Isolamento de Drosophila melanogaster Testes

Biology
 

Summary

Testículos Drosophila melanogaster pode ser rápida e eficiente isoladas dos machos adultos usando agulhas de dissecção. Com a prática, pode-se facilmente isolar em um ou dois dias uma quantidade de testes suficientes para a análise de DNA ou RNA por seqüenciamento de alto rendimento ou mais tradicionais métodos de biologia molecular ou de proteínas para ensaios de anticorpo ou enzima-based.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Zamore, P. D., Ma, S. Isolation of Drosophila melanogaster Testes. J. Vis. Exp. (51), e2641, doi:10.3791/2641 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Os testículos de Drosophila melanogaster fornecer um importante modelo para o estudo de manutenção de células-tronco e diferenciação, a meiose, e soma-germline interações. Testículos são normalmente isoladas de machos adultos 0-3 dias após a eclosão do caso pupal. Os testículos de tipo selvagem moscas são facilmente distinguidos de outros tecidos, porque eles são o amarelo, mas os testículos de branco moscas mutantes, um fundo genético comum para experiências de laboratório são similares em forma e cor para o intestino da mosca. Realizar a dissecção de uma lâmina de vidro com um fundo preto torna a identificação dos testículos consideravelmente mais fácil. Testículos são removidos da voa usando agulhas de dissecção. Comparação com protocolos que utilize uma pinça para dissecção dos testículos, o nosso método é muito mais rápido, permitindo que um indivíduo bem praticada para dissecar testículos 200-300 do tipo selvagem voa por hora, produzindo 400-600 testículos. Testículos de moscas brancas ou de mutantes que reduzir o tamanho dos testículos são mais difíceis de dissecar e normalmente produzem 200-400 testes por hora.

Protocol

  1. Faça uma lâmina de vidro com um fundo preto: Corte papel 20 # branco para o mesmo tamanho que a lâmina de microscópio. Lado uma cor do papel preto deslize tamanho usando um marcador permanente (por exemplo, a Sharpie). Aplicar cola branca (Elmer) para o lado negro e aderir o papel para o slide. O slide pode ser reutilizado. Usando ¾ "tape label (Fisherbrand), assegurar a lâmina de microscópio, com o lado de vidro para cima, para o bloco de voar CO 2 para corrigi-lo no lugar.
  2. Coletar 0-3 dias moscas macho velho.
  3. Prepare um balde de gelo, tampão fosfato (PBS), agulhas de dissecção.
  4. Anestesiar 5-10 voa usando um fluxo de CO 2 e transferi-los a partir da garrafa ou frasco para a plataforma de voar perto da lâmina de microscópio.
  5. Pipetar 50 ul ~ gelada PBS em uma queda no meio da lâmina de microscópio.
  6. Gentilmente pegar uma mosca do sexo masculino com a agulha de dissecação por imersão a agulha de dissecação em PBS, toque suave no lado ventral (isto é, perto das asas) da mosca-lo com a agulha no lugar gota de PBS.
  7. Coloque uma agulha no meio da mosca, entre o tórax eo abdômen, empurrando para baixo com firmeza. Coloque a outra agulha entre a sexta (A6) e (A7), sétimo segmentos abdominais (as listras segundo e terceiro do fundo); puxe o abdômen de distância do tórax.
  8. Tease os testículos para além de outros órgãos, especialmente o intestino. Especialmente em mutantes branco, testículos e intestino parecem semelhantes. Principais diferenças são que os testículos sempre vêm em pares, cada testículo tem um padrão de espiral e é mais do que na cor branca intestino.
  9. Armazenar os testículos na gelada PBS em um tubo de microcentrífuga de polipropileno.

Resultados representativos:

Figura 1
Figura 1. Vista dorsal do sistema reprodutor masculino, a partir de flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flubase atribuição:... "Depois de A Figura 38 na página 508 de Miller (1950) A. Miller A anatomia interna e histologia da imago de Drosophila melanogaster Em M. Demerec, editor, Biologia da Drosophila, capítulo 6, páginas 420 - 534. Cold Spring Harbor Laboratory Press, edição fac-similar de 1994. Copyright 1994 por Cold Spring Harbor Laboratory Press. Usado com permissão tipo de Cold Spring Harbor Laboratory (CSHL) Press. Ver http://www.cshlpress.com ".

Discussion

Nós fornecemos um protocolo para isolar os testículos de adultos do sexo masculino Drosophila melanogaster. Porque a técnica exige uma coordenação de duas mãos, a habilidade só vem com a prática.

Disclosures

Não há conflitos de interesse declarados.

Acknowledgments

Os autores agradecem Vasia Vagin para introduzir esta técnica em nosso laboratório.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Dissecting needle Tool Fisher Scientific S17346
Micro Slides, Plain Tool Fisher Scientific 12-553
Microscope Light Tool Schott AG KO-1500
CO2 pad Tool Genesee Scientific 59-172
Benchtop Flowbuddy Complete System Tool Genesee Scientific 59-122WCU
Bubble Humidifier Tool Salter Labs 7100
Ball filler needle Tool Genesee Scientific 54-119
¾” Label Tape Supply Fisher Scientific 15-901-5B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Singh, S. R., Hou, S. X. Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell. Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).

Comments

2 Comments

  1. Hello I am a doctoral student in genetics and biochemistry, very much of your work. as I also work with Drosophila, I wonder if it is possible to perform the comet assay in Drosophila gut and silver nitrate. Do you have a protocol?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 20, 2011 - 3:51 PM
  2. Awesome video. I just made a post about http://www.thebugsquad.com/fruit-flies/drosophila-melanogaster">drosophila melanogaster, I am sure that your visitors will find the information relevant.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 19, 2012 - 10:01 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics