En revideret metode til inducerende sekundær lymfom i den bagende af mus

Det overordnede mål med denne metode er at fremkalde konsekvent sekundær Lymphedema i baglærg af mus uden at forårsage alvorlig sygelighed. Denne metode kan bruges til at fremkalde sekundær Lymphedema i baglærg af mus. Den største fordel ved denne metode er, at det løser ubetydelige Lymphedema varer mindst otte uger uden at forårsage alvorlig sygelighed.

Nogen ny til proceduren kan kæmpe med de mikrokirurgiske teknikker. Vi anbefaler derfor mikrokirurgisk uddannelse og flere praksisprocedurer for at sikre et vellykket resultat, men også for at forberede forskeren, så han eller hun kan udføre proceduren mere effektivt. Konfigurer kilden til stråling og bedøve musen som beskrevet i protokollen.

Placer en 1,5 millimeter tyk bly pad for at sikre, at kun det område, der gennemgår kirurgi bliver bestrålet. Det viste eksempel er en mus efter operationen for at afklare området. Der skal gives en dosis på 10 grå bestråling.

Forskerne skal tage forholdsregler, når de arbejder med stråling. Under dette eksperiment blev al bestråling udført i et strålingsisoleret rum. Og kilden til stråling blev først tændt, når alt personale havde forladt rummet.

Afvej musen før operationen. Undersøg bedøvelsesdybde ved pote eller hale knivspids test. Barber benet valgt til proceduren.

Indstil strømmen af ilt til 0,8 liter i minuttet. Forbind den med en næsekeve. Påfør oftalmologiske salve.

Injicer 0,5 milliliter saltvand subkutant, helst i scruff af musen for at forhindre hypovolæmi under operationen. Anstænge musen på den kirurgiske klud i liggende stilling. Placer næsekeden over snuden.

Fiksere enden af bagbenene forsigtigt med tape, for at forhindre musen i at flytte under operationen. Løft huden med glatte snævler og klip en lille åbning ca. fem millimeter proksimalt til popliteal fossa. Skub skarpe saks ind i åbningen og klip mod knæet, så snittet ender lige over knæet.

Sørg for ikke at punktere de underliggende kar ved at løfte huden med sævrænninger, mens du klipper. Flyt musen til udsat position og fuldføre omkredsen indsnit. Disseker huden til et par millimeter over vinklen.

Husk at holde vævet fugtigt med sterilt saltvand under hele proceduren. Træk huden af den proksimale sår med en elastisk retractor. Og sørg for, at iskiasvene er synlig som vist.

Injicer 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellem den anden og tredje tå. Tryk forsigtigt på poten et par gange for at distribuere Patent Blue V.Fordelingen af Patent Blue V kan ses gennem mikroskopet. Strukturerne skulle visualiseres er, den proksimale lymfeknuder fartøj, PLV, popliteal lymfeknude, PLN, den første distale lymfeknuder fartøj, DLV1, og den anden distale lymfeknuder fartøj, DLV2.

Forstørre at visualisere PLV og ligate det ved hjælp af en 10-0 nylon sutur. Tryk på poten for at sikre, at ingen Patent Blue passerer proksimale til ligaturen. Du skal have de to distale lymfeknuder som vist.

Tryk på poten flere gange igen for at sikre, at ingen Patent Blue V passerer proksimale til ligaturen. I dette eksempel kan det ses, at en af de lymfekar brister på grund af ligatur hindrer lymfeknuder flow. Fjern popliteal lymfeknude, lymfeknuden har en glat perle-lignende overflade og er farvet af Patent Blue V i modsætning til det omgivende fedtvæv.

Før du fjerner lyskeglasfedt pad, ætse dette fartøj som vist. Fjern derefter fedtpuden i ét stykke. Sørg for, at der ikke er nogen aktiv blødning.

Dette er et eksempel på en placeret lyskelymfeknude. Lymfeknuden placeret i lyskefattige pad er sjældent farvet af Patent Blue V og kan være svært at skelne fra fedt. Fjernelse af fedt pad i ét stykke er den bedste måde at sikre, at lymfeknuden er blevet fjernet.

Sutur huden kanter ned til musklen fascia, med en 6-0 nylon sutur ved hjælp af scener og nål indehaveren, efterlader et hul på to til tre millimeter, for at begrænse den overfladiske lymfeknuder flow. Dette er et eksempel på de færdige suturer, i popliteal fossa, den laterale side af baglimb, over knæet, og den mediale side af baglimb. Administrere analgesi og veje musen efter operationen, derefter placere den i et kabinet opvarmet til nyttiggørelse.

Gentag proceduren for præ-kirurgi bestråling. Denne graf viser den kombinerede gennemsnitlige hindlimb volumen af tre separate undersøgelser i de otte uger efter operationen. 31 mus blev inkluderet i alt.

X-aksen repræsenterer uger efter operationen. Y-aksen repræsenterer hindlimb volumen i kubikm millimeter. Pilelinjerne repræsenterer standardafvigelsen.

Det må forventes, at hævelsen fra operationen og den inducerede Lymphedema vil falde i løbet af de første fire uger. Efter de første fire uger ser vi en relativ stabil tilstand af Lymphedema. Mængden af kontrol hindlimb stiger i løbet af de otte uger, således strengt siger forskellen i volumen mellem Lymphedema hindlimb og kontrol hindlimb, dette var uventet.

Årsagen er spekuleret på at være, at musene brugte deres ikke-opererede hindlimb mere end den opererede hindlimb i ugerne efter operationen. Dette kan føre til hypertrofi af kontrol hindlimb og måske forklare stigningen i volumen. For individuelle tal for de tre inkluderede undersøgelser bedes du læse protokollen.

Denne tabel viser Sidaks multiple sammenligningstest for de kombinerede volumenmålinger af de tre omfattede undersøgelser. Den beregnede P-værdi viser, at der er statistisk signifikant forskel mellem bagbenene med induceret Lymphedema og kontrol hindlimbs, i alle otte ugers opfølgning. For individuel statistisk analyse af de tre omfattede projekter bedes du læse protokollen.

Denne metode inducerer statistisk signifikant Lymphedema, der varer mindst otte uger. Proceduren kan bruges til at studere petrificalitet af Lymphedema og til forskning nye behandlingsmuligheder. Efter at have set denne video, bør du have fået en forståelse af, hvordan man fremkalder sekundært Lymphedema i baglå af mus, ved hjælp af en kombination af mikrokirurgi og før og efter operationen bestråling.

Når behersket, den kirurgiske procedure kan udføres i 45 minutter.