En revidert metode for å indusere sekundær lymfødem i Hindlimb bentap av mus

Det overordnede målet med denne metoden er å indusere konsekvent sekundært lymfødem i baklimb av mus uten å forårsake alvorlig sykelighet. Denne metoden kan brukes til å indusere sekundært lymfødem i baklimb av mus. Den største fordelen med denne metoden er at den løser ubetydelig lymfødem som varer minst åtte uker uten å forårsake alvorlig sykelighet.

Noen som er nye i prosedyren, kan slite med mikrokirurgiske teknikker. Vi anbefaler derfor mikrokirurgisk opplæring og flere praksisprosedyrer for å sikre et vellykket resultat, men også for å forberede forskeren slik at han eller hun kan utføre prosedyren mer effektivt. Sett opp kilden til stråling og bedøve musen som beskrevet i protokollen.

Plasser en 1,5 millimeter tykk blypute for å sikre at bare området som gjennomgår kirurgi blir bestrålt. Det viste eksemplet er av en mus etter operasjonen for å klargjøre området. Administrer en dose på 10 grå bestråling.

Forskerne må ta forholdsregler når de arbeider med stråling. Under dette eksperimentet ble all bestråling utført i et strålingsisolert rom. Og strålingskilden ble bare slått på da alt personell hadde forlatt rommet.

Vei musen før operasjonen. Undersøk bedøvelsesdybden ved pote- eller haleklemmetest. Barber beinet valgt for prosedyren.

Sett oksygenstrømmen til 0,8 liter per minutt. Koble den til en nesekjegle. Påfør oftalmisk salve.

Injiser 0,5 milliliter saltvanns subkutant, helst i scruff av musen for å forhindre hypovolemi under operasjonen. Plasser musen på den kirurgiske kluten i liggende stilling. Plasser nesekjeglen over snuten.

Fest enden av baklimbs forsiktig med tape, for å hindre at musen skifter under operasjonen. Løft huden med glatte tang og klip en liten åpning omtrent fem millimeter proksimal til popliteal fossa. Skyv skarp saks inn i åpningen og klips mot kneet, slik at snittet slutter like over kneet.

Pass på at du ikke punkterer de underliggende karene, ved å løfte huden med tang under klipping. Flytt musen til utsatt posisjon og fullføre circumferential snitt. Dissekere huden til et par millimeter over vinkelen.

Husk å holde vevet fuktig med steril saltvann under hele prosedyren. Trekk tilbake huden på den proksimale sårasjen med en elastisk retractor. Og sørg for at isjiavenen er synlig som vist.

Injiser 0,01 milliliter Patent Blue V subkutant mellom andre og tredje tå. Trykk forsiktig på poten et par ganger for å distribuere Patent Blue V.Fordelingen av Patent Blue V kan ses gjennom mikroskopet. Strukturene som trengs for å visualiseres er, det proksimale lymfefartøyet PLV, popliteal lymfeknute, PLN, det første distale lymfefartøyet, DLV1, og det andre distale lymfefartøyet, DLV2.

Forstørre for å visualisere PLV og ligate den ved hjelp av en 10-0 nylon sutur. Trykk på poten for å sikre at ingen Patent Blue passerer proksimal til ligaturen. Ligate de to distale lymfekarene som vist.

Trykk på poten flere ganger igjen for å forsikre deg om at ingen Patent Blue V passerer proksimalt til ligaturen. I dette eksemplet kan det ses at et av lymfekarene brister på grunn av ligaturen som hindrer lymfestrømmen. Fjern popliteal lymfeknute, lymfeknuten har en glatt perlelignende overflate og er farget av Patent Blue V i motsetning til det omkringliggende fettvevet.

Før du fjerner inngangsfettputen, cauterize dette fartøyet som vist. Fjern deretter fettputen i ett stykke. Pass på at det ikke er noen aktiv blødning.

Dette er et eksempel på en lokalisert inguinal lymfeknute. Lymfeknuten som ligger i inngangsfettputen er sjelden farget av Patent Blue V og kan være vanskelig å skille fra fettet. Fjerne fett puten i ett stykke er den beste måten å sikre at lymfeknuten er fjernet.

Sutur huden kanter ned til muskel fascia, med en 6-0 nylon sutur ved hjelp av tang og nål holder, forlater et gap på to til tre millimeter, for å begrense overfladisk lymfe flyt. Dette er et eksempel på de ferdige suturene, i popliteal fossa, den laterale siden av baklimb, over kneet og den mediale siden av baklimb. Administrer analgesi og veie musen etter operasjonen, og plasser den deretter i et skap oppvarmet for utvinning.

Gjenta prosedyren for pre-kirurgi bestråling. Denne grafen viser det kombinerte gjennomsnittlige baklimbvolumet på tre separate studier i de åtte ukene etter operasjonen. Totalt 31 mus ble inkludert.

X-aksen representerer uker etter operasjonen. Y-aksen representerer bakklimavolum i kubikkmillimeter. Pillinjene representerer standardavviket.

Det er å forvente at hevelsen fra operasjonen og det induserte lymfødemet vil avta i løpet av de første fire ukene. Etter de første fire ukene ser vi en relativ stabil tilstand av lymfødem. Volumet av kontrollen hindlimb øker i løpet av de åtte ukene, og dermed strengt sier forskjellen i volum mellom lymfødem hindlimb og kontroll hindlimb, dette var uventet.

Årsaken er spekulert å være at musene brukte sin ikke-opererte hindlimb mer enn den opererte hindlimb i ukene etter operasjonen. Dette kan føre til hypertrofi av kontrollen hindlimb og kanskje forklare økningen i volum. For individuelle tall på de tre studiene inkludert vennligst les protokollen.

Denne tabellen viser Sidaks flere sammenligningstest for de kombinerte volummålingene for de tre inkluderte studiene. Den beregnede P-verdien viser at det er statistisk signifikant forskjell mellom bakkulene med indusert lymfødem og kontrollhinnelimbs, i løpet av alle åtte ukene med oppfølging. For individuell statistisk analyse av de tre inkluderte prosjektene vennligst les protokollen.

Denne metoden induserer statistisk signifikant lymfødem, som varer minst åtte uker. Prosedyren kan brukes til å studere petrificiality av lymfødem og til forskning nye behandlingstilbud. Etter å ha sett denne videoen, bør du ha fått en forståelse av hvordan du induserer sekundært lymfødem i bakkulb av mus, ved hjelp av en kombinasjon av mikrokirurgi og pre- og etterkirurgibestråling.

Når mestret, kan den kirurgiske prosedyren utføres om 45 minutter.