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March 25, 2022
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कागज एक बेहतर chemotaxis परख का उपयोग कर जड़ exudates में rhizobacteria के chemoattractant की पहचान की सूचना दी. Chemotaxis प्रत्यारोपण जड़ actuates पौधे के विकास के लिए जड़ उपनिवेशीकरण के लिए महत्वपूर्ण है, rhizobia बैक्टीरिया को बढ़ावा देने और संयंत्र-माइक्रोब इंटरैक्शन के सहायक गुटों को प्रदान करने के लिए। बैक्टीरियल कीमोटैक्सिस का विश्लेषण करने के लिए कई तरीकों का उपयोग किया गया था।
उदाहरण के लिए, तैराकी प्लेट विधि, कैपिलरी जैसी विधि, माइक्रोफ्लुइडिक स्लिपचिप डिवाइस। तैराकी प्लेट विधि का प्रयोग चक्र लंबा था। कैपिलरी जैसी विधि की प्रयोगात्मक त्रुटि शुरू की गई थी, माइक्रोफ्लुइडिक स्लिपचिप डिवाइस प्रयोग करने के लिए महंगा है।
हमने कीमोएट्रेक्टेंट की जल्दी से पहचान करने के लिए एक सीधी विधि स्थापित की जो जटिल चरणों के बिना बाँझ ग्लास स्लाइड का उपयोग करके राइजोस्फीयर विकास को बढ़ावा देने वाले बैक्टीरिया के कीमोटैक्टिक आंदोलन को प्रेरित कर सकती है। विधि ने प्लेट गिनती की त्रुटि को कम कर दिया और प्रयोग चक्र को छोटा कर दिया। एक chemoattractant पदार्थ की पहचान करने के संबंध में, नई विधि 2-3 दिनों की बचत कर सकती है और प्रयोगात्मक सामग्रियों की लागत को भी कम कर सकती है।
बेतरतीब ढंग से बढ़ता है कक्ष संस्कृति में चावल के बीज वितरित एक सप्ताह के लिए उत्पन्न होता है और दो बार बाँझ पानी जोड़ें। समान आकार के चावल के अंकुरों का चयन करें और एमएस तरल माध्यम के 50 मिलीलीटर में पौधे का चयन करें। 22 डिग्री सेल्सियस और एक सेप्टिक स्थिति में 48 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।
चावल की जड़ exudates सुश्री माध्यम में जारी किया जाएगा. तरल क्रोमैटोग्राफी मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण UHPLC प्रणाली का उपयोग करके किया गया था। chemoattractant जलीय समाधान तैयार करें यह सुनिश्चित करें कि यह बाँझ है।
एक 0.22 माइक्रोमीटर बैक्टीरिया फिल्टर के साथ chemoattractant समाधान फ़िल्टर. chemoattractant जलीय समाधान पानी में भंग LCMS अध्ययन से प्राप्त एकल पदार्थ था। उदाहरण के लिए सिट्रिक्स एसिड समाधान का उपयोग किया गया था।
सभी क्रियाएं दीपक के पक्ष में की जानी चाहिए। कांच स्लाइड की मध्य स्थिति को 1 सेंटीमीटर के अंतराल पर चिह्नित करें। सुनिश्चित करें कि कांच की स्लाइड को लौ पर कई बार निष्फल किया गया है।
ग्लास स्लाइड के बाईं ओर 30 माइक्रोलीटर chemoattractant समाधान पर यह सुनिश्चित करें कि बैक्टीरिया लॉगरिदमिक चरण में सुसंस्कृत किया गया था। ग्लास स्लाइड के दाईं ओर 30 माइक्रोलीटर बैक्टीरिया समाधान जोड़ें। बैक्टीरिया के समाधान के लिए chemoattractant जलीय समाधान कनेक्ट करने के लिए और इसे एक साफ बेंच पर 20 मिनट के लिए एक कमरे के तापमान पर रखने के लिए inoculating लूप का उपयोग कर लौ पर कई बार इनोक्यूलेशन लूप को स्टरलाइज़ करें।
20 मिनट के बाद फ़िल्टर पेपर के साथ कनेक्टिंग लाइन डिस्कनेक्ट करें। सुनिश्चित करें कि 1.5 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज्ड ट्यूब बाँझ है। कांच की स्लाइड के बाईं ओर chemoattractant जलीय समाधान ले लीजिए।
समाधान को 1.5 मिलीलीटर बाँझ सेंट्रीफ्यूज्ड ट्यूब में स्थानांतरित करें। सेंट्रीफ्यूज्ड ट्यूब में सेल फ्रंट डाई की उपयुक्त मात्रा जोड़ें। 2 मिनट के बाद, रक्त गिनती कक्ष के साथ बैक्टीरिया की गिनती और सूक्ष्म अवलोकन के लिए स्वीकार्य तरल पदार्थ एकत्र करें।
निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके आकर्षित किए गए व्यवहार्य सूक्ष्मजीवों की संख्या ज्ञात कीजिये। एक उच्च RCI chemoattractant के लिए एक मजबूत प्रतिक्रिया को इंगित करता है। परिणामों ने संकेत दिया कि साइट्रिक एसिड और कैफेइक एसिड में उच्चतम कीमोटैक्सिस सूचकांक हैं।
नए chemotaxis परख विधि परिणामों ने लिखा है कि जीवाणु साइट्रिक एसिड, कैफेइक एसिड और गैलेक्टोज प्रयोगों की एकाग्रता नियंत्रण समूह और सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में काफी अधिक थे। साइट्रिक एसिड ने सबसे मजबूत कीमोटैक्सिस लिखा था। प्रयोगात्मक परिणाम पारंपरिक तरीकों के परिणामों के साथ समझौते में थे।
इस वीडियो प्रोटोकॉल को पौधे-माइक्रोब इंटरैक्शन के स्पष्टीकरण के लिए एक मूल्यवान संसाधन के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है।
यहाँ, हम एक बेहतर chemotaxis परख प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य पारंपरिक बैक्टीरियल केमोटैक्सिस विधियों के चरणों और लागतों को कम करना और पौधे-माइक्रोब इंटरैक्शन को समझने के लिए एक मूल्यवान संसाधन के रूप में सेवा करना है।
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Jiao, H., Lyu, C., Xu, W., Chen, W., Hu, Y., Wang, Z. An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates. J. Vis. Exp. (181), e63249, doi:10.3791/63249 (2022).
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