处理昆虫腿荧光显微镜：一种保存神经肌肉结构成像的方法

- 首先，将麻醉昆虫浸入70%的乙醇溶液中，以减少皮质层的疏水性。然后，用含有洗涤剂的磷酸盐缓冲盐水清洗和渗透组织至少30分钟，以便组织在固定过程中渗透。

接下来，从胸腔中取出头部和腹部。使用钳子对考克斯-索拉克斯交界处施加温和压力，并分离腿部。 小心地将腿部置于冰冷的4%副甲醛溶液中过夜，使其穿透组织。 甲醛通过交叉连接蛋白质修复组织。

然后，取出固定溶液，用含洗涤剂的磷酸盐缓冲盐水多次清洗组织。安装前，将双腿置于纯或稍微稀释的安装缓冲器中至少一天，以提供足够的时间让缓冲器进入组织。

最后，将双腿安装在一滴安装介质中，在显微镜滑梯和盖片之间使用间隔器，以防止标本损坏，并用指甲油固定安装。

在下列示例中，我们将看到德罗索菲拉褪黑麦加斯特腿的解剖、固定和安装。

- 首先用70%乙醇在玻璃多井板中填充适量的油井。用刷子在每口井中加入15至20只任何年龄或性别的二氧化碳麻醉苍蝇，然后轻轻地将苍蝇涂入乙醇中，直到它们完全被淹没。

不超过一分钟后，用 0.3% 非离子表面活性剂洗涤剂溶液在磷酸盐缓冲盐水中冲洗苍蝇三次，每次洗涤至少 10 分钟。 最后一次洗涤后，使用钳子去除每只苍蝇的头部和腹部，而不会损坏胸部或腿部，并使用一对细钳尖轻轻但牢固地向考克斯-索拉克斯交界处施加压力，将一条腿从胸部分离。

将腿放在一个新的多井板的一口井里，在冰上含有新鲜准备的4%的副甲醛，在4摄氏度下进行夜间孵化。

- 重要的是将腿轻轻推入固定缓冲区，而不要让它们漂浮以获得固定良好的腿部。

- 第二天，用新鲜的0.3%非离子表面活性剂洗涤剂溶液洗腿5次，每次洗涤20分钟。最后一次洗涤后，用安装介质更换洗涤剂，将腿部保持在安装介质中至少24小时。

第二天，在玻璃显微镜滑梯的涂层末端旁边加入大约20微升的70%甘油，用22乘22毫米的盖片覆盖甘油。接下来，在盖片右侧加入约10微升的安装介质线，并在10微升线的右侧应用第二条30微升的安装介质线。

使用细钳，将一条腿从多井板在一滴中转到外侧向上或向下方向安装介质的 10 微滑条。重复，直到六到八条腿被安装和对齐，并在腿上放置第二个盖片，使第二个盖片稍微放在第一个盖片上。然后，在盖片的每个角落使用指甲油来固定它们到位。