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Encyclopedia of Experiments: Biology

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Electrotaxis Assay: A Method to Observer Locomotion in C. elegans Electrotaxis Assay: A Method to Observer Locomotion in C. elegans Electrotaxis Assay: A Method to Observer Locomotion in C. elegans Electrotax

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- Sans stimuli sensoriels, le mouvement de C. elegans est généralement vers l’avant et est interrompu par des inversions et des virages - des manœuvres de réorientation aléatoires qui entraînent un changement de direction. C. elegans sont électroréceptifs. C’est-à-dire qu’ils peuvent sentir les champs électriques. Lorsqu’ils sont exposés à un courant direct doux ou à un DC, les vers se déplacent sur un chemin ininterrompu droit dans le sens de l’électrode négative ou de la cathode, un comportement appelé électrotaxis.

Pour observer plus précisément la locomotion du ver, placez l’animal dans un dispositif microfluidique et appliquez un champ électrique DC. Inverser la direction du champ, et le ver tournera dans la direction opposée - vers la direction de la cathode. Appliquer un courant alternatif, AC, et le ver s’arrêtera. Le changement alternatif dans la direction du champ submerge les systèmes neuromoteurs du ver, ce qui entraîne l’immobilisation du ver. Réappliquer le champ DC, et le ver reprendra le mouvement vers l’avant vers la cathode.

Dans le protocole d’exemple suivant, nous verrons une configuration démontrant un essai d’électrotaxis dans un dispositif microfluidique.

- Commencez cette étape en plaçant le microcanal juste assemblé sur une scène xy-mobile d’un microscope avec une caméra montée reliée à un moniteur. Connectez l’alimentation électrique aux électrodes du microcanal.

Après avoir confirmé que la résistance du microcanal est d’environ 0,6 méga-ohms, fixez le tube de sortie du micro-canal à une seringue jetable. Puis submergez la bouche du tube d’entrée dans une solution de nématodes suspendus dans le tampon physiologique M9. Appliquez une pression négative à l’intérieur de la seringue pour aspirer le liquide dans le canal.

Lorsque les tubes d’entrée et de sortie sont tous deux remplis, déconnecter la seringue et manipuler hydrostatiquement le débit en ajustant la hauteur relative du tube pour placer un ver au centre du chenal. Puis poser les deux tubes à plat à la même altitude. Maintenir un débit nul à l’intérieur du microcanal lors de la commutation d’échantillons de vers au cours d’une expérience d’électrotaxis, après avoir nivelé les deux tubes d’entrée à la même altitude, s’il y a encore un flux, faire de petits ajustements à la hauteur du tube par rapport à l’autre.

- Si jamais nous ne savons pas si le flux est vraiment nul, nous pouvons induire une inversion du mouvement du ver en changeant la polarité du champ électrique, puis en évaluant la vitesse linéaire du ver au fur et à mesure qu’il se retourne.

- Maintenant, réglez l’alimentation à la tension appropriée. Activez le signal électrique et prévoyez une minute de pré-exposition pour que le ver s’acclimate au champ, période pendant laquelle le ver doit commencer à se déplacer vers la cathode. Lorsque la minute est passée, commencez à enregistrer.

Lorsque l’expérience est terminée, retirer tout le liquide et les vers du canal. Rincer la chambre avec de l’eau déionisée et laisser sécher l’appareil sur une plaque chauffante à 125 degrés Celsius.

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