Portal ven injektion: En metod för att studera cancer metastasering till levern

Levern är en sekundär metastaserad plats för de flesta cancerformer. För att studera metastasering kan vi injicera cancerceller i portal venen, som bär blod från andra delar av kroppen till levern.

Börja med att placera en bedövad mus i en supine position. Sterilisera det nakna bukområdet med klorhexidin och alkohol. Använd mikroscissorer, gör ett snitt mellan revbenen och den fjärde bröstkörteln på djurets vänstra sida utan att skada inre organ.

Placera en gasvävsdyna indränkt i steril saltlösning nära snittet. Dra försiktigt ut tarmarna med en steril bomullspinne för att avslöja portal venen och placera den på gasväven. Täck organen med gasvävsdynan för att förhindra torkning. För in sprutnålen som innehåller fluorescerande märkta cancerceller i portal venen och injicera långsamt cellerna. Vänta några sekunder för att förhindra cellernas baksida och ta försiktigt bort nålen.

Efter injektionen reser cancerceller vanligtvis i sinusoiden och invaderar hepatocyterna nära portaltriaden för att metastasera. Placera organen tillbaka i bukhålan och suturera snittet. I exempelprotokollet kommer vi att utföra portal ven injektion för att studera bröstcancer metastasering till levern.

Innan du påbörjar proceduren, torka av alla ytor i operationsområdet med 10% blekmedel. En timme före injektionerna, behandla 8 till 15 veckor gamla BALB/c kvinnliga möss med 100 mikroliter analgesi subkutant för smärtlindring. Applicera salva på djurets ögon. Placera sedan musen i supine-positionen och bekräfta lämplig sederingsnivå genom tånypa.

Desinficera sedan djurets kirurgiska och omgivande områden, inklusive svansen, med tre alternerande sterila gasvävsdränkta 2% klorhexidinservetter och två alkoholpreparatservetter. Efter den sista klorhexidinservetten, använd en steril skalpell för att göra ett 1 tums snitt i huden mellan median- och sagittalslätterna på vänster sida av munnen, med början strax under revbenen och slutar över den fjärde inguinala bröstkörteln, följt av ett liknande ett tums snitt genom peritoneum.

Pipett tumörcellerna upp och ner flera gånger för att återanvända celllösningen och ladda en 25 mikroliter avtagbar nålspruta, utrustad med en 32 gauge nål med 10 mikroliter av cellerna. Tryck ner kolven tills cellerna är på nålens spets och kolven är på lämplig volym för injektion. Torka utsidan av den laddade nålen med en steril alkoholplatta för att ta bort eventuella yttre tumörceller, var noga med att undvika nålstick.

Sedan, hålla huden och peritonealfoder av mediansidan av snittet med tången, använd en steril bomullspinne för att försiktigt flytta de stora och tunntarmen på en steril gasväv indränkt i steril saltlösning. Täck de inre organen i den saltlösningsdränkta gasväven för att bibehålla den inre fukten och steriliteten. När portal venen är synlig, ha en assistent försiktigt hålla tarmarna ur vägen för att exponera portal venen med den sterila bomullspinnen och sätt in nålen 3 till 5 millimeter i portal venen, cirka 10 millimeter under levern i mindre än 5 graders vinkel, avfasa sidan uppåt.

Injicera långsamt hela volymen av tumörceller, så att blodet kan flöda förbi nålhuvudet i flera sekunder för att undvika ett bakflöde av tumörcellerna ur venen.

Eftersom korrekt visualisering, åtkomst och injektion i portal venen är viktigt, ta dig tid att se till att placeringen av portal venen i förhållande till nålen är tillfredsställande innan du försöker injektionen.

När alla celler har injicerats, tog bort nålen samtidigt som det applicerade försiktigt tryck på venen med en steril bomullsspetsapplikator. Använd sedan en ny steril bomullsspetsapplikator för att hålla en 0,5 till 1 centimeter fyrkantig bit hemostatisk gasväv över injektionsstället.

Efter fem minuter lyfter du försiktigt gasväven för att bedöma venstängningen. När blodflödet har upphört helt, ta bort gasväven och sätt tillbaka tarmarna i bukhålan. Använd ett enkelt, kontinuerligt eller avbrutet suturmönster, stäng det peritoneala fodret med en steril 4-0 vicryl sutur och avsmalning.

Efter att ha stängt huden på samma sätt, injicera 100 mikroliter lokalbedövning längs snittplatsen, följt av subkutan leverans av 0,5 milliliter steril saltlösning.