13,622 Views
•
14:53 min
•
December 23, 2018
DOI:
En biopsi, som jag tror att de flesta av er vet, är avlägsnandet av lite vävnad från organet av intresse och i detta fall, det är bröstkörteln. Biopsiprovet är mycket användbart om du ska göra saker som genuttryck analys, om du ska göra saker som att ta en del av vävnaden och göra en histologisk analys, att titta på strukturen på mikroskopisk nivå av bröstkörteln, också mycket användbart för att bestämma saker som signalering vägar relaterade till hormon åtgärder, till exempel , så en av de varningar som du måste vara medveten om när du gör någon form av bröst vävnad provtagning, är har du tagit ett prov som verkligen är representativ? Eftersom du kan fånga en lobule, som skulle vara som ett kluster av druvor, eller så kan du fånga några enskilda alveoler som verkligen inte representerar det normala, så, det hopp som du har när du gör din bröst biopsi är att du samlar parenkymal vävnad, vilket är bara ett fint ord att säga den funktionella vävnad som ansvarar för produktionen av mjölk , ett prov som är representativt.
De flesta av de sensoriska nervändar i bröstkörteln är förknippade med huden, och så det är viktigt att inse och att inse att när du har gjort rätt förberedelse av det område där du kommer att göra det ursprungliga snittet, att bedöva huden, då finns det mycket lite i vägen för alla sensoriska nervändar i samband med parenchymal vävnad själv , och så obehag som djuret skulle känna är mestadels förknippas med huden. Så, det finns en mängd olika saker som kan göras med denna vävnad, och det faktiskt tillåter en att samla in mer information om hur det djuret fungerar, jämfört med vad som kan erhållas från att helt enkelt observera vad som matades till djuret och svaren i mjölkprotein utgång eller mjölk komponent utgång. Alla metoder som beskrivs godkändes av Virginia Tech Institutionella Animal Care and Use Committee.
En dag före den planerade biopsin, tvätta och skrubba djuret, särskilt juvret, för att avlägsna gödsel och nedsmutsat material. Bedöma hälsa, fysisk kondition, och beteende hos djuret. Använd endast friska kor.
Helt mjölka kon. Flytta djuret i squeeze rännan, helst inom två timmar efter mjölkning för att minimera mjölk närvaro i körtlarna. Hindra djuret med en huvudgrind.
Placera en rep grimma på huvudet av kon för att förhindra bakåt och framåt rörelse. Dra djurets huvud åt ena sidan och bind repet till squeezerännan med hjälp av en snabbkopplingsknut för att hålla huvudet på plats. Rengör området för injektion med en 70%isopropyl alkohol svabb och administrera flunixin meglumin 1,1 till 2,2 milligram per kilo kroppsvikt intravenöst, via halsvenen, 15 till 20 minuter före biopsin.
Lokalisera halsvenen. Höj halsvenen genom applicering av tryck vid det halsrätas bas. Kontrollera att det inte finns några bubblor i sprutan.
Stick in nålen i den upphöjda halsvenen och dra 0,5 milliliter blod i sprutan två gånger och blanda med innehållet. Om inget blod visar i sprutan, flytta nålen. Om nålen är bosatt i venen, injicera innehållet.
Ta försiktigt bort nålen, applicera gasbinda med lätt tryck på injektionsstället för att förhindra blödning. Administrera xylazinhydroklorid intravenöst, 0,01 till 0,05 milligram per kilo kroppsvikt i det svanskotiska kärlet cirka fem till tio minuter före biopsin för att ge tillräckligt med tid för upprättande av sedering. Höj svansen och rengör området för injektion med en 70%isopropyl alkohol svabb.
Kontrollera att det inte finns några bubblor i sprutan. Stick in nålen i svanskärlet, dra 0,2 milliliter blod i sprutan och blanda med innehållet för att säkerställa att nålen är bosatt i kärlet. Om nål är bosatt, injicera sprutinnehållet.
Ta försiktigt bort nålen. Applicera gasbinda med lätt tryck på injektionsstället. Det är verkligen viktigt att ha en alfa två återföring till hands, som tolazoline, detta beror på att mjölkkor är känsliga för effekterna av xylazin, och en överdos av xylazin kan orsaka lungödem, som potentiellt kan vara dödlig för mjölkko, så titta på din ko för tecken på över-sedering och om dessa inträffar, då lämplig mängd tolazoline kan ges.
Vi vill att våra kor ska stå under ett förfarande. För mycket xylazin kan få dem att sätta sig ner. Har en assistent binda upp svansen för förfarandet, välj biopsi plats på juvret, typiskt i ett övre område för att minimera insamling av bindväv och för att undvika inträngning i körteln cisternen.
Observera och palpera huden med särskild uppmärksamhet för att identifiera eventuella stora subkutana blodkärl för att undvika dessa fartyg under biopsin. Klipp håret från en 15 av 15 centimeter kvadrat område runt biopsi platsen, förbereda biopsi området med en povidone-jod, 0,75 procent tillgängliga jod, eller klorhexidin glukonat skrubba. Alternera 70%isopropylalkoholen minst tre gånger för att avlägsna allt synligt och osynligt skräp.
Applicera den aseptiska scrublösningen och isopropylalkoholen i en cirkelrörelse, med hjälp av inside-out-tillvägagångssätt. Säkerställ att den antiseptiska skrubblösningen förblir i kontakt med huden i minst fem minuter. Använd en fjäril infusionsset med en 18 G nål för att deponera sex milliliter av två procent lidokain hydroklorid subkutant på snittet platsen för att skapa en linje block.
Tränger inte in i de djupare vävnaderna. Låt lokalbedövningsmedel att sprida sig i tre till fem minuter, utföra en annan upprepning av scrub lösning och alkohol före snitt. I väntan, förbered biopsiinstrumenten.
Vad du vill göra när det gäller att ge analgesi är desensibilisera huden. Det beror på att vi har mer neuralinnervation till huden och subkutana vävnader, och i parenkymet, vi egentligen bara talar om stretch receptorer, och dessa inte känner kirurgisk smärta på samma sätt som huden och subkutana vävnader gör. I själva verket, om du hamnar sätta lokalbedövning genom i parenkymet, du kan öka risken för blödning under förfarandet.
Använd aseptiska tekniker vid hantering av biopsiverktygen och för snittet. Tvätta händerna för att avlägsna all synlig kontamination och applicera sterila operationshandskar. Ordna de kirurgiska instrumenten i ett sterilt område i användningsordning.
Har ett antal 10 skalpell, steril gasväv, och montera biopsi instrumentet och en steril handduk för homeostas. Procedur ett, kärnbiopsiinstrument. Montera kärnbiopsiinstrumentet med hjälp av operationshandskar.
Placera de sju sterila bitarna på en steril drapera. Sätt in bladet i dockningssystemet på stycke två. Sätt in bit tre ovanpå bit två, se till att dockningsstationen kommer att anpassa.
Koppla in bladets sista kant i dockningssystemet på stycke fyra. Tryck framåt bit fyra och observera om bit fyra är bredvid bit tre. Sätt in stycke fem på enheten.
Se till att dockningsstationen är i linje. Sätt in bit sex i toppen av bit två. Se till att dockningsstationen är i linje.
Sätt in låsskruven i dockningsstationen. Tryck framåtstycket tre för att täcka låsskruven. Aktivera verktyget, skjut framåtstycket fyra och observera bladet utanför verktyget.
Dra bit fyra bakåt för att dra tillbaka bladet i verktyget. Se till att kon är tillräckligt sövd och biopsistället är tillräckligt sövd, nyp huden för att säkerställa ingen reaktion. Gör en två till tre centimeter vertikal snitt genom huden och subkutana vävnader från proximala till distala med hjälp av ett antal 10 skalpell.
Fäst biopsiinstrumentet på en sladdlös borr med sterila tekniker. Placera borren mot biopsiverktyget och kontrollera om verktyget är ordentligt fastsatt i borret. Säkerställa tillräcklig återhållsamhet genom att ha en individ höja svansen under alla förfaranden.
Slå på borren med hjälp av medurs rotation och en låg hastighet. För fram hela biopsiverktyget runt 7,5 centimeter in i juvret genom snittet medan verktyget roterar. Stäng av borren och manuellt utöka bit fyra av verktyget, slå på borren med medurs rotation och en låg hastighet, ta bort det instrument som innehåller vävnadskärnan från juvret.
Applicera ett starkt tryck omedelbart på såret med hjälp av en steril handduk i minst 20 minuter. Sätt in kanylen i vävnaden. Tryck stycket framåt för att aktivera verktyget.
Rotera i en långsam medurs rotation. Vävnadsprovet är nu inne i kanylen. Ta bort vävnaden från biopsiverktyget med hjälp av pincett.
Förvara provet i en en X-fosfatbuffrad koksaltlösning och utvärdera mängden vävnad. Ta kons vitala tecken var 10 minuter efter biopsin i minst 30 minuter. Kontrollera om det finns blödning efter 20 minuters tryck på biopsistället.
Om det finns droppar av blod, fortsätt att utöva påtryckningar i ytterligare fem till 10 minuter. Stäng snitten med hjälp av rostfria häftklamrar med fem millimeters mellanrum efter att all blödning har upphört. Applicera ett aerosolbandage på biopsiområdet.
Observera djuret i 50 minuter efter ingreppet. Förfarande två, nål biopsi instrument. Följ tillverkarens anvisningar för enheten.
Ta ut biopsinålen ur förpackningen med hjälp av sterila tekniker. Kassera nålen om någon skada observeras. Sätt fast nålen på enheten.
Stäng locket och kuk enheten. Se till att kon är tillräckligt sövd och biopsistället är tillräckligt sövd, nyp huden för att säkerställa ingen reaktion. Gör en en till två centimeter vertikal snitt genom huden och subkutana vävnader från proximala till distala med hjälp av ett nummer 10 skalpell.
Sätt in biopsinålen i snittplatsen, runt 10 till 13 centimeter från huden. Aktivera biopsinålsanordningen för att samla vävnaden. Ta bort nålen från juvret.
Applicera omedelbart starkt tryck på såret med hjälp av en steril handduk i minst 20 minuter. Efter att ha tagit bort vävnaden från nålen, följ det förfarande som beskrivits tidigare för att stänga snittet. Hela proceduren tar ca 45 minuter att avsluta, per djur.
Blodproppar måste tas bort från kvarten biopsied. Dessutom är det nödvändigt att observera mjölkutbytet och födointaget, om möjligt. Se alltid till att djurets hälsa och välbefinnande före, under och efter ingreppet är friskt.
Dokumentera alla läkemedel som administreras till djuren. Kontrollera om det finns blod i mjölken i sju till tio dagar efter biopsin. Handremsa blodproppar från biopsied kvartalet vid efterföljande mjölkningar och se till att fullständig mjölk borttagning sker.
Observera mjölkutbyte, och om möjligt, det enskilda dagliga foderintaget tills kirurgiska häftklamrar har avlägsnats. Övervaka djuret två gånger om dagen för kroppstemperatur, andning och hjärtfrekvens, och uppträdande, tills kirurgiska häftklamrar har tagits bort. Kontrollera biopsi platsen två gånger dagligen för svullnad, ömhet, och eventuella tecken på dränering tills de kirurgiska häftklamrar har tagits bort.
Om dessa observeras, konsultera en veterinär. Ta bort häftklamrar från snittet plats 10 till 14 dagar efter biopsi, beroende på läkningshastighet. Konsultera en veterinär om några tecken på lokal eller systemisk infektion observeras.
Så, så fort biopsin tas, har du avbrutit blodet och därför närings-och syretillförseln till denna vävnad, och så om du inte är mycket snabb på att ta bort att vävnad kärna, och på något sätt stoppa vävnadsaktivitet, de koncentrationer som du kan mäta vid en senare tidpunkt i laboratoriet kanske inte riktigt reflekterande av vad som pågått i det djuret vid tidpunkten för biopsi. Vanligtvis skulle vi snabbt ta bort vävnaden, och flash frysa den i flytande kväve för att försöka bevara denna verksamhet. Den andra saken som man kan göra med den vävnaden, och detta är faktiskt något som vi gjorde med den vävnad som vi samlat in, var man kan isolera och odla de celler som finns i denna vävnad i ett kultursystem.
I vårt fall är vi intresserade av epitelceller som finns i denna vävnad, eftersom de är de celler som faktiskt syntetisera och utsöndrar mjölkkomponenter, och så, dessa celler från dessa vävnadbitar placerades i kultur, och faktiskt, de är fortfarande växer idag. Djuren observerades två gånger om dagen i 10 dagar efter ingreppet. Inga komplikationer uppstod under förfarandet eller i post avgörande perioden, med vitala parametrar för korna kvar inom normala gränser.
De linjära modellerna visar att 10 dagar före biopsin producerade djuren 23,35 kilo mjölk per dag. Djuren uppvisade inte signifikanta förändringar i mjölkavkastningen från 10 dagar före till 10 dagar efter biopsin. Nötkreatur bröstkörtel biopsi är ett minimalt invasiv förfarande, så att djuret att ha en kort återhämtningstid.
Därför kan detta biopsiförfarande användas i många näringsförsök och andra typer av försök där vi kan använda upprepade åtgärder på djuren, så om vi till exempel har fyra perioder med fyra olika näringsbehandlingar, skulle vi lätt kunna biopsi dessa kor fyra olika gånger i slutet av varje period, vilket möjliggör kanske en veckas vilotid i mellan varje period , för att säkerställa att djuren återgår till sin normala produktion.
Denna artikel presenterar en nötkreatur bröstkörteln biopsi med kärna och nål biopsi verktyg. Skördade vävnad kan användas för cellodling eller att bedöma mjölkkörtlar fysiologi och metabolism inklusive genuttryck, proteinuttryck, protein modifieringar, immunohistokemi och metaboliten koncentrationer.
Read Article
Cite this Article
Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).
Copy