال التالي، سنرى تشريح، تثبيت، وتصاعد من الأرجل Melanogaster Drosophila.
- ابدأ بملء العدد المناسب من الآبار في لوحة زجاجية متعددة الآبار مع الإيثانول بنسبة 70٪. استخدم فرشاة لإضافة 15 إلى 20 ذبابة تخدير ثاني أكسيد الكربون من أي عمر أو جنس لكل بئر ، وداب بلطف الذباب في الإيثانول حتى تغمرها بالكامل.
بعد ما لا يزيد عن دقيقة واحدة، شطف الذباب ثلاث مرات مع 0.3٪ محلول المنظفات السطحية غير الأيونية في المالحة العازلة بالفوسفات لمدة 10 دقائق على الأقل لكل غسل. بعد الغسيل الأخير، استخدم ملقط لإزالة رأس وبطن كل ذبابة دون الإضرار بالجزء الصدري أو الساقين، واستخدم طرف زوج من ملقط ناعم لتطبيق الضغط بلطف ولكن بحزم على تقاطع كوكسا-الصدر لفصل ساق واحدة عن الجزء الصدري.
وضع الساقين في بئر واحد من لوحة متعددة الآبار الجديدة، التي تحتوي على أعدت حديثا 4٪ paraformaldehyde على الجليد، لاحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
- من المهم دفع الساقين بلطف إلى المخزن المؤقت التثبيت دون السماح لهم تطفو للحصول على الساقين ثابتة جيدا.
- في اليوم التالي، اغسل الساقين خمس مرات في محلول المنظفات السطحية الطازج بنسبة 0.3٪ لمدة 20 دقيقة لكل غسل.
في اليوم التالي، إضافة ما يقرب من 20 ميكرولتر من 70٪ الجلسرين بجانب نهاية المغلفة من الشريحة المجهر الزجاجي وتغطية الجلسرين مع 22 في 22 ملليمتر coverslip. التالي، إضافة في حوالي 10 ميكرولتر خط تصاعد المتوسطة إلى يمين غطاء وتطبيق خط 30 ميكرولتر الثانية من تصاعد المتوسطة إلى يمين خط 10 ميكرولتر.
باستخدام ملقط غرامة، ونقل ساق واحدة من لوحة multiwell في قطرة من المتوسط إلى قطاع 10 ميكرولتر من المتوسطة المتصاعدة في الجانب الخارجي صعودا أو هبوطا الاتجاه. كرر حتى ستة إلى ثمانية أرجل قد شنت ومحاذاتها، ووضع غطاء الثاني على الساقين بحيث coverlip الثاني يقع قليلا على غطاء الأول.
