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Encyclopedia of Experiments: Biology

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형광 현미경 검사법을 위한 곤충 다리 처리

 
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형광 현미경 검사법을 위한 곤충 다리 처리: 화상 진찰을 위한 신경 근육 구조물을 보존하는 방법

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- 먼저 마취곤충을 70% 에탄올 용액으로 침수하여 큐티클의 소수성을 감소시켰다.

다음으로, 흉부에서 머리와 복부를 제거합니다. 집게를 사용하여 coxa-흉부 접합에 부드러운 압력을 가하고 다리를 분리하십시오.

이어서, 고정용액을 제거하고 세제를 함유하는 인산염 완충식식염수로 조직을 여러 세척한다.

마지막으로, 다리를 장착 매체의 방울에 장착. 현미경 슬라이드와 커버슬립 사이에 스페이서를 사용하여 시편이 손상되지 않도록 하고 매니큐어로 마운트를 고정하십시오.

다음 예에서는 드로소필라 멜라노가스터 다리의 해부, 고정 장착을 있습니다.

- 유리 멀티웰 플레이트에 적절한 수의 우물을 70% 에탄올로 채우는 것으로 시작합니다. 브러쉬를 사용하여 모든 연령 또는 성별의 15~20개의 이산화탄소 마취 파리를 우물에 추가하고 완전히 물에 잠길 때까지 파리를 에탄올에 부드럽게 두드려 주세요.

1분 이상 후, 시동당 10분 이상 인산염 완충식식염에 0.3% nonionic 계면활성제 세제용액으로 파리를 헹구는 다. 마지막 세척 후, 집게를 사용하여 흉부 세그먼트 또는 다리를 손상시키지 않고 플라이의 머리와 복부를 제거하고 미세 포셉 한 쌍의 끝을 사용하여 코카 흉부 접합에 압력을 부드럽게 바르지만 단단히 가하여 흉부 세그먼트에서 쪽 다리를 분리합니다.

준비된 4% 파라포름알데히드를 얼음 위에 담은 새로운 멀티웰 플레이트의 한 웰에 다리를 놓고 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 배양을 합니다.

- 다리를 고정 버퍼에 부드럽게 밀어 넣는 것이 중요합니다.

- 다음 날, 신선한 0.3 % nonionic 계면 활성제 세제 용액으로 다리를 세척 20 동안 5 세척하십시오. 마지막 세척 세제를 장착 매체로 교체하고 다리를 장착 매체에 24 시간 이상 유지하십시오.

다음 날, 유리 현미경 슬라이드의 코팅 된 옆에 70 % 글리세롤의 20 마이크로 리터를 추가하고 22 에서 22 밀리미터 커버 슬립으로 글리세롤을 덮습니다.

미세한 집게를 사용하여, 중간 크기의 멀티웰 플레이트에서 10 마이크로리터 스트립으로 외부 또는 아래 방향에서 장착 매체로 옮기십시오. 6~8개의 다리가 장착되고 정렬될 때까지 반복하고, 두 번째 커버슬립이 첫 번째 커버슬립에 약간 놓이도록 다리에 번째 커버슬립을 놓는 다음, 커버슬립의모서리에 매니큐어를 사용하여 고정을 고정합니다.

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