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March 14, 2022
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शोधकर्ताओं को अक्सर एक ही समय में कई संरचनाओं से स्थानीय क्षेत्र क्षमताओं को रिकॉर्ड करने की आवश्यकता होती है। हमारे आसान microelectrode डिजाइन हमें एक साथ विभिन्न गहराई पर कई मस्तिष्क संरचनाओं से LFPs रिकॉर्ड करने के लिए अनुमति देता है। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध माइक्रोइलेक्ट्रोड में अक्सर लचीलेपन की कमी होती है और कई मस्तिष्क संरचनाओं से रिकॉर्ड करने की अनुमति नहीं होती है।
हमारे microelectrode डिजाइन आसानी से किसी भी वांछित संरचना फिट करने के लिए निर्माण को संशोधित करने की अनुमति देता है। व्यास में 50 माइक्रोमीटर एक dianal लेपित निकल क्रोमियम तार लेने से शुरू करो. प्लेटफ़ॉर्म के पीछे तार के एक छोर को टेप करें और तार को प्लेटफ़ॉर्म पर निकटतम घुंडी के चारों ओर तीन बार लपेटें।
knobs के बीच दो छोरों बनाने के लिए सबसे दूर के दूसरे घुंडी के चारों ओर तार खिंचाव। तार को पहले घुंडी के चारों ओर तीन बार लपेटें ताकि तार को ठीक किया जा सके और प्लेटफ़ॉर्म के पीछे अंत को टेप किया जा सके। उनके चारों ओर लपेटे गए टेप के साथ तारों के नीचे तनाव सलाखों को रखें।
माइक्रोस्कोप और ठीक संदंश का उपयोग करते हुए, कॉर्टिकल, वेंट्रल-लेटरल, थैलेमिक न्यूक्लियस माइक्रोइलेक्ट्रोड बनाने के लिए तारों के बीच या तो तीन मिलीमीटर का अंतर बनाएं या स्ट्रिएटल-निड्रल माइक्रोइलेक्ट्रोड बनाने के लिए 4.5-मिलीमीटर का अंतर बनाएं। यदि आवर्धन का उपयोग माइक्रोस्कोप पर किया जाता है, तो आवर्धन में अंतर और तारों के बीच की वास्तविक दूरी के लिए गणना और समायोजित करना सुनिश्चित करें। 0.5 मिलीमीटर मोटी प्लास्टिक के चार छोटे टुकड़ों को लगभग छह मिलीमीटर चौड़ाई में और ऊंचाई में तीन मिलीमीटर काटें।
प्लास्टिक पर गोंद लगाएं। प्लास्टिक के टुकड़ों को तार के बीच से लगभग एक सेंटीमीटर दूर रखें, जो तनाव बार से एक सेंटीमीटर दूर है। एक कपास झाड़ू के साथ अतिरिक्त गोंद निकालें।
गोंद सूखने के बाद, ठीक कैंची का उपयोग करके तार को काट लें। एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट का उपयोग करके चार सात मिलीमीटर ग्लास ट्यूबों को काटें और इलेक्ट्रोड तार को ग्लास ट्यूबों में डालें। उन्हें प्लास्टिक से जोड़ने के लिए ग्लास ट्यूबों के आधार पर गोंद रखें।
गोंद सूखने तक प्रतीक्षा करें, फिर एक स्केलपेल का उपयोग करके कांच की ट्यूबों और तारों को काट लें। लक्ष्य क्षेत्रों के वांछित क्रम में प्लास्टिक संलग्न करने के लिए सुपर गोंद का उपयोग करें। इलेक्ट्रोड को एक साथ बांधने के लिए प्लास्टिक के चारों ओर एपॉक्सी राल लागू करें।
एक मोटा तार लें और एक छोर पर एक लूप बनाएं, लूप को एपॉक्सी समाधान में डुबोएं, और इसे प्लास्टिक पर रखें, यह सुनिश्चित करें कि मोटा तार सपाट पड़ा हुआ है ताकि इस तार को हैंडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सके। तार को दो सेंटीमीटर तक काट लें। तारों को समूहीकृत करें और एक स्केलपेल के साथ अलग-थलग सिरों के एक मिलीमीटर को दूर करें।
कॉर्टिकल इलेक्ट्रोड को मोड़ें और तारों को अलग करें। ठीक संदंश का उपयोग करके, प्रत्येक तार के अंत में एक लूप बनाएं। हेमोस्टैट के साथ एक 10-पिन हेडसेट रखें और पिन पर फ्लक्स की न्यूनतम मात्रा लागू करने के लिए कपास झाड़ू के लकड़ी के अंत का उपयोग करें।
कपास झाड़ू के लकड़ी के अंत का उपयोग करते हुए, तार छोरों पर फ्लक्स लागू करें। टांका तार loops करने के लिए 10 पिन हेडसेट. पिन के बीच शॉर्ट सर्किट को रोकने के लिए हेडसेट को सुखाएं।
संदर्भ और जमीन के तारों के लिए लगभग 0.05 से 0.008 इंच का एक पतला तार लें और एक छोर से प्लास्टिक को बंद कर दें। तार के दूसरे छोर पर एक लूप बनाएं। सोल्डर संदर्भ और जमीन के तारों के छीन लिया पक्ष उनके संबंधित पिन करने के लिए.
मोटी तार को पकड़े हुए, माइक्रोइलेक्ट्रोड्स के चारों ओर क्रैनियोप्लास्टी सीमेंट लागू करें, खासकर जहां तार पिन से जुड़ते हैं। सीमेंट के साथ वास्तविक इलेक्ट्रोड सिरों को छूने से बचें। सीमेंट सूखने के बाद, कांच की ट्यूबों के आधार पर एपॉक्सी राल डालें, स्ट्रिएटल माइक्रोइलेक्ट्रोड तारों, और पूरे इलेक्ट्रोड के चारों ओर।
epoxy राल के साथ इलेक्ट्रोड सिरों को छूने से बचें. स्थानीय क्षेत्र संभावित रिकॉर्डिंग सही पूर्व मोटर प्रांतस्था, बाएं वीएल, स्ट्रिएटम और एसएनआर से की गई थी। जब्ती शुरू को बेसलाइन से कम से कम दो बार वोल्टेज ट्रेस के विक्षेपण के रूप में पहचाना गया था।
पावर स्पेक्ट्रम प्लॉट रिकॉर्ड किए गए स्थानीय संभावित रिकॉर्डिंग के लिए आवृत्ति वितरण दिखाता है। जब्ती की शुरुआत लेटेंसी की तुलना मिलीसेकंड परिशुद्धता के साथ प्रत्येक संरचना के बीच की जा सकती है। घाव बनाने वाले इलेक्ट्रोड युक्तियों के स्थान को चिह्नित करने और पुष्टि करने के लिए रिकॉर्डिंग के अंत में एक वर्तमान नाड़ी लागू की गई थी।
यदि माइक्रोइलेक्ट्रोड्स का निर्माण विभिन्न मस्तिष्क संरचनाओं के लिए किया जाता है, तो अपनी वांछित संरचना के स्टीरियोटैक्टिक निर्देशांक के अनुसार तारों के बीच के अंतराल को संशोधित करना याद रखें। कांच की ट्यूबों में गहरी संरचना इलेक्ट्रोड रखें और माइक्रोइलेक्ट्रोड की लंबाई को समायोजित करें। फिर, आवश्यक क्रम में प्लास्टिक संलग्न करें।
वर्तमान प्रोटोकॉल एक साथ कई मस्तिष्क संरचनाओं से विवो में स्थानीय क्षेत्र क्षमताओं को रिकॉर्ड करने के लिए कस्टम-निर्मित माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणियों के निर्माण का वर्णन करता है।
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Brodovskaya, A., Shiono, S., Batabyal, T., Williamson, J., Kapur, J. Construction of Local Field Potential Microelectrodes for in vivo Recordings from Multiple Brain Structures Simultaneously. J. Vis. Exp. (181), e63633, doi:10.3791/63633 (2022).
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