손상의 감각 오르간 전구체 세포 라이브 셀 이미징 Drosophila Pupae

Neuroscience
 

Summary

이 비디오에서는, 우리는 불균형 그대로의 감각 기관의 전구 세포와 표피 세포를 나누지 라이브 셀 이미징에 대한 방법을 설명

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Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).

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Abstract

그린 형광 단백질 (GFP)의 발견 이후, 기본적인 생물 학적 메커니즘을 이해하기위한 도구로 라이브 셀 이미징의 사용에 혁명적인 변화가왔다. 눈에 띄는 진전은 누구 광범위한 툴킷 돌연변이 유전자 변형 라인의 evolutionarily - 보존 발달 및 세포 생물 학적 메커니즘을 연구하는 편리한 모델을 제공합니다 Drosophila에서 특히 분명했습니다. 우리는 Drosophila에서 성인 말초 신경계 (PNS)의 제어 셀 운명 사양. 표지의 머리, 흉부, 복부, 다리 및 성인 비행 중 날개 개별 mechanosensory 장기 것을 Bristles하고, 연구하고있다는 메커니즘을 이해에 관심이있는 노치 - 의존 세포 운명 결정의 메커니즘을 이해하기위한 모델 시스템으로. microchaetes (또는 작은 bristles)의 감각 기관 전구체 (SOP) 세포는, pupal 흉부의 상피를 통해 배포되며, pupariation의 발병 후 처음 12 시간 동안 지정됩니다. 규격 후, SOP 세포가 유사 분열 동안 한 딸 세포로 감각 세포 운명의 결정자를 segregating, 분열 시작. 노치 신호 경로의 휴대 자율 억제제와 같은 감각 기능.

여기, 우리는의 조합을 사용하여 손상 pupal 흉부 이내 SOP 세포와 그 자손의 단백질 역학을 수행하는 방법을 보여 조직 특정 Gal4 드라이버와 GFP - 태그 융합 단백질 1,2.이 기법은 고정 조직이나 교양을 통해 이점을 가지고 explants 그것이 우리가 신경 전구체의 규격에서 성장과 장기의 단말기 분화하는 기관의 전체 개발을 수행하실 수 있습니다 때문입니다. 따라서 직접 터미널 차별화의 변화에​​ 셀 동작의 변화와 상호하실 수 있습니다. 또한, 우리는 돌연변이 또는 wildtype 조건 mitotic의 솝스에 태그 단백질의 역학을 평가하는 repressible 세포 마커 (MARCM) 시스템 모자이크 분석 라이브 이미징 기술을 조합하여 사용할 수 있습니다. 이 기법을 사용, 우리와 다른 비대칭 세포 분열의 조절과 세포 SOP (예제 참조 1-6,7, 8을 포함)에서 노치 신호 전달 활성화의 통제에 소설 통찰력을 밝혀있다.

Protocol

Discussion

Disclosures

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Acknowledgements

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scotch double stick tape
Glass slide
18mmX18mm coverslip
Forceps
Whatman paper
Silicone vacuum grease Dow Corning
5 ml syringe
Pipetter
Confocal or epifluorescence microscope

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References

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