Preparação do Coração de Drosophila: Uma Técnica para Estudar Fisiologia do Coração na Mosca Adulta

- Diferente dos vertebrados, o coração de Drosophila faz parte de um sistema circulatório aberto. O coração de uma mosca adulta é uma estrutura semelhante a tubo construída a partir de cardiomiócitos que é conectada à epiderme por músculos alários e incorporada em matriz extracelular.

Em insetos, o hemilfo serve como sangue e fluido intersticial, carregando nutrientes, moléculas de sinalização e células imunes. Outros marcos do coração incluem osstia, que são aberturas ao longo do tubo, e válvulas intracardicascas. As células pericárdicas são localizadas ao longo do tubo cardíaco e fazem parte do sistema excretório da mosca.

Em uma preparação cardíaca experimental, o hemisão artificial imita condições fisiológicas para preservar a função tecidual. Embora a hemoglifo natural não seja responsável pela troca de gás, a hemolicamph artificial deve ser bem oxigenada para substituir a falta de um sistema traqueal funcional. No experimento seguinte, demonstramos uma preparação cardíaca semi-intacta de uma mosca adulta para imagem viva ou eletrofisiologia.

- Antes de começar, primeiro preparamos uma solução hemoglifo artificial. Esta solução contém sacarose e trehalose, que deve ser adicionada ao hemoglifo artificial de soluções de estoque refrigerada pouco antes de usar, a fim de evitar a contaminação bacteriana. Leve o hemoglifo artificial à temperatura ambiente e oxigene a solução por pelo menos 15 minutos.

Em seguida, puxe vários capilares finos usando um puxador de pipeta padrão, que será necessário para a remoção de corpos de gordura na mosca.

Uma vez que tudo tenha sido preparado, as moscas adultas devem ser anestesiadas. Isso pode ser feito usando breve exposição para soneca de mosca por dois a cinco minutos, mas tenha cuidado para não deixar as moscas na soneca de mosca por mais de cinco minutos. A exposição a curto prazo ao frio também pode ser usada para anestesiar moscas, mas o dióxido de carbono não é recomendado, uma vez que tem efeitos mais duradouros na frequência cardíaca e na rítmica.

Em seguida, as moscas anestesiadas são colocadas, lado dorsal para baixo, em uma placa de Petri revestida com uma fina camada de geleia de petróleo.

A cabeça, o fio do nervo ventral e as pernas são removidas com um único corte. Uma vez cortada, a preparação é então submersa na solução hemoglifo artificial oxigenada. Utilizando a tesoura de mola, a ponta posterior do abdômen, que é composta pelo segmento abdominal 7 e 8, é removida com um único corte.

Insira as lâminas da tesoura na pequena abertura na ponta do abdômen e corte a cutícula lateralmente. Isso libera uma borda do cutícula ventral. Segure o retalho com fórceps e faça um corte semelhante ao longo da borda lateral oposta do abdômen.

O intestino e outros órgãos abdominais geralmente podem ser removidos como uma única massa usando fórceps joalheiros e puxões suaves. A remoção dos órgãos internos revela o tubo cardíaco pulsante, que ainda está ligado à cutícula dorsal por pequenos músculos alários e é cercado por corpos de gordura. Os capilares puxados são inseridos em plástico, tubos de 1/16 polegadas ligados a uma fonte de vácuo.

Uma vez configurado, este sistema de sucção é usado para sugar o excesso de gordura ao redor do tubo cardíaco. Ele também pode ser usado para remover bolhas de ar que se acumulam ao redor da cutícula e quaisquer detritos.

Se necessário, a cutícula e o coração preso podem ser reposicionados levantando suavemente a cutícula da geleia de petróleo e cuidadosamente tampá-la de volta para baixo, novamente evitando qualquer contato com o tecido cardíaco. Neste ponto, a solução que banha a preparação deve ser substituída por hemoglifo fresco e artificial. Esta preparação deve ser permitida a equilíbrio por 20 a 30 minutos com oxigenação antes de qualquer manipulação. Se a preparação deve ser mantida por mais de 60 minutos, deve ser re-perfumada com hemoglifo artificial fresco. também devem ser usados para gravação eletrofisiológica ou para manipulações histológicas.