Medicine
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Gerar um modelo de câncer de mama metastático murino ortotópico e realizando a mastectomia Radical murino
Chapters
Summary November 29th, 2018
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Apresentamos um modelo de câncer de mama murino ortotópico e modelo de mastectomia radical com tecnologia de bioluminescência para quantificar a carga do tumor para imitar a progressão do câncer de mama humano.
Transcript
Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo do câncer de mama sobre como imitar a progressão e o tratamento do câncer de mama humano em um modelo de camundongos. A principal vantagem deste modelo de câncer de mama de camundongos é que ele tem uma alta taxa de tumorgênese após a implantação ortotópica e uma baixa taxa de recidiva local após a mastectomia. Comece confirmando a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato fêmea anestesiado e gravando os membros do animal em uma placa cirúrgica.
O uso de cotonetes estéreis esterilizam a área cirúrgica com clorexidina, iodo e 75% de etanol. E faça uma incisão de pele de cinco milímetros no meio da parede do peito anterior. Em seguida, levante o lado direito da pele adjacente à incisão e use uma tesoura de microdisseção estéril para separar a pele da parede do peito.
Inverta a pele para expor o número certo dois almofada de gordura mamária e use uma seringa de insulina de um mililitro equipada com uma agulha calibre 28,5 para injetar cuidadosamente 20 microliters de suspensão celular cancerosa através da ferida na almofada de gordura. Segure a agulha dentro da almofada de gordura por cinco segundos para permitir que a mistura de proteína de células cancerígenas gelatinosas se solidifique antes de remover a agulha, e feche a incisão com suturas nãoabsorbáveis de 5-0. Em seguida, coloque o animal em uma gaiola limpa com monitoramento até a recumedência total.
Para realizar a mastectomia oito dias após a inoculação do câncer, prepare o camundongo para cirurgia como acabou de demonstrar, e faça uma incisão de pele de cinco milímetros dois milímetros à esquerda da cicatriz cirúrgica da inoculação da célula cancerosa. Estenda a incisão em direção à raiz do membro dianteiro para remover o tumor, e a pele, incluindo a cicatriz cirúrgica, e a lesão em contato com o tumor, e a bacia do linfonodo axilar em que normalmente não há linfonodos visíveis no momento da mastectomia. Em seguida, feche os defeitos da pele com suturas nãoabsorbáveis de 5-0 na forma de um Y.E devolva o animal à sua gaiola com monitoramento até a incumbência total.
Para quantificação de metástase pulmonar 21 dias após a inoculação injetar 150 miligramas por quilograma de IP D-Luciferin 15 minutos antes da eutanásia. E use uma tesoura mayo curva para abrir a pele e o peritônio no abdômen médio. Pressione o fígado até que o diafragma possa ser visualizado, e corte o diafragma e as costelas bilaterais de caudad a cefálica.
Gire a parede do tórax anterior para expor os pulmões e levante os pulmões para identificar o esôfago torácico, que parece um cordão ligando os pulmões à coluna. Corte o esôfago com tesoura de microdisseção e use fórceps para puxar os pulmões bilaterais e o coração em direção ao caudad. Em seguida, corte a traqueia e os principais vasos para o ápice pulmonar no cephalad e coloque os pulmões em uma placa de Petri de 10 centímetros para imagens bioluminescentes.
Use a tesoura para remover o coração do tecido pulmonar. A partir de cerca de oito dias após a inoculação da célula cancerosa da almofada de gordura mamária, a bioluminescência nos pulmões é cada vez menor do que na lesão primária que reflete a carga tumoral primária em camundongos vivos. A medição do tamanho do tumor com pinças permite a estimativa do volume do tumor in situ.
Este modelo de mastectomia também permite o monitoramento da carga tumoral metastática em série sem ter que eutanásiar os animais. A carga tumoral das metástases pulmonares também pode ser quantificada por imagens ex vivo, mas a limitação é que os camundongos devem ser eutanizados. A sobrevivência do rato após o tratamento cirúrgico também pode ser monitorada como um ponto final clínico traduzível.
Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da área do câncer de mama explorarem não apenas o desenvolvimento de novos medicamentos, mas também a pesquisa sobre câncer de mama em geral.
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