Generazione di un modello di cancro al seno metastatico murino ortotopico ed eseguendo murino mastectomia radicale

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del cancro al seno su come imitare la progressione e il trattamento del cancro al seno umano in un modello di topo. Il vantaggio principale di questo modello di cancro al seno del topo è che ha un alto tasso di tumorigenesi dopo l’impianto ortotopico e un basso tasso di ricorrenza locale dopo la mastectomia. Inizia confermando la mancanza di risposta al dito del piedi in un topo femmina anestetizzato e toccando gli arti dell’animale su una tavola chirurgica.

Utilizzando tamponi di cotone sterilizza l’area chirurgica con clorexidina, iodio e 75% di etanolo. E fare un’incisione cutanea di cinque millimetri al centro della parete anteriore del torace. Quindi sollevare il lato destro della pelle adiacente all’incisione e utilizzare forbici sterili di microdisezione per staccare la pelle dalla parete toracica.

Invertire la pelle per esporre il cuscinetto grasso mammario numero due giusto e utilizzare una siringa per insulina da un millilitro dotata di un ago calibro 28,5 per iniettare con cura 20 microlitri di sospensione delle cellule tumorali attraverso la ferita nel cuscinetto grasso. Tenere l’ago all’interno del tampone grasso per cinque secondi per consentire alla miscela proteica delle cellule tumorali gelatinose di solidificarsi prima di rimuovere l’ago e chiudere l’incisione con suture sterili 5-0 non assorbibili. Quindi posizionare l’animale in una gabbia pulita con monitoraggio fino alla piena rimo clemenza.

Per eseguire la mastectomia otto giorni dopo l’inoculazione del cancro preparare il topo per l’intervento chirurgico come appena dimostrato, e fare un’incisione cutanea di cinque millimetri due millimetri a sinistra della cicatrice chirurgica dall’inoculazione delle cellule tumorali. Estendere l’incisione verso la radice dell’giaciglio anteriore per rimuovere il tumore, e la pelle, compresa la cicatrice chirurgica, e la lesione a contatto con il tumore, e il bacino linfonodo ascellare in cui in genere non sono presenti linfonodi visibili al momento della mastectomia. Quindi chiudere i difetti della pelle con suture sterili 5-0 non assorbibili a forma di Y.E riportare l’animale nella sua gabbia con monitoraggio fino a piena incumbenza.

Per la quantificazione della metastasi polmonare 21 giorni dopo l’inoculazione iniettare 150 milligrammi per chilogrammo di D-Luciferina IP 15 minuti prima dell’eutanasia. E usa forbici Mayo curve per aprire la pelle e il peritoneo al metà dell’addome. Premere il fegato fino a visualizzare il diaframma e tagliare il diaframma e le costole bilaterali dal caudad al cefalato.

Capovolgere la parete del torace anteriore per esporre i polmoni e sollevare i polmoni per identificare l’esofago toracico, che sembra una corda che collega i polmoni alla colonna vertebrale. Tagliare l’esofago con forbici a microdisezione e usare le forcep per tirare i polmoni bilaterali e il cuore verso il caudad. Quindi tagliare la trachea e i vasi principali all’apice polmonare al cefalato e posizionare i polmoni in una piastra di Petri di 10 centimetri per l’imaging bioluminescente.

Usa le forbici per rimuovere il cuore dal tessuto polmonare. A partire da circa otto giorni dopo l’inoculazione delle cellule tumorali del cuscinetto di grasso mammario, la bioluminescenza nei polmoni è più profonda e più piccola rispetto alla lesione primaria che riflette il peso tumorale primario nei topi vivi. La misurazione della dimensione tumorale con pinze consente di stimare il volume tumorale in situ.

Questo modello di mastectomia consente anche il monitoraggio seriale del carico tumorale metastatico senza dover eutanasiare gli animali. Il peso tumorale delle metastasi polmonari può anche essere quantificato mediante imaging ex vivo, ma la limitazione è che i topi devono essere eutanasiati. La sopravvivenza del topo dopo il trattamento chirurgico può anche essere monitorata come endpoint clinico traducibile.

Dopo il suo sviluppo questa tecnica ha spianato la strada ai ricercatori nel campo del cancro al seno per esplorare non solo il nuovo sviluppo di farmaci, ma anche la ricerca sul cancro al seno in generale.