Analisi del ciclo cellulare

Il ciclo cellulare si riferisce all’insieme di eventi attraverso i quali una cellula cresce, replica il suo genoma e alla fine si divide in due cellule figlie attraverso il processo di mitosi. Poiché la quantità di DNA in una cellula mostra cambiamenti caratteristici durante il ciclo, le tecniche note come analisi del ciclo cellulare possono essere utilizzate per separare una popolazione di cellule in base alle diverse fasi del ciclo cellulare in cui si trovano, in base al loro diverso contenuto di DNA.

Questo video coprirà i principi alla base dell’analisi del ciclo cellulare tramite colorazione del DNA. Esamineremo un protocollo generalizzato per eseguire questa colorazione utilizzando bromodeossiuridina (BrdU, un analogo della timidina incorporato in filamenti di DNA appena sintetizzati) e ioduro di propidio (PI, un colorante del DNA che macchia tutto il DNA), seguito dall’analisi delle cellule colorate con citometria a flusso. Durante la citometria a flusso, una sospensione a singola cellula di cellule etichettate fluorescentemente viene fatta passare attraverso uno strumento con un raggio laser e viene letta la fluorescenza di ciascuna cellula. Discuteremo quindi come interpretare i dati dai grafici a dispersione citometrica a flusso e, infine, esamineremo alcune applicazioni di questa tecnica.