Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- يستخدم C. elegans كنموذج تجريبي للعدوى من قبل مسببات الأمراض المعوية التي تسبب المرض، جزئيا، عن طريق تعطيل الحاجز المعوي، وزيادة نفاذيته.
بعد ذلك ، ضع هذه الديدان على لوحات أجار مع طعام يحمل علامة تتكون من الإشريكية القولونية التي قتلت بالحرارة مختلطة مع FITC-dextran ، وهو بوليساكريد عالي الوزن الجزيئي مع علامة فلورية.
السماح للديدان لتناول الطعام البكتيريا المسمى.
نقل الديدان إلى محلول الفورمالديهايد لإصلاح الحيوانات.
وأخيرا، صورة الديدان عن طريق المجهر الفلورسنت. لاحظ أن حبيبات الأمعاء C. elegans هي autofluorescent، لذلك سيكون هناك إشارة الخلفية.
في بروتوكول المثال ، سنقوم باثبات تأثير العلاج مع الجزيئات الحيوية DIM على نفاذية الأمعاء للديدان المصابة ببكتيريا Pseudomonas aeruginosa المسببة للأمراض.
- إعداد لوحات فيتك-dextran-تكملها عن طريق خلط 2 ملليلتر من E الحرارة المعطل. القولونية مع 4 ملليغرام من FITC-dextran. إضافة 100 ميكرولتر من الخليط إلى كل من 20 لوحات أجار NGM الطازجة والسماح للوحات لتجف لمدة ساعة واحدة على مقاعد البدلاء مختبر نظيفة. بعد 48 ساعة من العلاج, غسل الديدان مع S العازلة. نقلها إلى لوحات تكمل FITC-dextran ولوحات NGM دون FITC-dextran واحتضان لوحات بين عشية وضحاها.
في اليوم التالي، اغسل الديدان ب S Buffer واسمح لها بالزحف في لوحة NGM agar الطازجة لمدة ساعة واحدة.
- الفورمالديهايد مادة كيميائية سامة وينبغي التعامل معها بعناية.
