Рассечение сердца: Метод наблюдения за сердечной развитием зебры

- Сердце зебры состоит из четырех камер, синусового веноза, атриум, желудочек и луковичный артериоз. Он расположен на передней стороне брюшной полы между оперкулом и грудным поясом, часть скелетной системы, которая поддерживает грудной плавник. Чтобы вскрыть сердце, поместите усыпляемую фиксированную рыбу в чашку Петри, содержащую фосфатно-буферизированный солевой раствор для поддержания постоянного рН рыб.

Держите голову рыбы с миппами между глазами и жабры. Используя микросхистор, разрезать жабры, через передний живот, а затем вертикально, соединяя первые два разреза. С острым пинцетом, удалить грудной плавник и основной грудной пояс, чтобы выявить серебряный перикард, мембрана, которая покрывает сердце. Удалить перикардий с типсами, чтобы сделать сердце видимым.

Далее поместите типсы под атриум и вычерпывать сердце из полости тела. Держите сердце с типсами, и использовать еще один типс для удаления нежелательных тканей, присутствующих за пределами сердца. В следующем протоколе, мы будем вскрывать сердце от различных размеров рыбы для изображения его развития в течение жизни рыбы.

- Присвойте каждой рыбе комбинацию числовой буквы, чтобы позволить отдельной рыбе и полученному расчленению сердца отслеживаться для более длительного анализа. Введите все данные, включая все измерения, в электронную таблицу и организуйте на основе этих меток. Перед вскрытием, этикетка ПЦР трубки полосы с назначенным номером отслеживания и заполнить трубки с PBT или другим решением, подходящим для дальнейшего анализа. пинхолдер, удалить грудные мышцы и плавники из тела, чтобы выявить сердце.

- Постоянное движение типсов во время вскрытия может вызвать токи в ПБТ, которые перемещают рыбу. Это особенно проблематично для мелких рыб. Это, микроигла должна быть использована для удаления грудных мышц и плавника и открыть полость тела.

- Используйте типсы, чтобы аккуратно зачерпнуть сердце из полости из-под атриума. Если рыба содержит флуоресцентный сердечный маркер, используйте флуоресцентные области для вскрытия и проверить удаление сердца флуоресцентной. Как только сердце удаляется из полости, используйте миппы, чтобы держать сердце и микроиглу, чтобы удалить дополнительные некардиальной ткани и эпикардической подкладки.

Для рыб длиной более 12 миллиметров с помощью пружинных микросхем, сделайте три разреза. Во-первых, сделайте поперечный разрез через жабры. Во-вторых, сделайте еще один поперечный разрез на передней части живота. И в-третьих, сделайте сагиттальную разрез на брюшной стороне, соединяющей оба поперечных разреза.

Удалить эту перикардиарной ткани. И сердце станет видимым. Используйте микро ножницы, чтобы сократить артерии подключены к луковичный артериоз расположен выше сердца. Как только эта артерия будет разрезана, поместите кончики типсов под атриум и используйте типсы, чтобы вычерпыть сердце из полости. Если есть дополнительные ткани, которые приходят с сердцем, это нормально, так как это может быть удалено позже.

- Будьте осторожны с расположением атриума при использовании альтернативной техники, так как он может быть легко поврежден. Если есть дополнительные ткани, которые поставляется с сердцем, это хорошо и может быть очищен после.

- Как только сердце удаляется из полости, используйте два типса, чтобы держать сердце и удалить дополнительные ткани или одну пару типсов, чтобы держать сердце и микроиглы, чтобы удалить дополнительные ткани noncardiac.