門脈注射:肝臓への癌転移を研究する方法

肝臓は、ほとんどの癌の二次転移部位である。転移を研究するために、私たちは、体の他の部分から肝臓に血液を運ぶ門脈に癌細胞を注入することができます。

麻酔をかけられたマウスを、サピーヌの位置に置くことから始めます。葉白キシジンとアルコールを使用して裸腹部の領域を殺菌します。マイクロシザーを使用して、内臓を損傷することなく、動物の左側の肋骨と4番目の乳腺との間に切開を行います。

切開部の近くに滅菌生理に浸したガーゼパッドを置きます。滅菌綿棒を使用して腸をそっと引き出し、門脈を明らかにし、ガーゼの上に置きます。乾燥を防ぐためにガーゼパッドで臓器を覆います。蛍光標識された癌細胞を含む注射針を門脈に挿入し、ゆっくりと細胞を注入する。数秒間待って細胞の逆流を防ぎ、針を慎重に取り除きます。

注射後、癌細胞は通常、副弦波で移動し、転移するために門脈の近くの肝細胞に侵入する。臓器を腹腔に戻し、切開を縫合する。このプロトコルの例では、肝臓への乳がん転移を研究するために、門脈注射を行います。

処置を始める前に、10%の漂白剤で外科領域のすべての表面を拭き取る。注射の1時間前に、痛みの管理のために100マイクロリットルの鎮痛を皮下に8〜15週齢のBALB/c雌マウスを治療する。動物の目に軟膏を塗ります。次に、マウスをsupineの位置に置き、つまみつまみによって適切なレベルの沈着を確認します。

次に、尾部を含む動物の外科的および周囲の領域を消毒し、3つの交互の滅菌ガーゼ浸し2%クロルヘキシジンワイプと2つのアルコール準備パッドワイプを使用する。最後のクロルヘキシジンワイプの後、滅菌メスを使用して、口の左側の中央値と矢状平野の間の皮膚に1インチの切開を行い、肋骨のすぐ下から始まり、4番目のうなみの乳腺の上で終わり、続いて腹膜を通して同様の1インチの切開を行います。

さて、腫瘍細胞を数回上下にピペットして細胞溶液を再懸濁し、25マイクロリットルの取り外し可能な針注射器をロードし、10マイクロリットルの細胞を有する32ゲージ針を装備した。細胞が針の先端にあり、プランジャーが注射に適した量になるまでプランジャーを押し下げてください。注射針の外側を滅菌アルコールパッドで拭き取り、外部腫瘍細胞を除去し、針の棒を避けるように注意してください。

次に、切開部の中央部側の皮膚および腹膜内層を鉗子で保持し、滅菌綿棒を用いて、大腸および小腸を滅菌生理に浸した滅菌ガーゼに慎重に移動させる。生理食い物に浸したガーゼで内臓を覆い、内部の水分と無菌性を維持します。門脈が見える場合は、助手に腸を静かに保持して、無菌綿棒で門脈を露出させ、針を門脈に3〜5ミリメートル挿入し、肝臓の約10ミリメートル下に5度未満の角度でベベルを上に置く。

腫瘍細胞の全容をゆっくりと注入し、血液が静脈から腫瘍細胞の逆流を避けるために数秒間針頭を通り過ぎるようにする。

適切な視覚化、アクセス、およびポータル静脈への注入が不可欠であるため、注射を試みる前に針に関連してポータル静脈の位置が十分であることを確認するために時間がかかる。

すべての細胞が注入されたら、無菌綿先端アプリケータで静脈に穏やかな圧力をかけながら針を取り除いた。次に、新しい滅菌綿の先端アプリケーターを使用して、注入部位上に0.5〜1センチメートルの平角ガーゼを保持します。

5分後、慎重にガーゼを持ち上げて静脈閉鎖を評価します。血流が完全に停止したら、ガーゼを取り除き、腸を腹腔に戻します。単純な縫合パターン、連続的な縫合パターン、または中断された縫合パターンを使用して、滅菌4-0のビクリル縫合糸およびテーパーで腹膜裏地を閉じます。

同様に皮膚を閉じた後、切開部位に沿って100マイクロリットルの局所麻酔薬を注入し、続いて0.5ミリリットルの滅菌生理食塩水を皮下送達する。