Journal
/
Biochemistry
/
Måling av proteinomsetningshastigheter i senescent og ikke-dele kultivert celler med metabolsk merking og massespektrometri
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells with Metabolic Labeling and Mass Spectrometry

Måling av proteinomsetningshastigheter i senescent og ikke-dele kultivert celler med metabolsk merking og massespektrometri

DOI:
10.3791/63835-v

•

08:52 min

•

April 06, 2022

•

, ,
1Laboratory of Genetics and Genomics, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health, 2Translational Gerontology Branch, National Institute on Aging Intramural Research Program,National Institutes of Health

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:58Labeling of Cells Pulsed SILAC and Harvest of Lysates
  • 02:29In-Solution Trypsin Digestion and Sample Clean-Up with Solid-Phase Extraction (SPE)
  • 04:15Data-Dependent Acquisition Mass Spectrometry Analysis and Calculation of Protein Half-Lives
  • 06:31Results: Measurement of Protein Turnover Rates in Senescent and Non-Dividing Cultured Cells Using pSILAC Mass Spectrometry
  • 08:13Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Denne protokollen beskriver arbeidsflyten for metabolsk merking av senescent og ikke-delende celler med pulserende SILAC, umålt massespektrometrianalyse og en strømlinjeformet beregning av proteinhalvvanser.

Tags

Protein TurnoverSenescent CellsNon-dividing CellsMetabolic LabelingMass SpectrometrySILACProtein HomeostasisCellular StressAgingNeurodegenerative DiseaseLC-MSTrypsinUreaAmmonium BicarbonateDithiothreitolIodoacetamide

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Sheathless Kapillær elektroforese-massespektrometri for Metabolsk profilering av biologiske prøver

Time-løst elektrospray-ionisering Hydrogen-deuterium Veksling massespektrometri for å studere Protein struktur og dynamikk

Løse affinitetsrenset protein komplekser av Blå Native PAGE og Protein korrelasjon Profiling

Massespektrometri og Luminogenic baserte tilnærminger for å karakter Fase I Metabolsk kompetansen<em> In Vitro</em> Cell Cultures

Eksempel forberedelse til masse massespektrometri-baserte identifikasjon av RNA-bindende områder

Dyp proteom profilering av isobar merking, omfattende flytende Ture, massespektrometri og Software-baserte kvantifisering

Korrekturlesing og DNA reparasjon analysen Single nukleotid forlengelse og MALDI-TOF massespektrometri analyse

Måling og tolke oksygen forbruk priser helt Fly hodet segmenter

Analyse av proteinfolding, Transport og nedbrytning i levende celler av radioaktivt puls Chase

Påvisning av protein ubiquitination nettsteder av peptid berikelse og masse spektrometri

Read Article