FITC-德克斯特兰喂养：量化C.elegans肠道渗透性的方法

- C. elegans 被用作肠道病原体感染的实验模型，通过破坏肠道屏障、增加其渗透性来引起疾病。要量化接触细菌或感兴趣的化合物后的屏障完整性，请通过将蠕虫从盘子中洗掉来收集蠕虫。

接下来，将这些蠕虫放在由热杀大肠杆菌与FITC-dextran混合的标记食品的阿加板上，FITC-dextran是一种高分子量多糖，带有荧光标签。

允许蠕虫吃贴有标签的细菌。那些有完整肠道屏障的人会迅速清除食物，而在肠道更透气的蠕虫中，荧光标记会穿透器官的流明。

将蠕虫转移到甲醛溶液中修复动物。1到2分钟后，用安装介质代替甲醛。

最后，通过荧光显微镜对蠕虫进行成像。请注意，C.elegans肠道颗粒是自发光的，因此会有背景信号。但总体而言，肠道荧光越多，渗透率就越高。

在示例协议中，我们将检测使用生物分子DIM 治疗对感染致病性伪多莫纳斯动脉瘤细菌的蠕虫肠道渗透性的影响。

- 通过混合 2 毫升的热灭活E来准备 FITC-德克斯特伦补充板。 大肠杆菌与4毫克的FITC-德克斯特兰。在 20 个新鲜的 NGM agar 板中每块中加入 100 微升混合物，使板在干净的实验室长凳上干燥一小时。经过48小时的治疗，用S缓冲器清洗蠕虫。将它们转移到 FITC-德克斯特兰补充板和无 FITC-dextran 的 NGM 板中，并在一夜之间孵化板。

第二天，用S缓冲器清洗蠕虫，并允许它们在新的NGM agar板中爬行一小时。在黑色96井平底板的每口井中加入50微升4%甲醛，并将大约50只蠕虫转移到每口井中。 1 至 2 分钟后，取出所有甲醛，并在每口井中加入 100 微升安装介质。

-甲醛是一种有毒化学物质，应小心处理。