JoVE Science Education
Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Separating Protein with SDS-PAGE
  • 00:00Overview
  • 00:29Principal Components of the SDS-PAGE System
  • 01:55SDS-PAGE Sample Preparation
  • 03:40Loading and Running the Gel
  • 05:18Applications
  • 07:07Summary

הפרדת חלבון עם SDS-PAGE

English

Share

Overview

נתרן דודסיל סולפט פולי-אקרילאמיד ג’ל אלקטרופורזה, או SDS-PAGE, היא טכניקה נפוצה להפרדת תערובות של חלבונים בהתבסס על גודלם ולא שום דבר אחר. SDS, חומר ניקוי אניוני, משמש לייצור מטען אחיד לאורך חלבונים שהיו ליניאריים. על ידי טעינתם תחילה לתוך ג’ל עשוי polyacrylamide ולאחר מכן החלת שדה חשמלי על הג’ל, חלבונים מצופים SDS מופרדים לאחר מכן. השדה החשמלי משמש ככוח המניע, ומושך את החלבונים מצופים SDS לכיוון האנודה עם חלבונים גדולים יותר הנעים לאט יותר מחלבונים קטנים. על מנת לזהות חלבונים לפי גודל, תקני חלבון בגודל ידוע נטענים יחד עם דגימות ומפעלים באותם תנאים.

סרטון זה מציג מבוא ל- SDS-PAGE על ידי הסבר תחילה התיאוריה שמאחוריו ולאחר מכן הדגמת הליך שלב אחר שלב שלה. פרמטרים ניסיוניים שונים, כגון ריכוז polyacrylamide ומתח להחיל על הג’ל נדונים. שיטות הכתמה במורד הזרם כמו Coomassie וכתמי כסף מוצגים, וריאציות של השיטה, כמו אלקטרופורזה ג’ל 2D מוצגים.

Procedure

SDS-PAGE היא טכניקה המשמשת חוקרים רבים להפרדת תערובות של חלבונים לפי גודל. השלמה מוצלחת של טכניקה זו היא צעד ראשון חיוני עבור שיטות רבות של ניתוח חלבון, כמו אימונובלוטינג. כשלעצמו, זהו כלי שימושי בהערכת גודל החלבון והטוהר. כדי להבין את טכניקת SDS-PAGE, עליך להבין תחילה את מרכיביה …

Disclosures

No conflicts of interest declared.

Transcript

Tags

Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Separating Protein with SDS-PAGE. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

Related Videos