Immunology and Infection
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Un metodo delle nanoparticelle d'argento per il miglioramento di sindrome di Atresia biliare nei topi
Chapters
Summary October 13th, 2018
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Questo articolo viene descritto in dettaglio un metodo basato su nanoparticelle d'argento per il miglioramento di sindrome di atresia biliare in un modello murino di atresia biliare sperimentale. Una solida comprensione del processo di preparazione del reagente e la tecnica di iniezione neonatale del mouse vi aiuterà a familiarizzare i ricercatori con il metodo utilizzato in studi di modello del mouse neonatale.
Transcript
Questi metodi possono aiutare a rispondere a domande chiave in atresia biliare. Di opinioni BA su malattia, patogenesi e trattamento. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la tecnica di iniezione neonatale del topo aiuterà i ricercatori a familiarizzare con il metodo per altri studi sul modello di topo neonatale.
Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia di BA come diverse nanoparticelle di significato Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul trattamento BA, può anche essere applicato ad altri sistemi come i modelli di topo neonatale della patogenesi di questo Generalmente nel modo in cui questo metodo lo farà perché le piccole dimensioni dei topi neonatale possono portare alla costruzione di un processo di iniezione. Per stabilire l'atresia biliare in un modello di topo, caricare il rotovirus rhesus in una siringa per insulina millilitro dotata di un ago calibro 29 e esettare per via intraperitoneale 1,2 volte 10 alle unità di formatura della 5a placca del virus in 20 microlitri del Modified Eagle Medium di Dulbecco per ogni neonato entro 24 ore dalla nascita. Quindi restituire i neonati alla madre per il monitoraggio quotidiano e la pesatura.
Quando gli animali neonatale iniziano a mostrare segni di ittero, caricare una siringa da un millilitro dotata di un ago calibro 29 con 50 microlitri di soluzione di collagene di nanoparticelle d'argento appena preparata per animale e utilizzare l'anulare per premere la gamba di un animale ittero obliquamente sulla coscia destra. Introdurre lentamente l'ago con un angolo di 15 gradi nel peritoneo e, una volta raggiunta la superficie del bordo inferiore del fegato, iniettare la miscela di collagene della nanoparticella d'argento. Quando tutta la miscela è stata iniettata, rimuovere lentamente l'ago e lasciare riposare l'animale per dieci minuti per consentire al collagene di solidificarsi e per impedire alla madre di leccare il sito di iniezione.
Quindi riportare i topi nelle loro gabbie per il monitoraggio quotidiano. Il giorno nove o dodici dopo l'inoculazione, sterilizzare l'addome superiore e inferiore con il 75% di etanolo e immobilizzare gli arti di un topo infetto. Aprire la pelle, il muscolo e il peritoneo lungo la linea mediana allo xifoide e utilizzare un batuffolo di cotone sterile per rimuovere il tratto gastrointestinale per esporre completamente il diaframma.
Inserire l'ago di una siringa per insulina da millilitro scaricata nel ventricolo sinistro del cuore e ritrarre lentamente lo stantuffo della siringa per ottenere il massimo volume di sangue. Trasferire il sangue in un tubo da 1,5 millilitri per un'incubazione di 30 minuti a temperatura ambiente e pelletare i globuli rossi mediante centrifugazione. Quindi raccogliere il siero per un'analisi successiva.
Per la colangiografia extraepatica, utilizzare un batuffolo di cotone per esporre completamente il fegato, la cistifellea e i dotti biliari extraepatici. Dopo aver fotografato la comparsa del fegato e dei dotti biliari al microscopio sezionante, utilizzare pinzole oftalmiche per afferrare delicatamente il fondo della cistifellea e inserire lentamente l'ago di una siringa millilitro carica di soluzione blu di metilene nella cavità della cistifellea. Afferrando l'ago con le pini, infondere lentamente 10-20 microlitri di blu di metilene.
Quando il colorante passa attraverso i dotti biliari extraepatici al giunone, ottenere un'altra fotografia del tessuto. Quindi, per la colorazione dell'ematossilina e dell'eosina, raccogliere il fegato da ogni animale per la fissazione notturna in formalina al 10%. La mattina seguente, incorporare i campioni in paraffina per la sessificazione, seguiti da reidratazione de-ceretta con serie di etanolo e colorazione ematossilina ed eosina secondo protocolli di analisi istopologica standard.
Rispetto ai topi di atresia biliari non trattati, gli animali trattati con nanoparticelle d'argento dimostrano una ridotta ittero e mantengono il loro normale peso corporeo. I livelli di metabolismo della bilirubina e transaminasi epatica scendono ai normali valori di controllo, suggerendo che le nanoparticelle d'argento migliorano notevolmente la funzione epatica. La colangiografia extraepatica con colorazione blu metilene conferma la pervietà del condotto biliare dopo il trattamento con nanoparticelle d'argento, e la colorazione H&E rivela una significativa diminuzione dell'infiltrazione cellulare infiammatoria nell'area del portale epatico dei topi trattati con nanoparticelle d'argento rispetto ai controlli.
Il sito di flusso e l'analisi metrica indicano la presenza di un numero significativamente inferiore di cellule NK nel fegato di animali trattati con nanoparticelle d'argento rispetto ai topi infetti da rhesus rotavirus non trattati. Un'ulteriore colorazione immunoistochimica rivela un'espressione sostanzialmente ridotta della colorazione del marcatore cellulare NK nella triade portale dei topi trattati con nanoparticelle d'argento rispetto agli animali infetti da rotavirus rhesus. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che la pratica darà i migliori risultati.
Seguendo questa procedura, come metodi come coniugare nanoparticelle d'argento ad altre cose possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive sull'attività delle lesioni nei trattamenti di BA nei modelli di topo. è lo sviluppo. Questa tecnica ha fornito un modo per i ricercatori nel campo della gastroenterologia di BA o altre malattie come la colestasi nel fegato.
Non dimenticare che lavorare con il rotavirus di ricerca può essere estremamente pericoloso, e quindi precauzioni come indossare i dispositivi di protezione individuale appropriati dovrebbero sempre essere prese quando si esegue questa procedura.
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