Trasformazione batterica: il metodo dello shock termico

La trasformazione è il processo che si verifica quando una cellula ingerisce DNA estraneo dall’ambiente circostante. La trasformazione può avvenire in natura in alcuni tipi di batteri. In biologia molecolare, la trasformazione viene riprodotta artificialmente in laboratorio attraverso la creazione di pori nelle membrane cellulari batteriche. Le cellule batteriche che sono in grado di prendere il DNA dall’ambiente sono chiamate cellule competenti. In laboratorio, le cellule batteriche possono essere rese competenti e il DNA successivamente introdotto con una procedura chiamata metodo dello shock termico.

La trasformazione dello shock termico utilizza un ambiente ricco di calcio fornito dal cloruro di calcio per contrastare la repulsione elettrostatica tra il DNA plasmidico e la membrana cellulare batterica. Un improvviso aumento della temperatura crea pori nella membrana plasmatica dei batteri e consente al DNA plasmidico di entrare nella cellula batterica. Questo video passa attraverso una procedura passo-passo su come creare batteri chimicamente competenti, eseguire la trasformazione dello shock termico, placcare i batteri trasformati e calcolare l’efficienza della trasformazione.