Journal
/
Genetics
/
Gene direto knock-out de células-tronco neurais da medula espinhal Axolotl via eletroporação de complexos de proteína-gRNA CAS9
JoVE Journal
Genetics
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Genetics
Direct Gene Knock-out of Axolotl Spinal Cord Neural Stem Cells via Electroporation of CAS9 Protein-gRNA Complexes

Gene direto knock-out de células-tronco neurais da medula espinhal Axolotl via eletroporação de complexos de proteína-gRNA CAS9

DOI:
10.3791/59850-v

•

09:10 min

•

July 09, 2019

•

, , , ,
1School of Life Sciences,South China Normal University, 2The Research Institute of Molecular Pathology (IMP),Vienna Biocenter (VBC), 3Institute for Brain Research and Rehabilitation (IBRR),South China Normal University

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:16CAS9-gRNA Ribonucleoprotein Mixture and Agarose Plate Preparation
  • 02:33Electroporator Configuration and Glass Microinjection Capillary Loading
  • 04:09Pneumatic Pump Configuration
  • 04:37CAS9-gRNA Ribonucleoprotein Mixture Injection
  • 06:05Electroporation
  • 06:45Knock-Out Efficiency Assessment
  • 07:25Results: Representative Knock-Out Effects in Axolotl Spinal Cord Neural Stem Cells
  • 08:33Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

É apresentado aqui um protocolo para executar a batida-para fora do gene tempo-e espaço-restrito em cordas espinais do Axolotl injetando o complexo de CAS9-gRNA no canal central da medula espinal seguido pelo Electroporation.

Tags

AxolotlSpinal CordNeural Stem CellsGene Knock-outElectroporationCAS9GRNARegenerationMolecular MechanismsNeural Stem Cell FunctionSpinal Cord InjuryAgarose Electroporation PlatePoring PulseTransfer Pulse

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Geração independente dependente da seleção e de genes independentes de CRISPR / Cas9 em células de mamíferos

Uma metodologia padrão para examinar a mutagenicidade no local como uma função de ponto de mutação reparação catalisada por CRISPR/Cas9 e SsODN em células humanas

Microinjeção de proteína CRISPR/Cas9 em bagre do canal, Ictalurus punctatus, embriões para Gene Editing

Um protocolo para a produção de Lentivirus vetores Integrase deficiente CRISPR/Cas9-mediada Gene nocaute em dividir células

Disrupção do Gene altamente eficiente de células progenitoras hematopoiéticas murino e humano por CRISPR/Cas9

Proteína endógena de marcação em humanos induzida por células-tronco pluripotentes usando CRISPR/Cas9

Preparação e modificação genética de primatas não humanos tronco hematopoiéticas e células progenitoras

Usando o Sniper-Cas9 para minimizar efeitos fora do alvo de CRISPR-Cas9 sem perda de atividade no alvo através de evolução dirigida

CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteína-mediada por Gene preciso de edição por tubo Electroporation

Geração de modificações genómicas definidas usando CRISPR-CAS9 em células-tronco pluripotentes humanas

Read Article