Uno dei principali vantaggi di lavorare con i pesci zebra (Danio rerio) è che la loro genetica può essere facilmente manipolata mediante microiniezione di embrioni in fase iniziale. Usando questa tecnica, le soluzioni contenenti materiale genetico o costrutti di abbattimento vengono consegnate nei blastomeri: le cellule embrionali sedute in cima al tuorlo dell’uovo appena fecondato. La consegna nel citoplasma si ottiene attraverso l’iniezione diretta nel blastomero o tramite movimenti citoplasmatici naturali che si verificano dopo che una soluzione è stata iniettata nel tuorlo. Le manipolazioni genetiche di successo sono solitamente seguite dalla quantificazione dei fenotipi embrionali al fine di chiarire i meccanismi genetici dello sviluppo.

Questo video fornirà un’introduzione all’esecuzione di microiniezioni in embrioni di zebrafish. La discussione inizia con una revisione degli strumenti essenziali per la tecnica, tra cui l’apparato di iniezione e il microiniettore, che controlla il movimento del fluido con impulsi di pressione dell’aria. Successivamente, vengono dimostrati importanti passaggi preparatori, come il versamento di piastre di agar per stabilizzare gli embrioni durante l’iniezione e la calibrazione dell’apparato di microiniezione. La procedura di iniezione viene quindi presentata insieme a suggerimenti su quando e dove devono essere eseguite le iniezioni. Infine, vengono discusse le applicazioni della tecnica di microiniezione, tra cui la sovraespressione genica tramite iniezione di mRNA, il silenziamento genico mediante somministrazione di oligonucleotidi morfolino antisenso e la generazione di zebrafish transgenico utilizzando DNA plasmidico appositamente ingegnerizzato.