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Messung von Proteinumsatzraten in seneszenten und nicht teilenden kultivierten Zellen mit metabolischer Markierung und Massenspektrometrie
JoVE Journal
Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry
DOI:

08:52 min

April 06, 2022

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Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:58Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
  • 02:29In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
  • 04:15Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
  • 06:31Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
  • 08:13Conclusion

Summary

Automatic Translation

Dieses Protokoll beschreibt den Workflow für die metabolische Markierung von seneszenten und nicht teilenden Zellen mit gepulstem SILAC, ungezielter Massenspektrometrie-Analyse und einer optimierten Berechnung der Proteinhalbwertszeiten.

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