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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Separating Protein with SDS-PAGE
  • 00:00Overview
  • 00:29Principal Components of the SDS-PAGE System
  • 01:55SDS-PAGE Sample Preparation
  • 03:40Loading and Running the Gel
  • 05:18Applications
  • 07:07Summary

Separação de Proteína com SDS-PAGE

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Overview

Sulfato de sulfato de sódio Poli-Acrilamida Gel Electrophoresis, ou SDS-PAGE, é uma técnica amplamente utilizada para separar misturas de proteínas com base em seu tamanho e nada mais. SDS, um detergente aniônico, é usado para produzir uma carga uniforme em todo o comprimento das proteínas que foram linearizadas. Primeiro carregando-os em um gel feito de poliacrilamida e, em seguida, aplicando um campo elétrico ao gel, as proteínas revestidas de SDS são então separadas. O campo elétrico atua como a força motriz, atraindo proteínas revestidas de SDS em direção ao ânodo com proteínas maiores movendo-se mais lentamente do que pequenas proteínas. Para identificar proteínas por tamanho, padrões proteicos de tamanho conhecido são carregados junto com amostras e executados sob as mesmas condições.

Este vídeo apresenta uma introdução ao SDS-PAGE explicando primeiro a teoria por trás dele e, posteriormente, demonstrando seu procedimento passo-a-passo. Vários parâmetros experimentais, como a concentração de poliacrilamida e a tensão aplicada ao gel são discutidos. Métodos de coloração a jusante como Coomassie e manchas de prata são introduzidos, e variações do método, como a eletroforese de gel 2D são apresentadas.

Procedure

O SDS-PAGE é uma técnica usada por muitos pesquisadores para separar misturas de proteínas por tamanho. A conclusão bem sucedida dessa técnica é um primeiro passo essencial para muitos métodos de análise de proteínas, como a imunoblotação. Por si só, é uma ferramenta útil na avaliação do tamanho da proteína e da pureza. Para entender a técnica SDS-PAGE, você deve primeiro entender seus componentes-princípio. SDS-PAGE significa Sulfato de Sódio Poli-Acrilamida Gel Ele…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Separating Protein with SDS-PAGE. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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