Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Cell Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

מבוא למוות בתא

Overview

נמק, אפופטוזיס ומוות תאים אוטופגיים הם כל הדרכים שבהן תאים יכולים למות, ומנגנונים אלה יכולים להיגרם על ידי גירויים שונים, כגון פגיעה בתא, רמות תזונתיות נמוכות או חלבוני איתות. בעוד נמק נחשב לצורה "מקרית" או בלתי צפויה של מוות תאי, קיימות ראיות לכך שאפופטוזיס ואוטופגיה מתוכנתים ו"מתוכננים "על ידי תאים.

בסרטון היכרות זה, JoVE מדגיש תגליות מפתח הנוגעות למוות תאים, כולל עבודה אחרונה שנעשתה בתולעים שעזרו לזהות גנים המעורבים באפופטוזיס. לאחר מכן אנו חוקרים שאלות שנשאלו על ידי מדענים שחוקרים מוות תאי, שחלקם בוחנים מסלולי מוות שונים ואת האינטראקציות שלהם. לבסוף, נדונות מספר שיטות להערכת מוות תאי, ואנו מציינים כיצד חוקרים מיישמים טכניקות אלה בניסויים שלהם כיום.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

באופן פרדוקסלי, מוות תאי עוזר לעצב את חייו של אורגניזם. בדיוק כמו כל אורגניזם שלם, תאים יכולים למות כתוצאה מהזדקנות, עקב פציעה בשוגג, או בעקבות חדירת פתוגן תא יכול להקריב את עצמו כדי למנוע את התפשטות הזיהום. בנסיבות אלה, תאים יכולים לעקוב אחר נתיבי מוות שונים כמו אפופטוזיס, אוטופגיה או נמק. כל הסוגים הללו מציגים מאפיינים מורפולוגיים ספציפיים. אפופטוזיס או מוות תאי מתוכנת מוביל ממברנה "blebbing" ופיצול גרעיני. Autophagy, אשר מוסדר גם, מוביל להיווצרות של vacuoles גדול מקיף רכיבים סלולריים. לבסוף, נמק, שהוא "לא מתוכנן" או מקרי, מסתיים בתזה של התא.

סרטון זה ידון בתגליות חשובות שהובילו לזיהוי מסלולים אלה, יחקור שאלות שהחוקרים עדיין שואלים על מוות תאים, ידון בכלים שבהם הם משתמשים כדי לענות עליהם, ולבסוף לסקור כמה ניסויים לדוגמה.

ראשית, בואו נסקור כמה חוקרים מרכזיים שעזרו לפענח נתיבי מוות שונים של תאים.

מונחים מודרניים המשמשים לתיאור נתיבים אלה יכולים להיות נעוצים בהיפוקרטס, רופא ביוון העתיקה. הוא השתמש במונח אפופטוזיס, שפירושו "נפילה", כדי לתאר עצם "גריסה" שנצפו בעקבות שבר. בבואו לעידן המודרני, האזכור הבולט הראשון של "נמק" התרחש בשנת 1859, כאשר רודולף Virchow - באוסף שלו בשם פתולוגיה תא- השתמש במונח זה כדי לתאר "התמוטטות רקמות מתקדמת".

עם התקדמות במיקרוסקופיה וההסטולוגיה בעשור שלאחר מכן, בשנת 1877 הצליחו קרל וייגרט ויוליוס כהנהיים לחקור נמק ברמה התאית. הם סיפקו תובנה על התכונות המורפולוגיות הקשורות לסוג זה של מוות, כמו אובדן גרעינים.

כמעט 70 שנה לאחר מכן, כריסטיאן דה דובה גילה "אוטופגיה", תהליך שבו רכיבים תאיים נבלעים ומתפרקים על ידי אברונים הקשורים לממברנה הנקראים אוטופגוזומים, אשר מתמזגים עם סוג אחר של אברונים - ליזוזומים - כדי להרוס עוד יותר את תוכנם. כעת אנו יודעים כי אוטופגיה למעשה ממלאת תפקיד כפול בתא, או להקל על הישרדות או לגרום למוות.

בשנת 1972, ג'ון קר, א.ר. קארי ואנדרו ווילי הבחינו בסוג אחר של מוות תאי עם מורפולוגיה מוזרה. מכיוון שתהליך זה כלל חלקים "נופלים" של תאים מתים, הם נתנו לו את השם היווני העתיק אפופטוזיס. מאוחר יותר, אפופטוזיס הוכר כצורה של "מוות תאי מתוכנת" בשנת 1977, כאשר H. R. הורביץ וג'ון סולסטון למדו פיתוח C. elegans. הם הבחינו כי תאים ספציפיים יעברו אפופטוזיס בו זמנית בתולעים שונות.

מכיוון שזה קרה בשלב מוקדם במהלך ההתפתחות, הוא רמז כי גנים עשויים להנחות אפופטוזיס. השערה זו אושרה על ידי קבוצתו של הורביץ בשנות השמונים, כאשר הם הבחינו כי תאים עם מוטציות בגנים מסוימים של ריד או "C. elegans death " לא מתו במהלך התפתחות התולעים האלה. מאוחר יותר, הורביץ הראה כי הגן קד-3 מקודד אנזים משפיל חלבון הנקרא קזפז. עכשיו, אנחנו יודעים שיש כמה קספסים, והם ממלאים תפקידים מרכזיים במוות תאים.

התפתחויות אלה בשדה המוות התאי פתחו כבישים חדשים לחוקרים לחקור. בואו נסתכל על כמה מהם.

תמיד היה עניין לגלות אילו גורמים גורמים למוות בתאים. כדי לזהות אותם, חוקרים חושפים כיום תאים לקרינה, כימיקלים ומולקולות איתות, ולאחר מכן מחפשים שינויים במידת המוות או בסוגו.

מדענים אחרים מעוניינים לפרט את המסלולים הביוכימיים המעורבים בכל מנגנון מוות של תאים. נכון לעכשיו, אנו יודעים כי אפופטוזיס עוקב אחר מסלול שבו כספיות הם אנזימי המפתח, ואילו autophagy כרוך חלבונים הדרושים להיווצרות autophagosome. עם זאת, ישנם רכיבים במסלולים אלה שאינם ידועים, וחוקרים מנסים למצוא דרכים להסביר אותם. בנוסף, חוקרים חוקרים גם אם מתרחשת "crosstalk" בין מסלולי מוות תאים. אם crosstalk קיים, אז אותו אות יכול לקחת בחשבון אפופטוזיס, כמו גם autophagy.

לבסוף, תחום מחקר פופולרי עוסק בהבנה מדוע תאים מסוימים – כמו תאים סרטניים – הופכים לבני אלמוות. מדענים מחפשים כל הזמן מוטציות בתאים סרטניים, ובוחנים אם מישהו מהם משפיע על גורמי קידוד גנים המעורבים בנתיבי מוות.

כל אלה הן שאלות מסובכות, אבל למרבה המזל לחוקרים יש מגוון כלים העומדים לרשותם כדי לענות עליהן.

בדיקת כחול טריפן הוא כלי סינון נפוץ כדי להעריך את ההשפעה של תרכובת על מוות תאים. ההסתמכות מסתמכת על כתם שאינו יכול להיכנס לתאים חיים, שכן הם מציבים "ממברנות סלקטיביות", אך יכולים להיכנס בקלות לתאים מתים מכיוון שהממברנות שלהם "נקרעות". מעש זה מזהה מוות תאי, אך אינו מצליח לאתר את מסלול המוות הספציפי של התא.

לכן, מדענים עיצבו טכניקות כמו עשיות פעילות קספאס. מכיוון שמקפאסים מופעלים במהלך אפופטוזיס, מדענים יכולים להוסיף מצעים לאנזימים האלה שפלואורסצים כאשר הם מופעלים על ידי כספיות. זה עוזר בזיהוי של תאים אפופטוטיים.

באופן דומה, פיצול DNA שקורה במהלך אפופטוזיס ניתן לזהות בקלות באמצעות בדיקת TUNEL, אשר מסתמך על ריאגנטים המתייגים את הקצוות "חתוך" של DNA פגום. מכיוון ששיטה זו קלה יחסית לביצוע, היא מהווה מטען נפוץ בתחום.

כאשר מדענים רוצים לקבוע את מנגנון המוות התאי המתרחש באוכלוסייתם, הם יכולים לזווג כתמי סיפוח V ו propidium יודיד (PI) עם ניתוח ציטומטריית זרימה. Annexin V נקשר שאריות פוספטידילסרין בממברנה, ואילו PI נכנס דרך הממברנות הפגומות כדי לקשר עם DNA. על ידי לימוד הנתונים המתקבלים, מדענים יכולים להפריד תאים העוברים נתיבי מוות שונים.

לבסוף, מדענים יכולים להשתמש בהדמיית תאים חיים כדי לצפות בתהליך המוות של התא בזמן אמת. זוהי טכניקה מקיפה שניתן להשתמש בה לזיהוי תאים אוטופגיים, נמקיים או אפופטוטיים המבוססים על תכונות מורפולוגיות ייחודיות.

כפי שראיתם, ישנן מספר שיטות לזיהוי מוות תאים, חלקן אינן ספציפיות, אחרות שיכולות לסייע בזיהוי תאים אפופטוטיים, וחלקן מבחינות בין מסלולים שונים.

עכשיו, בואו נראה איך מדענים משתמשים בטכניקות האלה כדי לחקור יותר על מוות של תאים.

דיאטה ממלאת תפקיד חשוב בבריאות, ועשויה להשפיע על מוות תאים ברקמות שונות. בבדיקה במבחנה זו, החוקרים חשפו נוירוני עכבר לחומצה פלמיטית, חומצת שומן רוויה הנמצאת הן במוצרי חלב והן בבשר, ולאחר מכן השתמשו בבדיקת קספז כדי להעריך אפופטוזיס. הם גילו שתאים שטופלו בחומצה פלמיטית הדגימו פעילות קזאפאז מוגברת ומוות תאים.

חוקרים אחרים משתמשים בתרופות אלה כדי לקבוע כיצד תרופות גורמות למנגנוני מוות שונים. כאן, עכברים מהונדסים עם תאים סרטניים בעלי תווית פלואורסצנטית הוזרקו עם דוקסורוביצין, תרופה נגד סרטן. לאחר מכן, מדענים דימו תאים בבעלי חיים, ועל ידי חיפוש שינויים במורפולוגיה של תאים סרטניים, קבעו כי טיפול תרופתי עורר הן אפופטוזיס והן נמק.

לבסוף, כמה מדענים חוקרים אם מוות תאים יכול להיות הפוך. בניסוי זה, החוקרים חשפו תאים סרטניים אנושיים לאתנול, ואישרו באמצעות מגוון של מקרים כי טיפול זה גרם להם לצאת למסלול אפופטוזיס. לאחר שטיפת האתנול, התאים המושפעים הצליחו להתאושש אפופטוזיס באמצעות תהליך שנקרא "הרדמה". זה סיפק תובנה כיצד סרטן יכול לחזור לאחר טיפול תרופתי.

הרגע צפית בהקדמה של ג'וב למסלולי המוות של התאים. סרטון זה סקר את ההיסטוריה העשירה של מחקר מוות תאים – מימי קדם ועד המאה ה-20 – ואז דן בכמה שאלות עכשוויות. הסברנו גם שיטות פופולריות כדי לעצור מוות תאים, והדגמנו כיצד טכניקות אלה משמשות כדי להבין טוב יותר את הקשר בין סביבה, מחלות ומוות תאים. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter