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Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick
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JoVE Science Education Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick
Zebrafish Microinjection Techniques
  • 00:00Overview
  • 01:01Components of the Injection Apparatus
  • 02:09Preparing for Microinjections
  • 03:59Preparing Embryos for Injection
  • 04:47Injecting Zebrafish Embryos
  • 06:06Applications
  • 07:40Summary

Técnicas de microinyección en el pez cebra

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Overview

Una de las principales ventajas de trabajar con el pez cebra (Danio rerio) es que su genética puede ser fácilmente manipulado por microinyección de embriones de etapa temprana. Usando esta técnica, soluciones que contengan construcciones de precipitación o material genéticas se entregan en los blastómeros: las células embrionarias sentado encima de la yema del huevo recién fecundado. Entrega en el citoplasma se realiza mediante inyección directa en el blastómero, o a través de movimientos citoplásmicos naturales que se producen después de que una solución se inyecta en la yema de huevo. Cuantificación de fenotipos embrionarias siguen generalmente exitosa manipulación genética para dilucidar los mecanismos genéticos del desarrollo.

Este video le proporcionará una introducción a la realización de microinyecciones en embriones de pez cebra. La discusión comienza con una revisión de las herramientas esenciales para la técnica, incluyendo el aparato de inyección y el microinyector, que controla el movimiento de fluidos con pulsos de presión de aire. Siguientes, importantes pasos preparatorios se han demostrado como el verter de las placas de agar para estabilizar los embriones durante la inyección y calibración de los aparatos de microinyección. Luego se presenta el procedimiento de inyección junto con consejos sobre dónde y cuándo se deben realizar las inyecciones. Finalmente, se discuten las aplicaciones de la técnica de microinyección, incluyendo sobreexpresión de genes vía inyección de mRNA, por entrega de oligonucleótidos antisentido morfolino y la generación de pez cebra transgénico utilizando especialmente el silenciamiento del gen diseñado el DNA plasmídico.

Procedure

Microinyección de embriones de pez cebra permite a los investigadores a soluciones directamente en el desarrollo animal, con el fin de estudiar la función genética y dinámica de desarrollo. Se utilizan con frecuencia los embriones desde la fase de 1 a 4 células de inyección. Porque hay membranas de separación de las células y la yema de huevo en esta primera etapa, soluciones que se inyecta en una célula o en la yema se extenderán uniformemente en todo el organismo. Mediante la microinyección, genes …

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Zebrafish Microinjection Techniques. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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