Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
הכנת אלקטרודות גירוי עצבי היקפי להשתלה כרונית בחולדות
Chapters
Summary July 14th, 2020
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
גישות קיימות לבניית אלקטרודות שרוול עצב היקפי מושתלים באופן כרוני לשימוש מכרסמים קטנים דורשים לעתים קרובות ציוד מיוחד ו/או כוח אדם מיומן. בפרוטוקול זה אנו מדגימים גישה פשוטה בעלות נמוכה לזיוף אלקטרודות שרוול מושתלות כרונית, ולהפגין את יעילותם לגירוי עצבי vagus (VNS) בחולדות.
Transcript
גירוי עצבי היקפי נמצא יותר ויותר תחת חקירה כטיפול במגוון מחלות כולל מחלות דלקתיות והפרעות עצביות. בניית אלקטרודות שרוול עצב היקפי מושתל כרונית עבור חיות מעבדה קטנות יכולה להיות זמן רב ויקר. פרוטוקול זה מתאר גישה פשוטה, בעלות נמוכה לבניית עצב היקפי מושתל כרוני מגרה אלקטרודות לשימוש בחולדות.
השיטה דורשת מעט מאוד חומרים ואספקה נגישים בקלות ומספר מופחת של צעדים מסוכנים או נדרשים מבחינה טכנית בהשוואה לטכניקות דומות המפחיתות הן את עלות המכשיר והן את הזמן הנדרש לאמן כוח אדם והרכבת מכשירים. טכניקה זו נועדה לאפשר מחקרים פרה-קליניים הבודקים את האפקטיביות של גירוי עצבי כרוני בווגאס במהלך התאוששות משבץ או סוגים אחרים של תפקוד לקוי של המטרו. התחל בהכנת צינורות האזיקים.
השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך חתיכה 2.5 מילימטר של צינורות פולימר. לאחר מכן הכנס מהדק או כפה טיפים דרך הצינורות ולעשות להחליק לאורך דרך הקיר של צינורות בצד אחד של השרוול. מוציאים את המדפים מהצנרת ומכניסים מחט תפירה גדולה דרך קו האמצע של השרוול.
מניחים את המחט לתוך לוח הקצף כדי להצמיד את השרוול במקום במהלך שלבי ההרכבה הנותרים. כדי למקם תפר לאבטחת סגירת חפתים במהלך ההשתלה הכנס מחט תפירה קטנה דרך הקיר של השרוול על קו האמצע בערך חמישה מילימטרים מהחתך העליון בצד אחד. ואז להכניס שני סנטימטרים של תפר שש אפס דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך הקיר של הצינור כדי להשחיל את התפר לתוך השרוול.
לנקב חור שני דרך קיר צינורות בערך נקודה חמישה מילימטרים מתחת לחור הראשון לאורך קו האמצע של השרוול. הכנס את התפר דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך קיר צינורות. החל כמות קטנה של דבק תרופת UV לקצה הקצר של התפר המשתרע מהחור התחתון ולמשוך את קצה התפר הארוך יותר עד הזנב התחתון הוא כמעט סומק עם הקיר החיצוני של הצינור.
ואז לרפא את דבק עם שרביט UV. חזור על תהליך זה כדי למקם תפר נוסף בצד הנגדי של השרוול. המקום הבא חוט אירידיום פלטינה מוביל.
השתמש במחט התפירה הקטנה כדי ליצור ארבעה חורים בקיר השרוול. ואז להכניס את מחט התפירה שוב, הפעם עובד מבחוץ אל הפנים דרך חור העופרת הראשון. הכנס בערך נקודה חמישה סנטימטרים של חוט אירידיום פלטינה 7.5 ס"מ דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך הצינורות כדי להשחיל את חוט להוביל דרך קיר השרוול.
כוונן את החוט כך שכ-4.5 ס"מ ישתרעו בצד החיצוני של השרוול. הכנס את המחט דרך חור העופרת הראשון שוב ואז דרך חור העופרת השני. הכנס נקודה חמישה סנטימטרים של הקצה הקצר יותר של החוט דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך הצינורות כדי להשחיל את חוט להוביל דרך קירות האזיקים.
חזור על התהליך כדי להשחיל את החוט דרך חורי העופרת השלישית והרביעית. באמצעות מצית בוטאן, להסיר בזהירות את הבידוד מחמישה עד שישה מילימטרים של החוטים המשתרעים מן החורים להוביל השני והרביעי ואז בעדינות למשוך על קצה החוט המשתרע מהחור הראשון עד החלק uninsulated של החוט הוא לשטוף עם החור. חזור על פעולה זו עם ההפניה האחרת כדי ליישר את הקצה הלא מיושר של החוט מושחל דרך חורי העופרת השלישית והרביעית.
החל כמות קטנה של דבק תרופת UV על לולאות חוט בצד החיצוני של השרוול בחורי העופרת הראשונה והשלישית. לאחר מכן השתמש בשרביט UV כדי לרפא את דבק ולאבטח את הלידים במקום. השתמש קצה פיפטה קטן לדחוף את מוביל חוט uninsulated על הקיר הפנימי של השרוול.
משוך את הזנבות מילימטר אחד של החוט שטוח על פני השטח החיצוניים של השרוול, דואג לא לקצר אותם יחד. לאחר מכן להחיל כמות קטנה של דבק UV רק כדי לכסות את שני הזנבות לרפא אותו. הסר את המחט הגדולה עם מכלול השרוולים ממועצת הקצף.
הכנס אורך של שלושה סנטימטרים של תפר של שישה אפס דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך הצינורות כדי להשחיל את התפר דרך החלק התחתון של השרוול בנקודת האמצע. הכנס את מחט התפירה הקטנה דרך אותו חור קו האמצע עובד מפנים לחוץ, כדי למנוע עיוות, צינורות ואת מוביל חוט. ואז להכניס את הזנב החיצוני של התפר דרך העין של המחט ולמשוך את המחט דרך קיר השרוול כדי ליצור לולאה של תפר סביב קצה השרוול.
צור את הלולאה השנייה סביב הקצה הנגדי של השרוול על ידי קשירת הקצוות של התפר וחצי קשר בצד החיצוני של השרוול. תוך החזקת הקשר שטוח נגד צינורות, להחיל כמות קטנה של דבק UV על הקשר למחצה לרפא אותו. בזהירות לחתוך את הקצוות של חוט התפר קרוב ככל האפשר לקשר.
לאחר מכן, השתמש מצית בוטאן כדי להסיר את הבידוד מ כשלושה מילימטרים בסוף כל מוביל חוט אירידיום פלטינה. הלחם את צד ה סיכת זהב לקצה הלא מיושב של כל עופרת. לפני שתמשיך במבחן ההשתלה, ההימנעות של המכשיר שהורכב כדי לוודא שלשרוול שהורכב יש מכשול של פחות משני קילו אום בקילוהרץ אחד.
לאחר הרכבת כובע הראש והשתלת אלקטרודות השרוול על פי הוראות כתב היד, לעורר את עצב הוואגוס בזמן החולדה ערה. חבר את החולדה למחולל גירויים באמצעות מכסה הראש המושתל והתאם את הגדרות הגירוי. עבור VNS המושרה ארגון מחדש של המפה קליפת המוח המנוע, לספק רכבת אחת של 15 פולסים biphasic, כל אחד עם רוחב של 100 מיקרו שניות, משרעת של 800 מיקרו אמפר בתדר של 30 הרץ.
רכבת גירוי מועברת מיד לאחר זיהוי כל מכת לחץ מנוף מוצלחת לאורך 10, 30 דקות אימונים. השתמש oscilloscope כדי לפקח על מסירה מוצלחת של גירוי הנוכחי. פרוטוקול זה, שימש להשתלה כרונית של אלקטרודות שרוול עצבי של vagus וכובעי ראש בחולדות.
במהלך ההשתלה, אימות תפקודי של כל האזיקים בוצע על ידי בדיקות עבור ירידה הנגרמת על ידי VNS ברוויה חמצן בדם. כדי לעורר תגובה זו, רכבת של 10 שניות של 30 פולסים הרץ, כל אחד עם רוחב של 100 מיקרו שניות, משרעת של 800 מיקרו אמפר נמסר על פני מובילי השרוול. עבור כל האזיקים, ראינו הפסקת VNS המושרה של נשימה למשך 10 שניות גירוי, אשר לווה בירידה ברווית חמצן בדם של לפחות 5% אישור תפקוד חפתים והשתלה נאותה.
כדי לבדוק את הפונקציונליות לטווח ארוך של המכשירים, חולדות היו הרדמה שישה שבועות לאחר ההשתלה, ו VNS הוחל שוב. עבור שבעה מתוך תשעה מכשירים, עוצמת הגירוי עוררה שינוי ברווית החמצן בדם, לא הייתה שונה מזו שנצפתה בהשתלה הראשונית, מה שמרמז על המשך ביצועים מצוינים. שני המכשירים הנותרים, הגדלת משרעת הגירוי ל 1.6 מיליאמפר היה מספיק כדי לעורר ירידה אמינה רוויית חמצן בדם של לפחות 5% מה שמרמז כי מכשירים אלה המשיכו לתפקד.
אבל השינויים בחוסר פגיעה, נזק עצבי, או כיוון השרוול אולי גרמו ביצועים מופחתים. כדי להמשיך ולבדוק את הפונקציונליות ארוכת הטווח של המכשירים המושתלים באופן כרוני, קבוצה שנייה של אשרושים אומנה בגרסה פשוטה יותר של משימת עיתונות מנוף מיומנת. החולדות נדרשו להגיע לשני סנטימטרים מחוץ לתא האימונים כדי לדכא את הידית באופן מלא ואז לשחרר אותה תוך שתי שניות.
בקנה אחד עם מחקרים קודמים המוכיחים כי גירוי עצבי vagus מניע את הרחבת ייצוגי מפת המנוע הרלוונטיים למשימה, חולדות שטופלו ב- VNS הציגו ייצוגים גדולים יותר באופן משמעותי של קיידאות פרוקסימליות מאשר חולדות שאמה טיפלו. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם בקלות כדי להתאים ניסויי גירוי כרוניים במין מעבדה אחרים או באתרי עצבים היקפיים אחרים, כולל עצבים sciatic או sacral. לדוגמה.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
