A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:44Generation of Baculovirus-infected TIPS Cells
- 03:05Production of AAV Vector
- 05:08Lysis of Cells and Release of AAV
- 06:07Purification of AAV Vector Using Affinity Column Chromatography System
- 08:03Concentration and Diafiltration of AAV Vector Using Tangential Flow Filtration (TFF)
- 08:54Results: Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector Using Baculovirus-Insect Cell Culture System
- 09:48Conclusion
В этом протоколе вектор AAV2 продуцируется путем совместного культивирования клеток насекомых Spodoptera frugiperda (Sf9) с бакуловирусом (BV)-AAV2-зеленым флуоресцентным белком (GFP) или терапевтическим геном и инфицированными BV-AAV2-rep-cap клетками Sf9 в культуре суспензии. Частицы AAV высвобождаются из клеток с помощью моющего средства, осветляются, очищаются с помощью аффинной колоночной хроматографии и концентрируются методом тангенциальной фильтрации потока.
