Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

معالجة أرجل الحشرات للتنظير المجهري الفلوري

 
Click here for the English version

معالجة أرجل الحشرات للتنظير المجهري الفلوري: طريقة للحفاظ على الهياكل العصبية العضلية للتصوير

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- للبدء ، اغمر الحشرات المخدرة في محلول الإيثانول بنسبة 70٪ للحد من رهاب الماء في السفاح.

بعد ذلك، قم بإزالة الرأس والبطن من الصدر. استخدم ملقط لتطبيق ضغط لطيف على تقاطع كوكسا-ثوراكس، وفصل الساق. ضع الساقين بعناية في محلول paraformaldehyde البارد بنسبة بين عشية وضحاها للسماح لها باختراق الأنسجة.

ثم، قم بإزالة محلول التثبيت وغسل الأنسجة عدة مرات بالمنظفات المالحة المخزنة بالفوسفات والتي تحتوي على المنظفات.

وأخيرا، قم بتركيب الساقين في قطرة من الوسط المتصاعد.

في المثال التالي، سنرى تشريح، تثبيت، وتصاعد من الأرجل Melanogaster Drosophila.

- ابدأ بملء العدد المناسب من الآبار في لوحة زجاجية متعددة الآبار مع الإيثانول بنسبة 70٪. استخدم فرشاة لإضافة 15 إلى 20 ذبابة تخدير ثاني أكسيد الكربون من أي عمر أو جنس لكل بئر ، وداب بلطف الذباب في الإيثانول حتى تغمرها بالكامل.

بعد ما لا يزيد عن دقيقة واحدة، شطف الذباب ثلاث مرات مع 0.3٪ محلول المنظفات السطحية غير الأيونية في المالحة العازلة بالفوسفات لمدة 10 دقائق على الأقل لكل غسل. بعد الغسيل الأخير، استخدم ملقط لإزالة رأس وبطن كل ذبابة دون الإضرار بالجزء الصدري أو الساقين، واستخدم طرف زوج من ملقط ناعم لتطبيق الضغط بلطف ولكن بحزم على تقاطع كوكسا-الصدر لفصل ساق واحدة عن الجزء الصدري.

وضع الساقين في بئر واحد من لوحة متعددة الآبار الجديدة، التي تحتوي على أعدت حديثا paraformaldehyde على الجليد، لاحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.

- من المهم دفع الساقين بلطف إلى المخزن المؤقت التثبيت دون السماح لهم تطفو للحصول على الساقين ثابتة جيدا.

- في اليوم التالي، اغسل الساقين خمس مرات في محلول المنظفات السطحية الطازج بنسبة 0.3٪ لمدة 20 دقيقة لكل غسل.

في اليوم التالي، إضافة ما يقرب من 20 ميكرولتر من 70٪ الجلسرين بجانب نهاية المغلفة من الشريحة المجهر الزجاجي وتغطية الجلسرين مع 22 في 22 ملليمتر coverslip. التالي، إضافة في حوالي 10 ميكرولتر خط تصاعد المتوسطة إلى يمين غطاء وتطبيق خط 30 ميكرولتر الثانية من تصاعد المتوسطة إلى يمين خط 10 ميكرولتر.

باستخدام ملقط غرامة، ونقل ساق واحدة من لوحة multiwell في قطرة من المتوسط إلى قطاع 10 ميكرولتر من المتوسطة المتصاعدة في الجانب الخارجي صعودا أو هبوطا الاتجاه. كرر حتى ستة إلى ثمانية أرجل قد شنت ومحاذاتها، ووضع غطاء الثاني على الساقين بحيث coverlip الثاني يقع قليلا على غطاء الأول.

Tags

قيمة فارغة، مشكلة ،
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter